免疫球蛋白G Fc区结合多肽制造技术

提供了一种免疫球蛋白G Fc区结合多肽，所述多肽由选自i)的氨基酸序列和与其具有至少95%同一性的氨基酸序列组成。还提供了用于生产所述多肽、包含所述多肽的组合物、编码所述多肽的多核苷酸以及所述多肽的多聚体的方法，以及使用所述多肽的方法。

Immunoglobulin G Fc zone binding polypeptide

Provides a kind of immunoglobulin G Fc binding polypeptides, the polypeptides selected from the amino acid sequence of I) and has at least 95% amino acid sequence identity. A method for producing the polypeptide, a composition containing the polypeptide, a polynucleotide encoding the polypeptide and a polypeptide of the polypeptide are also provided, as well as a method for using the polypeptide.

【技术实现步骤摘要】
免疫球蛋白GFc区结合多肽本申请是申请日为2011年3月7日，申请号为201180012844.2，专利技术名称为“免疫球蛋白GFc区结合多肽”的专利技术专利的分案申请。专利
本专利技术涉及结合免疫球蛋白GFc(IgGFc)的多肽及其生产方法。所述多肽在例如抗体和/或Fc融合蛋白生产中的分离和/或纯化中，例如在色谱法中具有工业应用。背景在单克隆抗体和Fc融合蛋白的工业生产中，经常使用色谱法进行纯化。由于蛋白A对IgG的Fc部分的天然亲和力，来自金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的蛋白A早已在所述应用中被用作亲和配体。其后，蛋白A以其整体，及其五个单独的Fc-结合结构域被用作用于合理设计具有改进性能的经工程改造亲和配体的起始点。例如，蛋白A的B结构域被用作用于产生经工程改造的、IgGFc-结合的、单个结构域蛋白Z的起始点(NilssonB等，ProteinEng1(2):107-13，1987)。为了改进该蛋白在碱性条件下，例如在工业色谱过程期间用于原位清洗程序的条件下的稳定性，Linhult等(Proteins55(2):407-16，2004)提出包含突变的天冬酰胺残基的蛋白Z变体。GEHealthcare、Uppsala、Sweden将该突变体进一步开发为市售产品MAbSelect™SuRe。WO2009/146755公开了另外的具有IgGFc亲和力的Z变体。WO2009/080811描述了基于蛋白Z的突变的结合蛋白，其中天然的IgGFc结合被修饰。已表明具有五个单独的IgGFc-结合结构域的天然蛋白A只结合2分子的IgG或3分子的重组Fc片段，但事实上五个结构域中的每一个都具有结合一个IgG的能力(BirgerJansson，PhD论文，Stockholm，Sweden，1996，ISBN91-7170-656-9)。尽管目前使用的IgGFc亲和配体比较成功，但仍需要改进，特别是关于改进化学计量(stoichiometry)并同时保持且理想地改进对于酸性和碱性条件的稳定性的联合需求。不断提供具有对于IgGFc的亲和力的试剂仍是一个极为关注的问题。专利技术概述根据其第一方面，本专利技术提供免疫球蛋白GFc(IgGFc)结合多肽，所述多肽包含选自以下的氨基酸序列：其中，彼此独立地，X1为P或无；[间隔基1]为由1-3个氨基酸残基组成的氨基酸序列；X17为任何氨基酸残基；X20为任何氨基酸残基；X36为除D外的任何氨基酸残基；X51为任何氨基酸残基；[间隔基2]为由0-20个氨基酸残基组成的氨基酸序列；XCTERM为D或无；以及n为1-4；和ii)与i)中限定的序列具有至少95%同一性的氨基酸序列。在本专利技术该方面的一个实施方案中，免疫球蛋白GFc(IgGFc)结合多肽由选自如上限定的i)和ii)的氨基酸序列组成。本专利技术人已构想了本专利技术多肽的氨基酸序列，以便提供优化的IgGFc-结合分子，其以来自葡萄球菌(Staphylococcus)的蛋白A的多个结构域和衍生自蛋白A的B结构域的蛋白Z作为起始点。