一种自闭症检测的试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种自闭症检测试剂盒。本发明专利技术发现骨髓和外周血CD34阳性细胞ERβ及其相关基因的表达与产生自闭症样行为密切相关，可以作为自闭症的标志物，用于自闭症的检测以及预筛。本发明专利技术所述自闭症检测试剂盒可以快速、灵敏、特异的用于临床对自闭症的检测以及预筛根据检测结果可以对自闭症患儿采取有效的预防和干预治疗措施。

A kit for autism detection

The invention belongs to the field of biological technology, and discloses an autism detection kit. It is found that the expression of ER beta and its related genes in CD34 positive cells of bone marrow and peripheral blood is closely related to the occurrence of autism like behavior, and can be used as a marker of autism, for the detection and screening of autism. The autism detection kit is fast, sensitive and specific for clinical autism detection and pre screening. According to the test results, we can take effective prevention and intervention measures for autistic children.

【技术实现步骤摘要】
一种自闭症检测的试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测的试剂盒，尤其是一种自闭症检测的试剂盒。
技术介绍
自闭症谱系障碍(ASD，简称自闭症)是一组发育障碍，包括完全的孤独症，阿斯伯格综合症，和其他广泛性发育障碍。如今自闭症的检出率超过1％，患病率在不断增加，而且自闭症患者中男性占了8成。自闭症孩子不肯改变其原来形成的习惯和行为方式，难以适应新环境，多数患儿同时还表现无目的活动，活动过度，单调重复地蹦跳、拍手、挥手、奔跑旋转，也有的甚至出现自伤自残，如反复挖鼻孔、抠嘴、咬唇、吸吮等动作。自闭症患儿的语言与正常人的语言在逻辑、内容、形式上互不相容，他们的内在世界精彩纷呈，但与正常人的内心世界互不相通，他们的思维活动是“关起门来唱大戏”，表面平静，内部活动很激烈。这种语言的不相容性导致孤独症患儿行为古怪、不可理解。自闭症儿童由于缺乏想象力和预测行为结果的能力，他们无法进行建设性游戏。但他们知道纸可以撕、硬的东西扔到地上可以发出声音的道理，为了寻找这种撕纸或扔东西的快乐，常常出现诸如此类的破坏行为。自闭症患儿往往没有恐惧感，不能预料他们行为所产生的后果。突然穿越马路；打开煤气开关只是为了听到叭、叭、叭的响声；摆弄自己感兴趣的电源、开关；把身体探出窗外；在高处攀爬行走。自闭症在初期可能出现的危害并不严重，许多家长认为孩子只是胆小内向，只要长大点就好了，殊不知，自闭症如果不治疗，后期症状会一直延续，而且愈演愈烈。自闭症如果不接受专业治疗，患儿终生都要大人照料。目前自闭症基于智力测验和行为、实验室诊断、脑电图检查等检测结果并在语言病理学家、心理学家和儿科医生的共识基础上进行确诊。自闭症目前常规确认手段只能在患者出现自闭症症状之后进行诊断，延误了治疗的时机。
技术实现思路
本专利技术通过大理石掩埋测试、社交能力的评估实验、高架十字迷宫实验空场实验等行为学研究以及实时定量PCR和Westernblot检测、甲基化特异性PCR分析和染色质免疫沉淀(ChIP)检测、过表达ERβ基因和下调ERβ基因表达后的自闭症行为学研究发现骨髓和外周血CD34阳性细胞ERβ、SOD2和ERRα基因表达与产生自闭症样行为密切相关，表明骨髓和外周血CD34阳性细胞ERβ基因及其相关基因是ASD患者的诊断的良好生物标志物。因此，本专利技术提供了CD34阳性细胞中ERβ基因及相关基因在制备自闭症标志物中的应用。其中，所述ERβ相关基因为ERα、SOD2、ERRα、OXT、OXTR、GPER、PGR或AR基因。本专利技术还提供了一种自闭症检测试剂盒，包括ERβ、ERα、SOD2、ERRα、OXT、OXTR、GPER、PGR或AR基因中至少一种的引物。在一些实施方案中，所述ERβ基因的引物序列如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示。在一些实施方案中，所述ERα基因的引物序列如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示。在一些实施方案中，所述SOD2基因的引物序列如SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示。在一些实施方案中，所述ERRα基因的引物序列如SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示。在一些实施方案中，所述OXT基因的引物序列如SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示。在一些实施方案中，所述OXTR基因的引物序列如SEQIDNo.11和SEQIDNo.12所示。