环介导等温扩增技术检测三种泌尿生殖道支原体的方法技术

本发明专利技术公开了三种人类常见泌尿生殖道感染支原体的LAMP检测方法及其专用引物与试剂盒。用于对解脲脲原体(UU)、生殖支原体(MG)和人型支原体(MH)的进行等温扩增。LAMP引物根据UU、MG和MH的特异保守序列设计，每组引物包含4条寡核苷酸（说明书表1、2和3）。用于泌尿生殖道支原体时，肉眼观察呈白色沉淀；阳性反应加入SYBR GREEN后，在紫外灯下观察荧光绿色显著增强。实时浊度仪检测结果显示产物浊度随反应时间延长而增加，经凝胶电泳检测后呈梯型条带。本发明专利技术为支原体检测提供了一个新的技术平台，待测样本除用于商品化试剂盒提取的DNA或纯化DNA外，亦适用于以煮沸法为代表的粗提DNA，适宜在基层单位、现场监测和床旁检测中推广应用。

Detection of three genitourinary tract mycoplasma by loop mediated isothermal amplification

The invention discloses three LAMP detection methods for mycoplasma infection of human common genitourinary tract and its special primers and kits. It was used for isothermal amplification of Ureaplasma urealyticum (UU), Mycoplasma genital mycoplasma (MG) and Mycoplasma hominis (MH). LAMP primers were designed based on the specific conserved sequences of UU, MG and MH. Each primer contained 4 oligonucleotides (instructions 1, 2 and 3). For Mycoplasma, observed a white precipitate; positive reaction joined SYBR GREEN, green fluorescence was observed under UV light was significantly enhanced. The results of real time turbidimeter test showed that the turbidity of the products increased with the time of reaction, and the ladder type was found after the gel electrophoresis. The invention provides a new technology platform for mycoplasma detection. The samples to be tested are not only used for the extraction of DNA or purified DNA from commercial kits, but also for crude DNA extracted by boiling method, which is suitable for popularization and application in grass-roots units, field monitoring and bedside detection.

【技术实现步骤摘要】
环介导等温扩增技术检测三种泌尿生殖道支原体的方法
本专利技术属于以等温扩增为代表的分子生物学检测方法在三种人类常见泌尿生殖道感染支原体方面的应用，即解脲脲原体、生殖支原体和人型支原体的环介导等温扩增检测技术及其专用引物、检测方法和试剂盒。
技术介绍
支原体(Mycoplasma)是介于细菌与病毒之间的一种原核细胞型微生物。迄今为止，能够导致人体感染的支原体大约有20种，其中引起人类泌尿生殖道感染的支原体主要有三种，即解脲脲原体(UreaplasmaUrealyticum,UU)、生殖支原体(MycoplasmaGenitalium,MG)和人型支原体(MycoplasmaHominis,MH)。研究显示，UU、MG和MH是引起非淋菌性泌尿生殖道炎(nongonococcalurethristis,NGU)的主要病原体。在欧美国家，NGU感染已居性传播疾病之首。我国发病率NGU发病率也在不断增加，尤其是支原体混合感染情况，越来越受到人们的重视。支原体感染泌尿生殖道后能引起尿道炎、慢性前列腺炎、急性输卵管炎、子宫内膜炎等疾病，甚至导致习惯性流产和死胎。有研究报道，孕妇宫颈感染UU与不良妊本文档来自技高网...

【技术保护点】
解脲脲原体(Ureaplasma Urealyticum, UU)、生殖支原体(Mycoplasma Genitalium, MG) 和人型支原体(Mycoplasma Hominis, MH) 的LAMP检测靶点：用于对人类泌尿生殖道感染常见支原体进行LAMP检测的专用引物，即根据UU（NCBI GenBank Accession M36190.1）、MG（NCBI GenBank NR_074611.1）和MH（NCBI GenBank AJ243692.1）的特异性保守靶序列设计的，用以定性检测待测样品中的UU、MG和MH。

【技术特征摘要】
1.解脲脲原体(UreaplasmaUrealyticum,UU)、生殖支原体(MycoplasmaGenitalium,MG)和人型支原体(MycoplasmaHominis,MH)的LAMP检测靶点：用于对人类泌尿生殖道感染常见支原体进行LAMP检测的专用引物，即根据UU（NCBIGenBankAccessionM36190.1）、MG（NCBIGenBankNR_074611.1）和MH（NCBIGenBankAJ243692.1）的特异性保守靶序列设计的，用以定性检测待测样品中的UU、MG和MH。2.根据权利要求1所述的LAMP检测靶点，设计了UU、MG和MH的专用引物，详见说明书中表1、2和3，每套引物包含4条寡核苷酸序列，即F3、B3、FIP和BIP。3.一种UU、MG和MH的LAMP检测方法，主要包括以下步骤：反应过程以待测物的基因组DNA为模板，在权利要求1或2所述专用引物的引导下进行LAMP扩增；反应结束后肉眼观察产物是否浑浊；与阴性对照相比，明显出现浑浊物的样本为阳性，阳性产物经离心后在试管底部出现沉淀物若无浑浊现象，则为阴性标本；亦可在反应液中添加1µl的SYBRGREEN（1:100稀释），在紫外光激发下观察结果，产物呈荧光绿色表示该样...

【专利技术属性】
技术研发人员：谷雅君，王毅超，刘运德，
申请(专利权)人：天津医科大学，
类型：发明
国别省市：天津,12