与天然蛋白A或其先前已知的经工程改造变体的模块结构域结构类似，本专利技术的多肽提供一个或多个具有IgGFc-结合能力的独特结构域。特别地，预测两间隔基序列之间的氨基酸序列折叠成具有IgGFc-结合能力的单个三螺旋束结构域。如上所述，数字n可在1至4之间，表明本专利技术的多肽可具有1至4个被间隔基序列分开的独特IgGFc-结合结构域，构成所述结构域的单体、二聚体、三聚体或四聚体。在蛋白Z中，对应于上述氨基酸序列i)中17位的氨基酸位置被组氨酸残基占据。在本专利技术多肽中，X17可为H，但也可被任何其它氨基酸残基取代。该位置的取代可由对避免化学反应性氨基酸的通常需求引起。在蛋白Z中，对应于上述氨基酸序列i)中36位的氨基酸位置被天冬氨酸残基占据。然而，在氨基酸序列i)中，该位置被例如谷氨酸残基或丙氨酸残基取代。不希望被理论束缚，目前认为该差异用于以下两个不同目的：a)增加所述多肽的酸稳定性，和b)去除三螺旋束结构域内的DP二肽，否则其将对酸催化的切割敏感。本专利技术的一个方面(下文进一步详细描述)利用在分子的另一部分中的DP二肽基序的敏感性，并且在36-37位存在DP二肽可降低本专利技术该方面的实用性。在蛋白Z中，对应于上述氨基酸序列i)中49位的氨基酸位置被赖氨酸残基占据。然而，在氨基酸序列i)中，该位置被谷氨酰胺残基占据。如技术人员将认识到的，任何多肽的功能，例如本专利技术多肽的IgGFc-结合能力，依赖于该多肽的三级结构。改变α-螺旋多肽的氨基酸序列而不影响其功能是可能的(Taverna和Goldstein，JMolBiol315(3):479-84，2002；He等，ProcNatlAcadSciUSA105(38):14412-17，2008)。因此，本专利技术包括i)的经修饰变体，这样使得所得序列与属于i)限定的类别中的序列具有至少95%同一性。例如，有可能属于氨基酸残基的某一功能分组(例如疏水的、亲水的、极性的等)的氨基酸残基可替换为来自同一功能分组的另一氨基酸残基。当本文提及不同多肽的氨基酸序列之间的同一性程度时，给出了与本文公开的序列具有95%同一性的下限。在一些实施方案中，本专利技术多肽可含有与本文所述的序列具有至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性的序列。术语“%同一性”，如遍及说明书和所附权利要求书所使用的，可例如按以下计算。使用CLUSTALW算法将查询序列与靶序列进行比对(Thompson,J.D.,Higgins,D.G.和Gibson,T.J.,NucleicAcidsResearch,22:4673-4680(1994))。在比对序列中最短的序列所对应的窗口内进行比较。在一些情况下比对序列中最短的可为靶序列，例如29个氨基酸残基的HER3结合基序。在其它情况下，查询序列可为比对序列中最短的序列。查询序列可例如由至少10个氨基酸残基组成，例如由至少20个氨基酸残基组成。比较各个位置的氨基酸残基，并且在查询序列中，与靶序列具有相同对应性的位置所占的百分比被报告为%同一性。在本专利技术多肽的一个实施方案中，[间隔基1]选自A、AE和AEA。[间隔基1]可例如为A。在本专利技术多肽的一个实施方案中，X17为H。在本专利技术多肽的一个实施方案中，X20为除N之外的任何氨基酸残基。X20可例如为T。在一个备选的实施方案中，X20为N。在本专利技术多肽的一个实施方案中，X36选自E和A。X36可例如为E。在本专利技术多肽的一个实施方案中，X51为除N之外的任何氨基酸残基。X51可例如为D。在一个备选的实施方案，X51为N。在本专利技术多肽的一个实施方案中，[间隔基2]的所有氨基酸残基均独立地选自A、E、F、G、I、K、L、P、Q、R、S、T和V，特别地选自A、E、G、K、P、Q、R、S和T，例如选自G、Q和S。在甚至更具体的实施方案中，[间隔基2]为G。如上所论述的，n为1至4之间的数值，即，其可为1、2、3或4。在其中n>1的本专利技术多肽中，多次出现的[间隔基1]可各自单独由相同的氨基酸序列或不同的氨基酸序列组成。同样地，在其中n>1的本专利技术多肽中，多次出现的[间隔基2]可各自单独由相本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫球蛋白G Fc区结合多肽，所述多肽包含选自以下的氨基酸序列：

