一种检测乳糖和果糖代谢相关基因的方法技术
A method for detecting the genes related to lactose and fructose metabolism
The invention discloses a method for detecting lactose and fructose metabolism related genes, the specific steps are as follows: extraction of DNA with oral mucosa cells were detected in the oral mucosa; extraction of DNA cells as the template for PCR reaction; the 4 pairs of ordinary PCR amplification, PCR amplified by 1% agarose gel electrophoresis products; the 1% agarose gel electrophoresis with agarose gel extraction kit by day with strip; sequencing reaction; the sequencing reaction products were purified; degeneration 3730 sequencing; according to the results of sequencing analysis of SNP gene type 6. The invention has the advantages of convenient operation, high detection efficiency, safe and reliable and so on.
【技术实现步骤摘要】
一种检测乳糖和果糖代谢相关基因的方法
本专利技术涉及生物检测领域，具体来说是一种检测乳糖和果糖代谢相关基因的方法。
技术介绍
就全球而言，有半数以上人口存在乳糖酶缺乏的问题,特别是东方人，对牛奶消化吸收不良者所占比例更大,乳糖不耐受可对各年龄人口构成危害，这不仅是一个医学问题，而且也是关系到世界人口营养和健康问题,如何解决这个问题，已越来越多地收国内外众多学者的重视。人类乳糖酶与其他双糖酶不同，并非诱导酶，不直接受作用底物的调节，不能靠延长哺乳期或连续饮乳使之活性维持下去,乳糖酶是一种小肠内细胞产生的酶,这种酶依附乳糖并将其分裂成半乳糖和葡萄糖分子,葡萄糖被马上吸收,但是如果不能产生足够的乳糖酶，在代谢乳糖时就会出现问题，缺乏乳糖酶会导致乳糖不耐症，表现为腹胀，肠胃气胀和腹泻等症状。随着对MCM6基因多态性位点的调节乳糖酶基因转录的作用机制的研究不断深入，有学者提出等位基因T和C在基因转录过程中具有不同的调控能力，OldsLC等通过体外实验，利用荧光素报告载体将人类C/T-13910位点的基因片段进行克隆，并将重组载体转染人小肠上皮细胞中，发现该多态性位点位于LC...
【技术保护点】
一种检测乳糖和果糖代谢相关基因的方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)、用检测者的口腔黏膜细胞提取DNA；(2)、以口腔黏膜细胞提取的DNA为模板进行PCR反应，分别用SEQ NO 1和SEQ NO 2为引物扩增MCM6基因SNP rs4988235位点，用SEQ NO 3和SEQ NO 4为引物扩增MCM6基因SNP rs182549位点，用SEQ NO 5和SEQ NO 6为引物扩增ALDOB基因SNP rs1800588位点，用SEQ NO 7和SEQ NO 8为引物扩增ALDOB基因SNP rs4994位点；(3)、将上述4对引物进行普通PCR扩增后，将PCR扩增产...
【技术特征摘要】
1.一种检测乳糖和果糖代谢相关基因的方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)、用检测者的口腔黏膜细胞提取DNA；(2)、以口腔黏膜细胞提取的DNA为模板进行PCR反应，分别用SEQNO1和SEQNO2为引物扩增MCM6基因SNPrs4988235位点，用SEQNO3和SEQNO4为引物扩增MCM6基因SNPrs182549位点，用SEQNO5和SEQNO6为引物扩增ALDOB基因SNPrs1800588位点，用SEQNO7和SEQNO8为引物扩增ALDOB基因SNPrs4994位点；(3)、将上述4对引物进行普通PCR扩增后，将PCR扩增产物用1％的琼脂糖凝胶电泳；(4)、将1％的琼脂糖凝胶电泳条带用天跟的琼脂糖凝胶回收试剂盒回收目的条带；(5)、进行测序反应；(6)、将测序反应产物进行纯化：测序反应产物中加3ulEDTA和18ul无水乙醇，3700r/min，离心30min，然后倒置，800r/min离心10s，然后取出，加50ul80％乙醇，3700r/min，离心15min，然后倒置，800r/min离心10s取出；(7)、变性，上3730测序仪测序：在测序反应产物纯化后的样本中加10ulHidi，上PCR仪变性，条件为94℃变性2min，4℃保存3min后上3730测序仪测序；(8)、根据测序结果分析6个SNP基因型。作为优选，所述的步骤(1)中，采用口腔拭子DNA提取试剂盒提取DNA。作为优选，所述的步骤(1)中，提取的DNA浓度不低于10ng/ul，260/280＝1.9±2。作为优选，所述的步骤(2)中，PCR反应体系为25uL，其包括：模板：2uL、SEQNO1:1uL、SEQNO2：1uL、10×MSPbuffer：2.5uL、20mMdNTP：2ul、Hotstarttaq：0.3ul、去离子水：16.2uL；模板：2uL、SEQNO3:1uL、SEQNO4：1uL、10×MSPbuffer：2.5uL、20mMdNTP：2ul、Hotstarttaq：0.3ul、去离子水：16.2uL；模板：2uL、SEQNO5:1uL、SEQNO6：1uL、10×MSPbuffer：2.5uL、20mMdNTP：2ul、Hotstarttaq：0.3ul...
【专利技术属性】
技术研发人员：韦玉军，李航，崔俊生，刘伟，顾鹏，
申请(专利权)人：银川安龙基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：宁夏,64
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