NK92细胞无血清培养基制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域。NK92细胞无血清培养基，以终浓度计，配方包括：L‑半胱氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、L‑苯丙氨酸1～1000mg/L、L‑谷氨酰胺1～1000mg/L、L‑甲硫氨酸1～1000mg/L、L‑赖氨酸盐酸盐1～1000mg/L、L‑酪氨酸二钠盐1～1000mg/L、L‑亮氨酸1～1000mg/L、氯化钾1～1000mg/L、D‑(+)‑葡萄糖100～10000mg/L、HEPES 100～10000mg/L。本发明专利技术优化了传统NK92细胞无血清培养基的配方，节约了成产成本，提高细胞培养的效率。

Serum-free medium of NK92 cells

The invention relates to the field of biological medicine. Serum free culture medium with a final concentration of NK92 cells, including: L formula cysteine hydrochloride monohydrate 1 ~ 1000mg/L, 1 ~ 1000mg/L, L phenylalanine L glutamine 1 ~ 1000mg/L, 1 ~ 1000mg/L, L methionine L lysine hydrochloride 1 ~ 1000mg/L, L tyrosine two sodium 1 to 1000mg/L, L leucine 1 ~ 1000mg/L, 1 ~ 1000mg/L, potassium chloride D (+) glucose 100 ~ 10000mg/L, 100 ~ 10000mg/L HEPES. The invention has optimized the formula of the traditional NK92 cell serum-free medium, thus saving the production cost and improving the efficiency of cell culture.

