人类泌尿生殖道支原体感染检测方法及其诊断试剂盒技术

本发明专利技术提供了用于检测由支原体引起的感染、特别是人类泌尿生殖道感染的方法和试剂盒。通过与固定的各种病理状态相关的各种抗原决定簇的混合物进行反应来检测受诊断对象的生物样品中特定抗支原体抗体的存在。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对由支原体引起的感染、特别是人类泌尿生殖道感染的检测。本专利技术提供了用于诊断由大范围的支原体菌株造成的泌尿生殖道感染的试剂盒。
技术介绍
支原体是常常在人和动植物中造成隐性感染的独特细菌群。在动物中，它们作为发病和死亡的病原体而臭名昭著。在人类中，许多紊乱与支原体感染相关，一个实例是其准确诊断仍然很难的支原体肺炎或常见性传播感染[见例如，Merck Manual，第17版，(1999)1326页]。在文献中积累了越来越多与支原体发病机理有关的证据，但还没有一般性可用的能显著促进泌尿生殖道支原体疾病的分析的完善测试。WO 07/033171描述了基于与RNA探针的杂交的对样品中支原体存在的可能检测。WO94/03810描述了基于来自患者样品的抗支原体抗体对标准支原体培养物的效果来诊断受试对象中此前支原体感染的方法。EP 278340描述了肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)膜抗原在诊断支原体感染中的应用。可靠快速的诊断测试的缺乏使得很难鉴定作为病因的泌尿生殖道支原体，从而造成低估其在疾病中的作用和因此缺乏诊断和适当的治疗。特别是，已显示泌尿生殖道支原体参与许多疾病和病理状态，包括妊娠并发症(早产、习惯性流产)、早产儿的发病和死亡、不孕(主要是男性因素)、尿道炎和前列腺炎、反应性关节炎以及近来的类风湿性关节炎。泌尿生殖道支原体在人类疾病的发展中的作用仅在过去十年才出现，并且由于标准化抗原的缺乏而使得很难确定支原体血清特征，而市场上没有可利用的实用测试使其更加复杂。本专利技术人也已展示了测定抗支原体抗体在诊断感染和预测数种人类病理的风险中的重要性和重大意义[见例-->如，Horowitz S.等：J.Rheumatol，27(2000)2747-2753]。尽管各国引入了各种“自制”技术，但目前尚未获得有效且可靠的用于检测临床样品中人类泌尿生殖道支原体的通用诊断测试。如本领域技术人员所知，可利用的技术受到各种缺陷的影响，包括例如有限的灵敏度和有限的特异性(出现假阳性或假阴性结果)。因此，本专利技术的一个目的是提供用于检测由支原体造成的泌尿生殖道感染的可一般性适用的试剂盒。本专利技术的另一个目的是提供用于通过合适的抗原来检测由特定支原体造成的泌尿生殖道感染的方法。本专利技术的再一个目的是提供具有更少量的假阳性和/或假阴性结果的用于诊断支原体泌尿生殖道感染的方法和试剂盒。本专利技术的又一个目的是提供能区分仅由支原体建群但未发展疾病的人与发展了感染/传染病/感染后病理的人的方法和试剂盒。本专利技术的其它目的和优点将随着说明的展开而出现。
技术实现思路
本专利技术提供了通过测定取自待诊断患者的生物样品中特定抗支原体抗体的水平来检测泌尿生殖道支原体感染的方法，所述方法包括：i)提供来自多种病理状态的患有支原体泌尿生殖道感染的患者的多种生物标本；ii)从获自患者的所述数个支原体菌株制备全细胞制备物；iii)提供(来自各个种的)多种支原体抗原决定簇以用作患者样品中的特定抗体的检测材料；iv)使所述混合抗原结合至免疫测试表面上；v)使患者生物样品与步骤iv所述表面结合，从而使最终存在于所述样品中的抗支原体抗体结合至所述表面上；和vi)使所述表面与用于检测人类抗体的试剂接触。因而，通过测定相同种的广谱(多种)特定抗体来进行感染的确定。所述免疫测试表面是指用于本领域中的蛋白结合表面，该表面通常包含具有对蛋白的强亲和力且即使在洗涤步骤期间也不将其释放的聚合物；所述聚合物可以包含经修饰的天然材料或合成材料。所述多个人株优选包含各自感染有一种或多种选自由解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum)、微小脲原-->体(Ureaplasma parvum)、人型支原体(Mycoplasma hominis)、发酵支原体(Mycoplasma fermentans)和生殖支原体(Mycoplasma genitalium)组成的组中的支原体物种的至少6位患者。在本专利技术的一个优选实施方式中，将通过离心从(各个菌株的)支原体培养物获得的所述支原体细胞浓缩团块超声处理并将来自数个菌株的全细胞超声制备物(以等蛋白量)混合以形成“混合抗原”制备物。至关重要的是每个包含蛋白抗原的混合物获自从患有已知病理(即，尿道炎、妊娠并发症、不孕、关节炎等)的患者分离出的菌株且蛋白抗原获自多种病理，从而提供了疾病中表达的抗原群的最佳可能表现形式。所述免疫测试表面可以包括选自孔板和聚合物片的物品或免疫测试设计领域内已知的其它手段。所述试剂可包含与产生颜色或荧光反应的酶偶联的抗人抗体和酶底物或能使抗体可视化的其它手段。