RETN和KLK1在作为结核病检测标志物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了RETN和KLK1在作为结核病检测标志物中的应用。通过实验证明，RETN基因和KLK1基因在正常组织、结核潜伏感染者(LTBI)和结核病患者(TB)中存在明显的表达差异，结核病患者(TB)组织中RETN基因的表达水平远高于正常组织或者结核潜伏感染者(LTBI)；KLK1基因的表达水平远低于正常组织或者结核潜伏感染者(LTBI)。因此RETN基因和KLK1基因可以作为标志物用于检测或诊断结核病，从而对结核病的发生和进展进行监测。

Application of RETN and KLK1 as a marker for tuberculosis detection

The invention discloses the application of RETN and KLK1 in the detection markers of tuberculosis. The experiment proved that RETN gene and KLK1 gene in normal tissue, latent tuberculosis infection (LTBI) and TB (TB) in the presence of differential expression significantly, patients with tuberculosis (TB) RETN gene expression level in the organization is much higher than that of normal tissue or latent tuberculosis infection (LTBI); the expression level of KLK1 gene from lower than normal tissue or latent tuberculosis infection (LTBI). Therefore, the RETN gene and the KLK1 gene can be used as markers to detect or diagnose tuberculosis, so that the occurrence and progress of tuberculosis are monitored.

【技术实现步骤摘要】
RETN和KLK1在作为结核病检测标志物中的应用
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及RETN和KLK1在作为结核病检测标志物中的应用。
技术介绍
结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，M.tb)感染引发的慢性传染性疾病，严重威胁人类健康。全国第五次结核病流行病学调查显示我国现有超过500万名成人活动性肺结核患者。成人感染结核分枝杆菌后，部分呈现带菌生存状态，并不会发展为结核病，称为潜伏感染者(Latenttuberculosisinfection，LTBI)；约5-10％的潜伏感染者会继续发展为活动性结核病。国内各地区流行病学调查结果显示，基于γ-干扰素释放试验(IGRA)得出的结核分枝杆菌感染率大约在20-30％之间，即全国约有3-4亿人为结核分枝杆菌感染者，数目庞大的无临床症状的结核潜伏感染者是活动性结核病的重要来源。此外，由于结核潜伏感染的预防性治疗方案与活动性结核病的抗痨治疗方案显著不同。因此，如何实现结核分枝杆菌潜伏感染者与活动性结核病的早期鉴别诊断至关重要。常用的结核分枝杆菌感染诊断方法包括传统的结核菌素实验(TST)以及γ-干扰素释放试验(IGRAs)，TST方法容易受到卡介苗接种和非结核分枝杆菌的干扰，结核分枝杆菌感染诊断不够明确，更无法区别潜伏感染和活动性结核病。新近推行的IGRAs方法，虽然能够检测结核分枝杆菌感染，但无法区分结核杆菌潜伏感染和活动性结核病。目前活动性结核病的诊断金标准仍然是经典的痰涂片染色显微镜下查找抗酸杆菌以及结核杆菌培养法，已有近百年的历史。这两种检测方法的敏感性均不高，痰涂片染色法的敏感性约30％，结核杆菌培养法的敏感性约60％。痰涂片染色法虽然可以当天出结果，但不能区分结核杆菌和非结核分枝杆菌，也不能区分活菌还是死菌。结核杆菌培养法的敏感性虽高一些，但耗时较长，即使快速培养也需要1个月的时间才能得到结果。另外，对于临床上大量的肺外结核和涂阴、菌阴的结核患者，金标准检测方法的应用受到限制，加剧了诊断的困难，给及时治疗带来了阻力。近年来虽然陆续出现了一些先进的基于核酸扩增的分子生物学检测技术(如XpertMTB/RIFassay)，但由于受到仪器设备和诊断费用的限制，以及假阳性率偏高等问题，还无法全面推广。因此，现行的结核病诊断方法或辅助诊断手段都无法实现快速有效的鉴别诊断结核分枝杆菌潜伏感染和活动性结核病，使得临床上面临严重的治疗延误以及过度治疗等问题。基于此，寻找新的结核病特异标志物，鉴别诊断结核潜伏感染和活动性结核病，已经成为结核病临床诊断中一项亟待解决的难题。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是如何鉴别结核潜伏感染者和活动性结核病患者。为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供了检测如下(1)-(3)中任一种的检测物的物质的新用途：(1)RETN基因和KLK1基因；(2)RETN基因和KLK1基因编码的mRNA；(3)RETN基因和KLK1基因编码的蛋白。本专利技术提供了上述检测物在制备用于鉴别活动性结核病患者和结核潜伏感染者的产品中的应用。本专利技术还提供了上述检测物在鉴别活动性结核病患者和结核潜伏感染者中的应用。上述应用中，所述检测物为检测如下(1)-(3)中任一所述的检测物所需的试剂和/或仪器：(1)RETN基因和KLK1基因；(2)RETN基因和KLK1基因编码的mRNA；(3)RETN基因和KLK1基因编码的蛋白。为解决上述技术问题，本专利技术又提供了鉴别活动性结核病患者和结核潜伏感染者的系统。本专利技术提供的鉴别活动性结核病患者和结核潜伏感染者的系统包含用于检测如下(1)-(3)中任一种的检测物：(1)RETN基因和KLK1基因；(2)RETN基因和KLK1基因编码的mRNA；(3)RETN基因和KLK1基因编码的蛋白。上述系统中，所述检测物为检测如下(1)-(3)中任一所述的检测物所需的试剂和/或仪器：(1)RETN基因和KLK1基因；(2)RETN基因和KLK1基因编码的mRNA；(3)RETN基因和KLK1基因编码的蛋白。上述应用或系统中，所述检测上述检测物所需的试剂和/或仪器可为任何能够实现对上述检测物进行定量检测的试剂和/或仪器，如定量PCR检测所述RETN基因或KLK1基因表达水平所需的试剂和/或仪器，或利用基因芯片检测所述RETN基因或KLK1基因表达水平所需的试剂和/或仪器。上述应用或系统中，所述物质或系统还包含数据处理装置；所述数据处理装置内设具有如下(a1)和(a2)所示的功能的模块：(a1)分别检测待测者组织样本中RETN基因和KLK1基因的相对表达量，得到KLK1相对表达量和RETN相对表达量；然后根据如下公式计算待测者的RETN基因和KLK1基因的联合表达量：联合表达量＝e2.077×KLK1相对表达量+0.741×RETN相对表达量-4.874/(1+e2.077×KLK1相对表达量+0.741×RETN相对表达量-4.874)；(a2)根据所述联合表达量按照如下方法确定待测者为活动性结核病患者还是结核潜伏感染者：若待测者的RETN基因和KLK1基因的联合表达量≥0.6411，则待测者为或候选为活动性结核病患者；若待测者的RETN基因和KLK1基因的联合表达量＜0.6411，则待测者为或候选为结核潜伏感染者。上述相对表达量采用2-△△Ct方法计算，计算公式如下：2-ΔΔCT＝2-(ΔCT待测者-ΔCT对照者)＝2-[(CT待测者目的基因-CT待测者内参基因)-(CT对照者目的基因-CT对照者内参基因)]。其中，对照者为正常人；所述目的基因为RETN基因或KLK1基因，所述内参基因为GAPDH基因。为了解决上述技术问题，本专利技术最后还提供了RETN基因和/或KLK1基因作为标志物的新用途。本专利技术提供了RETN基因和/或KLK1基因作为标志物在制备用于鉴别活动性结核病患者和结核潜伏感染者的产品中的应用。本专利技术还提供了RETN基因和/或KLK1基因作为标志物在鉴别活动性结核病患者和结核潜伏感染者中的应用。本专利技术还提供了RETN基因和/或KLK1基因作为标志物在制备用于检测或诊断结核病的产品中的应用。本专利技术还提供了RETN基因和/或KLK1基因作为标志物在检测或诊断结核病中的应用。本专利技术还提供了RETN基因和/或KLK1基因作为标志物在制备用于监测结核病发生和/或发展的产品中的应用。本专利技术还提供了RETN基因和/或KLK1基因作为标志物在监测结核病发生和/或发展中的应用。在本专利技术中，所述产品可为试剂盒。通过实验证明，RETN基因和KLK1基因在正常组织、结核潜伏感染者和活动性结核病患者中存在明显的表达差异，并且95.1％的结核潜伏感染者中的RETN基因和KLK1基因的联合表达量均小于0.6411，而73.0％的活动性结核病患者的RETN基因和KLK1基因的联合表达量均大于等于0.6411。因此RETN基因和KLK1基因可以作为标志物用于鉴别活动性结核病患者和结核潜伏感染者，从而对结核病的发生和进展进行监测。附图说明图1为经结核特异抗原ESAT-6和CFP-10体外刺激的结核病(TB)、结核潜伏感染(LTBI)、健康人(HC)的外周血单个核细胞内差异表达基因谱(P本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测如下(1)‑(3)中任一种的检测物的物质在制备用于鉴别活动性结核病患者和结核潜伏感染者的产品中的应用：(1)RETN基因和KLK1基因；(2)RETN基因和KLK1基因编码的mRNA；(3)RETN基因和KLK1基因编码的蛋白。