【技术实现步骤摘要】
NK92细胞无血清培养基
本专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及一种无血清培养基。
技术介绍
NK92细胞通常称为自然杀伤细胞。它们不像T细胞、B细胞一样，要经过免疫系统的抗原辨识反应才确定目标“出击”，感染首次发生时，NK92细胞能主动出击，杀死被感染的靶细胞。所以也被称为“天然杀手”。NK92细胞的靶细胞主要有某些肿瘤细胞、病毒感染细胞、寄生虫等，因此NK细胞是机体抗肿瘤、抗感染的重要免疫因素。ATCC推荐NK92细胞培养用MEM-α培养基+12.5％胎牛血清+12.5％马血清(参照ATCC网站上公布的培养条件)，此方法培养基中含高浓度的动物血清，生物安全性差，而且成本较高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供NK92细胞无血清培养基，以解决上述技术问题。本专利技术所解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现：NK92细胞无血清培养基，其特征在于，以终浓度计，配方包括：L-半胱氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、L-苯丙氨酸1～1000mg/L、L-谷氨酰胺1～1000mg/L、L-甲硫氨酸1～1000mg/L、L-赖氨酸盐酸盐1～1000mg/L、L-酪氨酸二钠盐1～1000mg/L、L-亮氨酸1～1000mg/L、氯化钾1～1000mg/L、D-(+)-葡萄糖100～10000mg/L、HEPES100～10000mg/L、碳酸氢钠100～10000mg/L、碳酸氢钠100～10000mg/L、氯化钠100～10000mg/L、重组人白蛋白100～10000mg/L、泊洛沙姆188100～10000mg/L、大豆蛋白100～10000mg/L、酵母粉100～10000mg/L、重组人转铁蛋白0.1～100mg/L、胰岛素0.1～100mg/L。HEPES即4-羟乙基哌嗪乙磺酸，本专利技术在配方中加入了所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸和所述碳酸氢钠充当缓冲剂能够维持培养基内pH值的恒定。所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸和碳酸氢钠为缓冲剂。本专利技术优化了传统NK92细胞无血清培养基的配方，节约了成产成本，提高细胞培养的效率。L-亮氨酸能促进细胞生长、提高免疫机能减少被病毒感染的几率。配方中余量为蒸馏水。所述配方还包括2'-脱氧胞苷0.1～100mg/L、2'-脱氧鸟苷0.1～100mg/L、2'-脱氧腺苷0.1～100mg/L、5′-三磷酸腺苷二钠盐水合物0.1～100mg/L、胞苷0.1～100mg/L、鸟苷0.1～100mg/L、尿苷0.1～100mg/L、腺苷0.1～100mg/L、胸苷0.1～100mg/L、次黄嘌呤钠0.1～100mg/L、甘氨酸0.1～100mg/L、L-丙氨酸1～1000mg/L、L-谷氨酸1～1000mg/L。次黄嘌呤钠能进行生物发酵。甘氨酸用作缓冲剂。L-丙氨酸促进细胞培养。L-谷氨酸促进氧化过程。所述配方还包括L-抗坏血酸1～1000mg/L、L-脯氨酸1～1000mg/L、L-色氨酸1～1000mg/L、L-丝氨酸1～1000mg/L、L-苏氨酸1～1000mg/L、L-天冬氨酸1～1000mg/L、L-天冬酰胺一水合物1～1000mg/L、L-缬氨酸1～1000mg/L、L-盐酸精氨酸1～1000mg/L、L-异亮氨酸1～1000mg/L、L-组氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、还原型谷胱甘肽1～1000mg/L、丙酮酸钠1～1000mg/L、氯化胆碱1～1000mg/L、内消旋肌醇1～1000mg/L、对氨基苯甲酸0.00001～10mg/L、核黄素0.00001～10mg/L、生物素0.00001～10mg/L、硫辛酸0.1～100mg/L、泛酸钙0.1～100mg/L、维生素B120.1～100mg/L、烟酰胺0.1～100mg/L、盐酸吡哆醇0.1～100mg/L。L-抗坏血酸能起到氧化还原作用，促进吧脂肪、蛋白质的合成。L-脯氨酸是合成蛋白质的重要原料，而且能促进生长，进行正常代谢。氯化胆碱能增加培养基内细胞的数量，核黄素能促进细胞的分裂和再生。所述配方还包括盐酸吡哆醛0.1～100mg/L、盐酸硫胺0.1～100mg/L、叶酸0.1～100mg/L、牛磺酸0.1～100mg/L、亚油酸0.1～100mg/L、油酸0.1～100mg/L、棕榈酸0.1～100mg/L、胆固醇0.1～100mg/L、磷酸二氢钠1～1000mg/L、磷酸氢二钠1～1000mg/L、硫酸镁1～1000mg/L、氯化钙1～1000mg/L、氯化镁六水合物1～1000mg/L、亚硒酸钠0.00001～10mg/L、硫酸铜五水合物0.00001～10mg/L、硝酸钾0.00001～10mg/L、硝酸铁九水合物0.00001～10mg/L、氯化亚锰0.00001～10mg/L、硫酸亚铁七水合物0.1～100mg/L、硫酸锌七水合物0.1～100mg/L、腐胺二盐酸盐0.1～100mg/L、乙醇胺盐酸盐0.1～100mg/L、硫代甘油0.1～100mg/L、庆大霉素0.1～100mg/L、酚红0.1～100mg/L。叶酸能促进细胞的分裂和再生。硫代甘油用作抗氧剂。所述配方还包括荷叶碱0.1～100mg/L。荷叶碱具有抗有丝分裂的作用，有较强的抑菌效果。庆大霉素作用于细菌体内的核糖体，抑制细菌蛋白质合成。氯化亚锰作为催化剂。作为一种方案，NK92细胞无血清培养基的配方如下：2'-脱氧胞苷0.1～100mg/L2'-脱氧鸟苷0.1～100mg/L2'-脱氧腺苷0.1～100mg/L5′-三磷酸腺苷二钠盐水合物0.1～100mg/L胞苷0.1～100mg/L鸟苷0.1～100mg/L尿苷0.1～100mg/L腺苷0.1～100mg/L胸苷0.1～100mg/L次黄嘌呤钠0.1～100mg/L甘氨酸1～1000mg/LL-半胱氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/LL-苯丙氨酸1～1000mg/LL-丙氨酸1～1000mg/LL-谷氨酸1～1000mg/LL-谷氨酰胺1～1000mg/LL-甲硫氨酸1～1000mg/LL-抗坏血酸1～1000mg/LL-赖氨酸盐酸盐1～1000mg/LL-酪氨酸二钠盐1～1000mg/LL-亮氨酸1～1000mg/LL-脯氨酸1～1000mg/LL-色氨酸1～1000mg/LL-丝氨酸1～1000mg/LL-苏氨酸1～1000mg/LL-天冬氨酸1～1000mg/LL-天冬酰胺一水合物1～1000mg/LL-缬氨酸1～1000mg/LL-盐酸精氨酸1～1000mg/LL-异亮氨酸1～1000mg/LL-组氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L丙氨酰谷氨酰胺1～1000mg/L还原型谷胱甘肽1～1000mg/L丙酮酸钠1～1000mg/L氯化胆碱1～1000mg/L内消旋肌醇1～1000mg/L对氨基苯甲酸0.00001～10mg/L核黄素0.00001～10mg/L生物素0.00001～10mg/L硫辛酸0.1～100mg/L泛酸钙0.1～100mg/L维生素B120.1～100mg/L烟酰胺0.1～100mg/L盐酸吡哆醇0.1～100mg/L盐酸吡哆醛0.1～100mg/L盐酸硫胺0.1～100mg/L叶酸0.1～100mg/L牛磺酸0.1～100mg/L亚油酸0.1本文档来自技高网...