【技术特征摘要】
2010.03.08 EP 10155835.11.一种免疫球蛋白GFc区结合多肽，所述多肽包含选自以下的氨基酸序列：其中，彼此独立地，X1为P或无；[间隔基1]为由1-3个氨基酸残基组成的氨基酸序列；X17为任何氨基酸残基；X20为任何氨基酸残基；X36为除D外的任何氨基酸残基；X51为任何氨基酸残基；[间隔基2]为由0-20个氨基酸残基组成的氨基酸序列；XCTERM为D或无；以及n为1-4；和ii)与i)中限定的序列具有至少95%同一性的氨基酸序列。2.权利要求1的IgGFc-结合多肽，其中[间隔基1]选自A、AE和AEA。3.权利要求2的IgGFc-结合多肽，其中[间隔基1]为A。4.前述权利要求中任一项的IgGFc-结合多肽，其中X17为H。5.前述权利要求中任一项的IgGFc-结合多肽，其中X20为除N外的任何氨基酸残基，例如T。6.权利要求1-4中任一项的IgGFc-结合多肽，其中X20为N。7.前述权利要求中任一项的IgGFc-结合多肽，其中X36选自E和A，例如E。8.前述权利要求中任一项的IgGFc-结合多肽，其中X51为除N外的任何氨基酸残基，例如D。9.权利要求1-7中任一项的IgGFc-结合多肽，其中X51为N。10.前述权利要求中任一项的IgGFc-结合多肽，其中[间隔基2]的所有氨基酸残基独立地选自A、E、F、G、I、K、L、P、Q、R、S、T和V，特别地选自A、E、G、K、P、Q、R、S和T，例如选自G、Q和S。11.前述权利要求中任一项的IgGFc-结合多肽，其中[间隔基2]为G。12.前述权利要求中任一项的IgGFc-结合多肽，其中n为1。13.权利要求1-11中任一项的IgGFc-结合多肽，其中n为2。14.权利要求1-11中任一项的IgGFc-结合多肽，其中n为4。15.前述权利要求中任一项的IgGFc-结合多肽，所述多肽与IgGFc结合，使得该相互作用的KD值为至多1×10-6M。16.权利要求15的IgGFc-结合多肽，所述多肽与IgGFc结合，使得该相互作用的KD值为至多1×10-7M。17.权利要求16的IgGFc-结合多肽，所述多肽与IgGFc结合，使得该相互作用的KD值为至多5×10-8M。18.前述权利要求中任一项的IgGFc-结合多肽，所述多肽能够与人IgG分子的Fc部分结合。19.权利要求18的IgGFc-结合多肽，所述多肽能够与1、2和4类人IgG结合。20.前述权利要求中任一项的IgGFc-结合多肽，所述多肽能够结合到IgGFc的CH2和CH3结构域之间的界面。21.前述权利要求中任一项的IgGFc-结合多肽，其中所述氨基酸序列i)选自SEQIDNO:5-6。22.权利要求1-20中任一项的IgGFc-结合多肽，其中X1为P且XCTERM为D。23.权利要求22的IgGFc-结合多肽，其中所述氨基酸序列i)选自SEQIDNO:1-4。24.一种多核苷酸，所述多核苷酸包含编码权利要求1-23中任一项的多肽的核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：L阿布拉姆森，
申请(专利权)人：通用电气医疗集团生物工艺研发股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞典,SE