一种直接体外诱导人外周血单个核细胞成为复合型抗原非特异性调节性T细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种直接体外诱导人外周血单个核细胞成为复合型抗原非特异性调节性T细胞的方法，直接利用分离方法简单、来源丰富的人外周血单个核细胞(即PBMCs)，经过能符合临床药品生产质量管理规范(GMP)的简便诱导方法，在短期内将PBMCs诱导并扩增成为包含CD4

【技术实现步骤摘要】
一种直接体外诱导人外周血单个核细胞成为复合型抗原非特异性调节性T细胞的方法
本专利技术涉及生物医学
，特别涉及一种直接体外诱导人外周血单个核细胞成为复合型抗原非特异性调节性T细胞的方法。
技术介绍
在很多自身免疫性疾病的发生发展过程中，T细胞针对自身抗原的异常激活发挥关键的作用。调节性T细胞对异常免疫应答具有强大的免疫调节作用，如能体外扩增足够数量的自体抗原非特异性调节性T细胞进行体内回输，将很可能抑制体内发生的异常免疫应答，从而使自身免疫性疾病得到控制。此外，自体调节性T细胞回输体内后不会发生针对异己的免疫性破坏，因而可能存活和发挥较长时间的作用。在器官移植的情况下，器官捐献者(供者)与接受移植者(受者)是遗传背景不同的个体，因此，不可避免会发生急、慢性免疫排斥反应，而这正是影响移植治疗效果最主要的原因。介导免疫排斥反应的主体是受者体内的效应性淋巴细胞，它们识别外来移植物抗原后活化、增殖并分泌大量效应分子，直接和/或间接地导致移植物损伤，目前，需要终身使用免疫抑制剂来控制效应细胞的功能，但是，长期服用免疫抑制剂会带来感染、恶性肿瘤、心血管疾病、肝肾毒性等毒副作用，而且还无法阻本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种直接体外诱导人外周血单个核细胞成为复合型抗原非特异性调节性T细胞的方法，其特征在于：步骤包括：S1、从人外周血中分离出外周血单个核细胞PBMCs；S2、将PBMCs重悬于含5～10％AB型人血清或自体血清的AMI‑V CTS培养基，计数细胞总量，加入1～2倍细胞数量的抗CD3/CD28磁珠或抗CD3/CD28抗体、和终浓度为500～2000U/ml的rhIL‑2，刺激培养6～7天诱导结束，培养过程中每68～76h补加一次rhIL‑2；S3、计数获得的活细胞量，取部分诱导后的T细胞进行表型和纯度的鉴定；S4、将剩余诱导后的T细胞重悬于含5～10％人血清的AMI‑V CTS培养基，加入终浓度为...

【技术特征摘要】
1.一种直接体外诱导人外周血单个核细胞成为复合型抗原非特异性调节性T细胞的方法，其特征在于：步骤包括：S1、从人外周血中分离出外周血单个核细胞PBMCs；S2、将PBMCs重悬于含5～10％AB型人血清或自体血清的AMI-VCTS培养基，计数细胞总量，加入1～2倍细胞数量的抗CD3/CD28磁珠或抗CD3/CD28抗体、和终浓度为500～2000U/ml的rhIL-2，刺激培养6～7天诱导结束，培养过程中每68～76h补加一次rhIL-2；S3、计数获得的活细胞量，取部分诱导后的T细胞进行表型和纯度的鉴定；S4、将剩余诱导后的T细胞重悬于含5～10％人血清的AMI-VCTS培养基，加入终浓度为100～200U/ml的rhIL-2，培养22～26h以静息诱导后的T细胞；分选活细胞后，取部分细胞进行混合淋巴细胞培养，其余细胞用生理盐水重悬。2.如权利要求1所述的直接体外诱导人外周血单个核细胞成为复合型抗原非特异性调节性T细胞的方法，其特征在于：步骤S4所述混合淋巴细胞培养为：以步骤S1所述PBMCs为反应细胞，以不同个体的灭活PBMCs为刺激细胞或者将抗CD3/CD28抗体作为刺激源提供T细胞激活的第一及第二信号，进行混合淋巴细胞培养，在混合淋巴细胞培养体系中加入步骤S4所述分选的活细胞共同培养3～6天，通过流式细胞术检测反应细胞的增殖水平。3.如权利要求2所述的直接体外诱导人外周血单个核细胞成为复合型抗原非特异...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈刚，王璐，
申请(专利权)人：武汉圣济科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42