【技术保护点】
NK92细胞无血清培养基，其特征在于，以终浓度计，配方包括：L‑半胱氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、L‑苯丙氨酸1～1000mg/L、L‑谷氨酰胺1～1000mg/L、L‑甲硫氨酸1～1000mg/L、L‑赖氨酸盐酸盐1～1000mg/L、L‑酪氨酸二钠盐1～1000mg/L、L‑亮氨酸1～1000mg/L、氯化钾1～1000mg/L、D‑(+)‑葡萄糖100～10000mg/L、HEPES 100～10000mg/L、碳酸氢钠100～10000mg/L、碳酸氢钠100～10000mg/L、氯化钠100～10000mg/L、重组人白蛋白100～10000mg/L、泊洛沙姆188 100～10000mg/L、大豆蛋白100～10000mg/L、酵母粉100～10000mg/L、重组人转铁蛋白0.1～100mg/L、胰岛素0.1～100mg/L。

【技术特征摘要】
1.NK92细胞无血清培养基，其特征在于，以终浓度计，配方包括：L-半胱氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、L-苯丙氨酸1～1000mg/L、L-谷氨酰胺1～1000mg/L、L-甲硫氨酸1～1000mg/L、L-赖氨酸盐酸盐1～1000mg/L、L-酪氨酸二钠盐1～1000mg/L、L-亮氨酸1～1000mg/L、氯化钾1～1000mg/L、D-(+)-葡萄糖100～10000mg/L、HEPES100～10000mg/L、碳酸氢钠100～10000mg/L、碳酸氢钠100～10000mg/L、氯化钠100～10000mg/L、重组人白蛋白100～10000mg/L、泊洛沙姆188100～10000mg/L、大豆蛋白100～10000mg/L、酵母粉100～10000mg/L、重组人转铁蛋白0.1～100mg/L、胰岛素0.1～100mg/L。2.根据权利要求1所述的NK92细胞无血清培养基，其特征在于：所述配方还包括2'-脱氧胞苷0.1～100mg/L、2'-脱氧鸟苷0.1～100mg/L、2'-脱氧腺苷0.1～100mg/L、5′-三磷酸腺苷二钠盐水合物0.1～100mg/L、胞苷0.1～100mg/L、鸟苷0.1～100mg/L、尿苷0.1～100mg/L、腺苷0.1～100mg/L、胸苷0.1～100mg/L、次黄嘌呤钠0.1～100mg/L、甘氨酸0.1～100mg/L、L-丙氨酸1～1000mg/L、L-谷氨酸1～1000mg/L。3.根据权利要求1所述的NK92细胞无血清培养基，其特征在于：所述配方还包括L-抗坏血酸1～1000mg/L、L-脯氨酸1～1000mg/L、L-色氨酸1～1000mg/L、L-丝氨酸1～1000mg/L、L-苏氨酸1～1000mg/L、L-天冬氨酸1～1000mg/L、L-天冬酰胺一水合物1～1000mg/L、L-缬氨酸1～1000mg/L、L-盐酸精氨酸1～1000mg/L、L-异亮氨酸1～1000mg/L、L-组氨酸盐酸盐一水合物1～1000mg/L、还原型谷胱甘肽1～1000mg/L、丙酮酸钠1～1000mg/L、氯化胆碱1～1000mg/L、内消旋肌醇1～1000mg/L、对氨基苯甲酸0.00001～10mg/L、核黄素0.00001～10mg/L、生物素0.00001～10mg/L、硫辛酸0.1～100mg/L、泛酸钙0.1～100mg/L、维生素B120.1～100mg/L、烟酰胺0.1～100mg/L、盐酸吡哆醇0.1～100mg/L。4.根据权利要求1所述的NK92细胞无血清培养基，其特征在于：所述配方还包括盐酸吡哆醛0.1～100mg/L、盐酸硫胺0.1～100mg/L、叶酸0.1～100mg/L、牛磺酸0.1～100mg/L、亚油酸0.1～100mg/L、油酸0.1～100mg/L、棕榈酸0.1～100mg/L、胆固醇0.1～100mg/L、磷酸二氢钠1～1000mg/L、磷酸氢二钠1～1000mg/L、硫酸镁1～1000mg/L、氯化钙1～1000mg/L、氯化镁六水合物1～1000mg/L、亚...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙奇威，温韬，肖杰，
申请(专利权)人：上海源培生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31