疫苗组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种预防登革热的四价疫苗组合物，其含有保藏在位于巴黎巴斯德研究所中的ＣＮＣＭ，保藏号为Ｉ－２４８０，Ｉ－２４８１，Ｉ－２４８２和Ｉ－２４８３的各减毒株的病毒。本发明专利技术的特征在于各血清型的病毒相对量是这样的，即血清型３的病毒量小于其它血清型的病毒量。特别是，本发明专利技术涉及一种四价组合物，其中每一接种剂量中，各血清型１－４的病毒量与下列配比相对应：３，２，１，２或３，３，１，３，其中的数字表示感染５０％细胞所需的病毒稀释度的ｌｏｇ１０值。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及疫苗，特别是减毒活疫苗领域。更准确地说，本专利技术涉及一种预防登革热的四价疫苗组合物，其中与其它血清型的病毒量相比，血清型3的登革热病毒的量降低了。登革热，及其严重形式——出血性发热，是一种源于病毒的热带病。导致这种疾病的病毒是黄病毒科(黄病毒属)的一部分，其还包括黄热病病毒及日本脑炎病毒。能够引起登革热的四种血清型是已知的。而目前这种疾病在全世界范围内均有分布，且迄今为止在市场上还没有有效的疫苗出售。事实上，为了能够有效地预防登革热，同时提供安全保证，疫苗必须能够在已给药的个体中诱导免疫系统的应答，并能够在随后的野生病毒感染过程中保护他们。优选所述疫苗不但有效，而且与野生型病毒的血清型无关。然而，直到现在，在所研究的候选疫苗中，还没有一种能够表现出所有这些必需的品质。目前已经在人身上试验过四价疫苗，所述四价疫苗含有保藏在位于巴黎巴斯德研究所中的CNCM，保藏号为I-2480，I-2481，I-2482，I-2483的4种毒株，它们是血清型1，2，3和4的减毒登革热毒株，这些内容由Natth BHAMARAPRAVATI和Sutee YOKSAN在D.J.Gubler和G.Kuno，CAB INTERNATIONAL，1997年出版的《登革热和登革热出血性发热》一书的第17章第373-374页中描述。虽然根据该现有技术，临床试验中的所有受试者全部被血清转化，仅经历轻微的副发应，但人们还是希望能够改进疫苗组合物的配比从而优化它。事实上，我们希望能有这样一种疫苗组合物，其可安全地给予人，同时可相对于绝大多数接种受试者的各血清型诱导血清转化；此外，所述疫苗组合物必须能以较低的成本在工业条件下制备，以便使接种能够为所有国家，特别是最易受这类疾病影响的贫穷国家所接受。为了达到此目的，本专利技术提供了一种预防登革热的四价疫苗组合物，其含有保藏在位于巴黎巴斯德研究所中的CNCM，保藏号为I-2480，I-2481，I-2482和I-2483的各减毒株的病毒，其特征在于各血清型的病毒相对量是这样的，即血清型3的病毒量小于其它血清型的病毒量。根据本专利技术的其中一个特征，当以感染50％细胞所需的病毒稀释度的log10表示病毒滴度时，每一疫苗剂量中，血清型3的病毒量至少小于其它血清型的病毒量1个单位。根据本专利技术其中一个实施方案，当以感染50％细胞所需的病毒稀释度的log10表示病毒滴度时，每一疫苗剂量中，除血清型3之外的其它血清型病毒可以等量存在，或以这种比例存在，即血清型1的病毒量至少大于其它血清型的病毒量1个单位。令人感到惊奇的是，我们已经观察到使用这种制剂在接种个体中诱导的免疫应答十分令人满意，而副发应大大减少。根据本专利技术一个具体实施方案，每一疫苗剂量中，各血清型1-4的病毒量与下列配比相对应3，2，1，2或3，3，1，3，其中的数字表示感染50％细胞所需的病毒稀释度的log10值。根据本专利技术其中一个特征，所述疫苗组合物可通过皮下注射给药。根据一个特别有利的实施方案，所述疫苗组合物是分2次至少间隔1个月进行给药的。事实上，我们已经观察到这种给药方式增加了抗体应答且，完全意想不到的是，副发应的频率降低。此外，我们还观察到第二次给药可“补充”在第一次给药过程中诱导的应答，即在第一次给药过程中，没能相对于特定血清型血清转化的个体具有在第二次给药过程中这样做的能力；此观察结果，结合细胞型免疫应答的存在，表明本专利技术提供的疫苗组合物可有效预防登革热，其中所述细胞型免疫应答的存在是在先前的临床试验中，使用含与本专利技术相同的减毒活毒株的疫苗组合物加以证实的。