一种NK细胞无血清培养基制造技术

本发明专利技术涉及一种NK细胞无血清培养基及其配制方法，该配制方法包括将脂肪酸负载到无脂肪酸白蛋白上后，再将所获得的白蛋白溶液添加到基础培养基中，由此获得的NK细胞无血清培养基成分更稳定，功能一致性更好，不会因白蛋白的种属来源或加工批次的差异有所不同。本发明专利技术的培养基中还加入了聚肌胞，聚肌胞可诱导免疫细胞的分化、成熟或者分泌细胞因子，如IL‑12、IL‑15、TNFa、IFN‑r等，促进免疫细胞的活化增殖的能力；聚肌胞还可以促进膜结合型IL‑15Ra表达的能力，IL‑15Ra可与IL‑15紧密结合，这种结合状态的IL‑15对NK细胞有更强烈的促活化和促增殖的效应。本发明专利技术提供的NK细胞无血清培养基更适合高效培养NK细胞，提高增值倍数。

A serum-free medium for NK cells

The present invention relates to NK cells in serum-free medium and its preparation method, including the preparation methods to free fatty acid albumin on fatty acid load after adding albumin solution obtained to the basic culture medium, serum medium composition more stable without the NK cell function, better consistency, not because albumin species differences between different batches or processing. The culture medium was also added to poly, poly can induce the differentiation and maturation of immune cells or secrete cytokines, such as IL 12, IL 15, TNFa, IFN R, promote the activation and proliferation ability of cells; polycytid can also promote membrane bound IL the expression of 15Ra, IL 15Ra integrated with IL 15, the binding state of IL 15 on NK cells have a stronger activation and proliferation promoting effect. The NK cell serum-free medium provided by the invention is more suitable for efficient culture of NK cells and increases the multiplier value.

【技术实现步骤摘要】
一种NK细胞无血清培养基
本专利技术涉及一种NK细胞无血清培养基及其配制方法，属于细胞培养

技术介绍
无血清培养基是指不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基，可以应用于培养免疫细胞，例如淋巴细胞(例如，T淋巴细胞、B细胞、NK细胞等)、树突状细胞(也称DC细胞)、单核/巨噬细胞等。通常来说，免疫细胞在体外存活和扩增所需要的营养物质包括：白蛋白、转铁蛋白、胰岛素、氨基酸、维生素、糖、脂质、无机盐、生长因子等。这些成分中，白蛋白对细胞生长和存活的影响最大，也是功能和组成最复杂的成分。而无血清培养基中，白蛋白所发挥的功能主要是由它所携带的脂肪酸和微量元素等成分决定的。不同来源的白蛋白，例如不同种属的牛白蛋白和人白蛋白，它们所携带的脂肪酸差异很大；例如，重组白蛋白与人血白蛋白所携带的脂肪酸不同；例如在重组白蛋白中，水稻胚乳提取的与酵母菌发酵生产的重组白蛋白所携带的脂肪酸不同；不同产地的，也有不同。另外，后期生产加工过程也会造成白蛋白所携带的脂肪酸差异，例如不同生产厂家生产的、不同的批次的白蛋白所携带的脂肪酸也有很大的不同。总之，以上这些差异就导致添加了白蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种应用于NK细胞的NK细胞无血清培养基，所述NK细胞无血清培养基包括基础培养基、适用于所述NK细胞无血清培养基的血清替代物、聚肌胞，所述血清替代物包含白蛋白、人转铁蛋白、胰岛素和胆固醇，其特征在于：所述白蛋白是通过在无脂肪酸白蛋白上负载脂肪酸而形成的；所述白蛋白是通过在无脂肪酸白蛋白上负载特定的脂肪酸而形成的；所述特定的脂肪酸由棕榈酸和/或硬脂酸、油酸和亚油酸组成；按照每1mmol无脂肪酸白蛋白添加0.4‑2mmol的棕榈酸和/或硬脂酸，0.4‑2mmol的油酸和0.4‑2mmol的亚油酸的比例，将所述特定的脂肪酸添加到所述无脂肪酸白蛋白的溶液中混合而形成；或者，所述特定的脂肪酸由棕榈酸和/...

【技术特征摘要】
1.一种应用于NK细胞的NK细胞无血清培养基，所述NK细胞无血清培养基包括基础培养基、适用于所述NK细胞无血清培养基的血清替代物、聚肌胞，所述血清替代物包含白蛋白、人转铁蛋白、胰岛素和胆固醇，其特征在于：所述白蛋白是通过在无脂肪酸白蛋白上负载脂肪酸而形成的；所述白蛋白是通过在无脂肪酸白蛋白上负载特定的脂肪酸而形成的；所述特定的脂肪酸由棕榈酸和/或硬脂酸、油酸和亚油酸组成；按照每1mmol无脂肪酸白蛋白添加0.4-2mmol的棕榈酸和/或硬脂酸，0.4-2mmol的油酸和0.4-2mmol的亚油酸的比例，将所述特定的脂肪酸添加到所述无脂肪酸白蛋白的溶液中混合而形成；或者，所述特定的脂肪酸由棕榈酸和/或硬脂酸、油酸、亚油酸和花生四烯酸组成，所述步骤二中，按照每1mmol无脂肪酸白蛋白添加0.4-2mmol的棕榈酸和/或硬脂酸，0.4-2mmol的油酸和0.4-2mmol的亚油酸的比例，所述花生四烯酸与所述亚油酸的添加量的比值为1:6～1:1，将所述特定的脂肪酸添加到所述无脂肪酸白蛋白的溶液中混合而形成。2.如权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于：所述特定的脂肪酸由棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸组成，所述硬脂酸与所述棕榈酸的添加量的比值为1:6～1:1。3.如权利要求1所述的NK细胞无血清培养基，其特征在于：所述NK细胞无血清...

【专利技术属性】
技术研发人员：武宁，谢志明，
申请(专利权)人：英普乐孚生物技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31