本专利技术涉及从患有急性支原体泌尿生殖道感染的多人获得的混合支原体蛋白质类抗原。术语蛋白质类涉及根据本专利技术获得的包含源自支原体细胞的蛋白成分且通常参与引发人体内抗支原体感染的免疫响应的抗原组合物；所述组合物可以包含可能源自支原体细胞且通常作为脂蛋白出现的其它成分(即脂质)。本专利技术涉及源自从患有支原体感染的多位患者分离的多个支原体菌株的混合抗原在检测泌尿生殖道感染中的应用，该应用覆盖了大范围的支原体种和菌株。本专利技术提供了一种方法，该方法不仅用于诊断人类患者中与支原体感染相关的泌尿生殖道疾病，而且对所述抗体水平进行定量并比较患者样品中与未患急性支原体疾病的参照者的标准样品中所述抗体的水平。本专利技术涉及一般性用于检测由支原体造成的人类泌尿生殖道感染并最终覆盖大范围的菌株和种的新型试剂盒，所述试剂盒包含：i)结合于基质上的混合抗原，所述混合抗原源自从患有急性支原体感染的多人分离的支原体；ii)使人类抗体的存在被可视化的试剂；和iii)使用说明。所述基质可以是包含如硝酸纤维素或合适的聚合物等蛋白结合聚合物的条带，所述条带可能包含用于检测人类抗支原体抗体的存在的片或孔。所-->述试剂盒可以包含例如各自表征一个样品的多个条带，或用于并行表征多个样品的装置。样品可以包含如血清等体液或其它。所述试剂是免疫测试领域内已知的，并且可以包含抗人抗体与酶和酶底物等的偶联物。本专利技术通过提供包括可靠地检测对泌尿生殖道支原体的免疫响应的存在然后对所述患者施用已知有效的抗生素的方法，使得能够在需要用于支原体泌尿生殖道感染的治疗的患者中跟踪这种治疗的成功。所述抗生素可包括但不限于阿奇霉素、四环素、红霉素和克拉霉素。附图说明通过下列实施例并参考附图，本专利技术的上述及其它特征和优点将变得更加显而易见，其中：图1是显示由两种抗原在血清中确定的抗体水平的图；图2是显示用两种抗原获得的结果之间的匹配百分比的图；和图3是展示两种抗原类型的性能差异的图，该图强调了“新”(专利技术)相对于此前由本专利技术人进行的自制测试的优越性。具体实施方式现已发现，采用获自处在疾病状态的患者的支原体抗原、特别是如果采用来自多位患者的样品的混合物的支原体抗原，可产生优异的泌尿生殖道支原体感染检测用免疫测试。本专利技术提供了具有惊人可靠性和更少量的假阳性结果的诊断方法。在第一阶段，开发了用于检测血清和包括例如羊水、滑液、脑液、精液和气管灌洗液等的其它体液中特定抗支原体抗体的水平的ELISA型免疫测试。所述测试设计包括涂布有支原体抗原的微量滴定板，所述支原体抗原在本实验室中从获自国际收藏库(ATCC)的泌尿生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测取自待诊断患者的生物样品中的泌尿生殖道支原体感染的方法，所述方法包括　ｉ）提供来自多种病理状态的患有支原体泌尿生殖道感染的患者的多种生物标本；　ｉｉ）从获自患者的所述数个支原体菌株制备全细胞制备物；　ｉｉｉ）提供（ 来自各个种的）多种支原体抗原决定簇以用作患者样品中的特定抗体的检测材料；　ｉｖ）使所述混合抗原结合至免疫测试表面上；　ｖ）使患者生物样品与步骤ｉｖ所述表面结合，从而使最终存在于所述样品中的抗支原体抗体结合至所述表面上；和　 ｖｉ）使所述表面与用于检测人类抗体的试剂接触；由此检测由来自广谱菌株和种的支原体剂造成的感染。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】IL 2007-5-3 1829581.一种检测取自待诊断患者的生物样品中的泌尿生殖道支原体感染的方法，所述方法包括i)提供来自多种病理状态的患有支原体泌尿生殖道感染的患者的多种生物标本；ii)从获自患者的所述数个支原体菌株制备全细胞制备物；iii)提供(来自各个种的)多种支原体抗原决定簇以用作患者样品中的特定抗体的检测材料；iv)使所述混合抗原结合至免疫测试表面上；v)使患者生物样品与步骤iv所述表面结合，从而使最终存在于所述样品中的抗支原体抗体结合至所述表面上；和vi)使所述表面与用于检测人类抗体的试剂接触；由此检测由来自广谱菌株和种的支原体剂造成的感染。2.如权利要求1所述的方法，其中，从来自6位患者的至少6个分离物制备所述多种抗原。3.如权利要求1所述的方法，其中，所述多个人株优选包括各自感染有一种或多种选自由解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum)、微小脲原体(Ureaplasma parvum)、人型支原体(Mycoplasma hominis)、发酵支原体(Mycoplasma fermentans)和生殖支原体(Mycoplasma genitalium)组成的组中的支原体物种的至少6位患者。4.如权利要求1所述的方法，其中，所述蛋白质类组合物的制备包括通过采用浓缩支原体细胞的培养、洗涤和...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒拉米斯霍罗威茨，
申请(专利权)人：莫尔研究应用有限公司，
类型：发明
国别省市：IL[以色列]