一种重组人单链白细胞介素-12的构建方法技术

白细胞介素１２（ＩＬ－１２）是至今已知对免疫活性细胞诱导和调节作用最强的多功能细胞因子，ＩＬ－１２只有在Ｐ４０和Ｐ３５以１∶１比例形成异二聚体时才有活性。本发明专利技术提供了一种简单方法，使ＩＬ－１２的Ｐ４０和Ｐ３５两条亚基能共同表达、能使Ｐ４０和Ｐ３５以１∶１形式进行自然组合的重组人单链白细胞介素－１２（ｒｈｓｃＩＬ－１２）并保持原有的生物活性。本发明专利技术可在生物工程领域的生产单位实施，可广泛应用于免疫和瘤肿疾病的治疗。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种由生物技术制备白细胞介素12(IL-12)的方法，特别是涉及一种重组人单链白细胞介素-12(rhscIL-12)的构建方法，白细胞介素12(IL-12)是至今已知对免疫活性细胞诱导和调节作用最强的多功能细胞因子，天然IL-12是由两条多肽链通过二硫键共价结合的异二聚体蛋白，重链为P40蛋白，轻链为P35蛋白，IL-12只有在P40和P35以1∶1比例形成异二聚体时才有活性。本专利技术前一些研究人员通过分别构建P40和P35亚基的质粒进行共转染或在单一质粒中构建分别含P40和P35表达元件的载体，也有人用含有内部核糖体进入位点序列的转录病毒中多顺反子转录子表达P40和P35，或将P40和P35cDNA分别插入重组腺病毒载体的E1区和E3区进行表达。这些方法不但复杂，而且很难达到P40和P35以1∶1比例形成异二聚体，无法控制产生有活性的异二聚体蛋白。本专利技术的目的是提供一种简单的使IL-12的P40和P35两条亚基能共同表达、并能使P40和P35以1∶1形式进行自然组合的重组人单链白细胞介素-12(rhscIL-12)的构建方法。本专利技术的目的是通过以下方式本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人单链白细胞介素－１２的构建方法，包括ｈＩＬ－１２（人白细胞介素１２）Ｐ４０和Ｐ３５亚单位ｃＤＮＡ的克隆、ｈＩＬ－１２Ｐ４０和Ｐ３５亚单位的基因融合、ｒｈｓｃＩＬ－１２（重组人单链白细胞介素－１２）真核表达载体的构建，其特征在于：通过重组ＰＣＲ技术将ｈＩＬ－１２的Ｐ４０亚单位编码区ｃＤＮＡ序列的３′端和Ｐ３５亚单位编码区ｃＤＮＡ序列的５′端，通过一个疏水性多肽的人工接头（Ｌｉｎｋｅｒ）进行拼接，构建ｒｈＩＬ－１２（重组人白细胞介素１２）Ｐ４０－Ｌｉｎｋｅｒ－Ｐ３５单链融合基因，并在真核细胞中表达得到ｒｈｓｃＩＬ－１２（重组人单链白细胞介素－１２）。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：司履生，王一理，
申请(专利权)人：西安医科大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]