【技术特征摘要】
1.检测如下(1)-(3)中任一种的检测物的物质在制备用于鉴别活动性结核病患者和结核潜伏感染者的产品中的应用：(1)RETN基因和KLK1基因；(2)RETN基因和KLK1基因编码的mRNA；(3)RETN基因和KLK1基因编码的蛋白。2.检测如下(1)-(3)中任一种的检测物的物质在鉴别活动性结核病患者和结核潜伏感染者中的应用：(1)RETN基因和KLK1基因；(2)RETN基因和KLK1基因编码的mRNA；(3)RETN基因和KLK1基因编码的蛋白。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述检测物为检测如下(1)-(3)中任一种的检测物所需的试剂和/或仪器：(1)RETN基因和KLK1基因；(2)RETN基因和KLK1基因编码的mRNA；(3)RETN基因和KLK1基因编码的蛋白。4.用于鉴别活动性结核病患者和结核潜伏感染者的系统，包含用于检测如下(1)-(3)中任一种的检测物：(1)RETN基因和KLK1基因；(2)RETN基因和KLK1基因编码的mRNA；(3)RETN基因和KLK1基因编码的蛋白。5.根据权利要求4所述的系统，其特征在于：所述检测物为检测如下(1)-(3)中任一种的检测物所需的试剂和/或仪器：(1)RETN基因和KLK1基因；(2)RETN基因和KLK1基因编码的mRNA；(3)RETN基因和KLK1基因编码的蛋白。6.根据权利要求1-3中任一所述的应用或根据权利要求4或5所述的系统，其特征在于：所述物质或所述系统还包含数据处理装置；所述数据处...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘丽萍，张宗德，陈效友，高孟秋，贾红彦，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京胸科医院，北京市结核病胸部肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11