在一些实施方案中，所述GPER基因的引物序列如SEQIDNo.13和SEQIDNo.14所示。在一些实施方案中，所述PGR基因的引物序列如SEQIDNo.15和SEQIDNo.16所示。在一些实施方案中，所述AR基因的引物序列如SEQIDNo.17和SEQIDNo.18所示。进一步的，本专利技术所述的试剂盒还包括RT反应液、TaqDNA聚合酶、dNTP、荧光探针、荧光染料、CD34阳性细胞分离液中至少一种。其中，在一些实施方案中，RT反应液组成为BufferRT、dNTPMix、RNase-FreeWater；所述CD34阳性细胞分离液组成为Ficoll、CD34MicroBeads、FcRBlockingReagent。在一些实施方案中，所述荧光探针为TaqMan探针，荧光染料为SYBRGREENI。在一些实施方案中，本专利技术所述的试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品。阴性质控品和阳性质控品可用作检测结果直接判定样本中ERβ相关基因表达水平是否与自闭症显著性相关。由上述技术方案可知，本专利技术提供了一种自闭症检测试剂盒。本专利技术发现骨髓和外周血CD34阳性细胞ERβ及其相关基因的表达与产生自闭症样行为密切相关，可以作为自闭症的标志物，用于自闭症的检测以及预筛。本专利技术所述自闭症检测试剂盒可以快速、灵敏、特异的用于临床对自闭症的检测以及预筛根据检测结果可以对自闭症患儿采取有效的预防和干预治疗措施。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示产前妊娠大鼠经复方口服避孕药(COC)暴露后导致子代大脑中的ERβ基因表达下调；(a-c)RT-PCR检测雄性和雌性子代中的ERβ(a)、SOD2(b)和ERRα(c)基因的mRNA表达水平，n＝5；(d、e)WesternBlot定量检测雄性后代中的三个基因的蛋白质表达水平，n＝5；(f、g)WesternBlot定量检测雌性后代中的三个基因的蛋白质表达水平，n＝5；(h)雄性和雌性后代中的杏仁核的SOD2酶活性水平，n＝5；*代表P＜0.05；图2示产前左炔诺孕酮暴露通过增加杏仁核中ERβ基因的启动子甲基化水平从而抑制ERβ基因的表达；(a、b)甲基化特异性PCR分析法检测雄性和雌性子代的杏仁核神经细胞中ERβ基因启动子甲基化水平，n＝5；(c、d)ChIP技术测量雄性和雌性子代的ERβ启动子的表观遗传学改变，n＝5；*代表P＜0.05；图3示产前孕酮暴露可诱导子代在出生后10周出现自闭症样行为，并且雄性子代的效果比雌性子代明显；(a)大理石掩埋测试，n＝8；(b)社交时间，n＝8；(c)在高架十字迷宫实验中开臂中的活动时间，n＝8；(d)在高架十字迷宫实验中闭臂中的活动时间，n＝8；(e)在空场实验中中央区域的活动时间，n＝9；(f)在空场实验中外周区域的活动时间，n＝9；(g)在空场实验中的自发活动次数，n＝9；*代表P＜0.05；图4示过表达杏仁核中的ERβ基因可使因产前孕酮暴露诱导10周龄子代出现自闭症样行为得到恢复，而敲除ERβ基因则可同样导致自闭症样行为出现；(a)大理石掩埋测试，n＝8；(b)社交时间，n＝8；(c)在高架十字迷宫实验中开臂中的活动时间，n＝8；(d)在高架十字迷宫实验中闭臂中的活动时间，n＝8；(e)在空场实验中中央区域的活动时间，n＝9；(f)在空场实验中外周区域的活动时间，n＝9；(g)在空场实验中的自发活动次数，n＝9；*代表P＜0.05；图5示产前孕酮暴露可抑制10周龄雄性子代CD34阳性细胞中的Erβ及其靶基因表达，而在雌性子代中效果较低；(a-c)来源于骨髓的CD34阳性细胞中ERβ(a)、SOD2(b)和ERRα(c)的表达水平；(d-f)来源于骨髓的CD34阳性细胞中ERβ(d)、SOD2(e)和ERRα(f)的本文档来自技高网...

【技术保护点】
CD34阳性细胞中ERβ基因及相关基因在制备自闭症标志物中的应用。

【技术特征摘要】
1.CD34阳性细胞中ERβ基因及相关基因在制备自闭症标志物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ERβ相关基因为ERα、SOD2、ERRα、OXT、OXTR、GPER、PGR或AR基因。3.一种自闭症检测的试剂盒，其特征在于，包括ERβ、ERα、SOD2、ERRα、OXT、OXTR、GPER、PGR或AR基因中至少一种的引物。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述ERβ基因的引物序列如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示；所述ERα基因的引物序列如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示；所述SOD2基因的引物序列如SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示；所述ERRα基因的引物序列如SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示；所述OXT基因的引物序列如SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示；所述OXTR基因的引物序列如SEQIDNo.11和SEQIDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海佳，葛啸虎，王一飞，陈婉玲，姚大纯，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44