本专利技术的主题还在于病毒组合物在制备预防登革热的疫苗组合物中的用途，其中所述病毒组合物含有保藏在位于巴黎巴斯德研究所中的CNCM，保藏号为I-2480，I-2481，I-2482，I-2483的各减毒株的病毒，其中各血清型的病毒相对量是这样的，即血清型3的病毒量小于其它血清型的病毒量。本专利技术的主题还在于预防登革热的接种方法，其中给予人可预防登革热的四价疫苗组合物，其中所述四价疫苗组合物含有保藏在位于巴黎巴斯德研究所中的CNCM，保藏号为I-2480，I-2481，I-2482，I-2483的各减毒株的病毒，其特征在于各血清型的病毒相对量是这样的，即血清型3的病毒量小于其它血清型的病毒量。本专利技术的病毒株全部是从东南亚感染了登革热的患者血清中获得的。使分离物在哺乳动物细胞上传代，然后通过胸内(IT)途径接种到农场蚊子(巨蚊(Toxorhynchites)或埃及伊蚊)上。该步骤可消除可能不是虫媒病毒的潜在污染病毒；事实上，只有虫媒病毒可在胸内给药后迁移到蚊子的唾液腺中；因此需将蚊子的头部从其身体的其余部分分离下来并磨碎，从而得到纯净的病毒株。接下来，每隔5-10天，在32℃时，使血清型1，2和4的病毒在原代狗肾细胞(PDK)上传代，而血清型3的病毒是通过在猴肾细胞(PGMK)上传代，然后在胎猕猴肺细胞(FRhL)上培养而减毒的。所得减毒株具有下列特性-当在哺乳动物细胞，例如来源于猴肾的LLC-MK2细胞上进行滴定时，与其亲代毒株相比，减毒株产生的噬斑较少。-在新生的小鼠中，当通过大脑内途径接种它们时，它们具有较低的毒性。-在猴子中，当通过皮下途径接种它们时，它们较少引起(甚或检测不到)病毒血症。-在接近40℃的温度时，它们较敏感。根据本专利技术，源于CNCM保藏的I-2480，I-2481，I-2482，I-2483的毒株是指从这些毒株得到的，但其已经在允许病毒进入的细胞上经历了额外传代，同时维持了上述性能的毒株。血清型1的毒株16007是1964年在泰国，从患登革热，并伴有休克综合征的患者中分离出来的。在被接种到蚊子Toxorhynchites amboinensis中之前，在组织培养物上传代原始的病毒血症血清。接着，在PGMK上传代所得的病毒，从而制备原病毒种子。然后在PDK细胞上传代该种子43次。在PDK细胞上传代13次后所得的毒株具有所有减毒特性，可用作疫苗；它是在位于巴黎巴斯德研究所中的CNCM保藏的，保藏号为I-2480。虽然对于本专利技术的疫苗组合物而言，该毒株是优选的，但也可使用从其衍生的毒株，特别是在PDK细胞上传代过几次的毒株，或随后在细胞上培养，使其维持致免疫性，同时不增加毒性的毒株。因此，在VERO细胞上培养过的毒株也是适宜的。源于毒株I-2480的任何毒株均被看作本专利技术的组成部分。血清型2的毒株16681是1964年，在泰国，从代表登革热致死病例的患者中分离出来的。此毒株在Toxorhynchites amboinensis蚊子中传代两次，在猴肾细胞上传代一次，从而产生原种子。毒株16681 PDK 53是在PDK细胞上，每周一次，连续传代53周后得到的，其适于本专利技术的目的，并保藏在CNCM中，保藏号为I-2481。虽然对于本专利技术的疫苗组合物而言，该毒株是优选的，但也可使用从其衍生的毒株，特别是在PDK细胞上传代过几次的毒株，或随后在细胞上培养，使其维持致免疫性，同时不增加毒性的毒株。因此，在VERO细胞上培养过的毒株也是适宜的。源于毒株I-2481的任何毒株均被看作本专利技术的组成部分。血清型3的毒株16562是1972年，在马尼拉，从登革热患者中分本文档来自技高网...

【技术保护点】
预防登革热的四价疫苗组合物，其含有保藏在位于巴黎巴斯德研究所中的ＣＮＣＭ，保藏号为Ⅰ－２４８０，Ⅰ－２４８１，Ⅰ－２４８２和Ⅰ－２４８３的各减毒株的病毒，其特征在于各血清型的病毒相对量是这样的，即血清型３的病毒量小于其它血清型的病毒量。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：J朗，JF萨卢佐，
申请(专利权)人：艾文蒂斯巴斯德公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]