基于智能恒温扩增技术检测副溶血弧菌的引物组、试剂盒及方法技术

一种基于智能恒温扩增技术检测副溶血弧菌的引物组、试剂盒和方法。检测引物组包括TP引物、FP引物、BP引物、OP1引物和OP2引物；检测试剂盒包括引物液、反应液、Bst DNA聚合酶、错配结合蛋白、显色剂和对照。其检测方法是通过提取待检DNA，利用具有链置换活性的DNA聚合酶活性，采用四条特异性引物及一种错配结合蛋白，在60～65℃对样品DNA模板进行扩增，可检测到DNA的pg级，其鉴定方式是采用在反应体系中加入

Primer group, kit and method for detection of Vibrio parahaemolyticus based on intelligent constant temperature amplification

A primer group, kit and method for the detection of Vibrio parahaemolyticus based on the intelligent constant temperature amplification technique. Primer group includes TP primers and FP primer and BP primer and OP1 primer and OP2 primer; primer kit including liquid, Bst reaction liquid, DNA polymerase, mismatch binding protein, chromogenic agent and control. The detection method is tested by extracting DNA with strand displacement activity DNA polymerase activity by using four specific primers and a mismatch binding protein, 60~65 degrees in the sample DNA templates were amplified by PG DNA can be detected, the identification method is used to join in the reaction system

【技术实现步骤摘要】
基于智能恒温扩增技术检测副溶血弧菌的引物组、试剂盒及方法
本专利技术属于分子生物学
，涉及一种基于智能恒温扩增技术检测副溶血弧菌的引物组、试剂盒及方法。
技术介绍
副溶血弧菌(Vibrdopmrahaemolyticus)是一种重要的食源性致病菌，发病呈世界性分布，人们食用受该菌污染的食物后会引起腹泻、肠痉挛、呕吐等，重症患者还会脱水、休克昏迷，甚至死亡。目前，副溶血弧菌引起食物中毒的发生规模以及人群暴露规模呈明显上升趋势，已成为我国首要的食源性致病菌。副溶血弧菌是进出口水产品检测的重要项目，在饮用水、食品检测和食品中毒源调查、传染病源调查等工作中，也经常需要对该菌进行检测。以细菌培养为基础的传统生化鉴定方法，费力耗时、结果提供不及时，有时结果不准确。随着分子生物学的发展，出现了众多以分子生物学技术为基础的鉴定方法，如PCR-SSCP，PCR-RFLP，DNA探针、DNA芯片、DNA直接测序等，以其高效、特异等优点而受到青睐，但对检测人员技术水平要求高、仪器昂贵、检测周期长，为满足快速鉴别分类的需求，为科学研究提供快速方便的方法，缩短副溶血弧菌鉴别时间，降低鉴别技术难度和费用一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于智能恒温扩增技术检测副溶血弧菌的引物组，包括TP引物、FP引物、BP引物、OP1引物和OP2引物，其核苷酸序列分别如下所示:FP引物：TTTATATATATATAAATCCGCTCTACAACTGGTP引物：CTGGGCAGTTGTTAGCGCGATGTATTGGTCBP引物：CGGCGCGGCTGGTGOP1引物：TTGCCAAAGCGAAGAACCOP2引物：ACTTGATCACCAACCCCT。

【技术特征摘要】
1.一种基于智能恒温扩增技术检测副溶血弧菌的引物组，包括TP引物、FP引物、BP引物、OP1引物和OP2引物，其核苷酸序列分别如下所示:FP引物：TTTATATATATATAAATCCGCTCTACAACTGGTP引物：CTGGGCAGTTGTTAGCGCGATGTATTGGTCBP引物：CGGCGCGGCTGGTGOP1引物：TTGCCAAAGCGAAGAACCOP2引物：ACTTGATCACCAACCCCT。2.如权利要求1所述的基于智能恒温扩增技术检测副溶血弧菌的引物组，其特征在于：扩增反应时，TP引物、FP引物、BP引物、OP1引物和OP2引物的摩尔比为：8：8：4：1：1。3.一种基于智能恒温扩增技术检测副溶血弧菌的试剂盒，其特征在于，该检测试剂盒中含有如权利要求1或2所述的智能恒温扩增引物组。4.根据权利要求3所述的基于智能恒温扩增技术检测副溶血弧菌的试剂盒，其特征在于，还包括以下成分的部分或者全部：(1)DNA聚合酶；(2)错配结合蛋白；(3)智能恒温扩增反应液；(4)荧光显色剂；(5)阳性对照和阴性对照。5.根据权利要求4所述的基于智能恒温扩增技术检测副溶血弧菌的试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶为BstDNA聚合酶；所述错配结合蛋白为TapMuts错配结合蛋白。6.根据权利要求4所述的基于智能恒温扩增技术检测副溶血弧菌的试剂盒，其特征在于：所述智能恒温扩增反应液含有：28mMdNTPs、10％DMSO、40mMTris-HCl(pH8.8)、20mMKCl、20mM(NH4)2SO4、16mMMg...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶蕾，石磊，闫鹤，陈洵，常彦磊，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44