用于胰岛素依赖型糖尿病基因治疗中的重组载体及治疗性组合物制造技术

本发明专利技术公开了用于胰岛素依赖型糖尿病的基因治疗中的重组载体和治疗性组合物。以脂质体介导方式将具有Ｋ１４启动子基因的β－半乳糖苷酶表达载体与果蝇Ｐ转座酶表达辅助载体一起注射进鼠皮肤后，测得该酶基因在角质形成细胞层表达。因具有增强效果和组织特异性，Ｋ１４启动子用于在角质形成细胞中表达人胰岛素基因，提示了胰岛素依赖型糖尿病的新基因治疗方法。当与Ｐ－因子表达辅助载体组合将具有Ｋ１４启动子的人胰岛素表达载体注射进缺少胰腺β－细胞的糖尿病小鼠皮肤中时，小鼠血糖水平保持在正常范围。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种制备胰岛素表达载体的方法，其中将胰岛素基因和Ｋ１４启动子基因一起插入ｐＵＣｈｓｎｅｏ，该胰岛素基因通过使用以下序列Ⅰ代表的一对胰岛素引物从人基因组ＤＮＡ中扩增，该Ｋ１４启动子基因通过以下序列Ⅱ代表的一对Ｋ１４启动子引物扩增： 胰岛素正向引物：５′ＣＣＴＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＣＡＧＡＧＣＴＣＴＧＴＣＣＴＴＣＴ３′ 胰岛素反向引物：５′ＧＣＡＧＧＧＣＴＧＧＴＴＣＴＡＧＡＧＣＴＴＴＡＴＴＣＣＡＴＣ３′ （Ⅰ） Ｋ１４启动子正向引物：５′ＡＴＴＧＣＴＧＡＡＧＴＴＴＴＧＡＴＣＴＡＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡ３′ Ｋ１４启动子反向引物：５′ＣＴＧＡＧＴＧＡＡＧＡＧＡＡＧＧＡＧＣＴＣＧＧＧＴＡＡＡＴＴ３′ （Ⅱ）。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：徐东祥，
申请(专利权)人：徐东祥，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]