肿瘤坏死因子抗体，其制备方法以及药物组合物技术

一种单克隆抗体Ｖ↓［Ｈ］链，其特征在于，具有选自下组的氨基酸序列：　　　　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１０中１－１１９；　　　　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１２中１－１１８；　　　　ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１４。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学领域。更具体地，本专利技术涉及肿瘤坏死因子抗体、其编码序列、制备方法及其应用。
技术介绍
肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor，TNF)是机体内的一种多功能免疫调节分子，它可以和细胞膜上的受体结合发挥作用，往往引起靶细胞的死亡(它的名称即来源于此)或招引免疫效应细胞在局部的聚集。TNFα是一种可溶性的同源三聚体亚基，分子量为17KD(Smith，et al.，J.Biol.Chem.2626951-6954，1987)。也发现有跨膜结合的前体TNFα，分子量为26KD(Kriegler，et al.，Cell5345-53，1988)。单核巨噬细胞在受到内毒素和其他一些刺激物刺激后，能够分泌TNFα和TNFβ，另外其他一些细胞也能分泌TNF。TNFα在类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)的病理进程中起十分关键的作用，患者或动物模型病变关节腔内的TNF水平异常升高(Feldman M，Brennan FM，Maini RN.The role of cytokines in rheumatoid arthritis.AnnRev Immunol 1996；14397；Grom A，Murray KF，Luyrink L等)。一方面，它和关节滑膜细胞的受体结合造成该细胞直接损伤；另一方面，它可以召集免疫效应细胞聚集至此，分泌更多的细胞因子，产生更强更持久的自身免疫反应。在RA病患部位有过量的TNF-α表达，是造成患病部位肿胀和疼痛的主要因素之一。而TNF单克隆抗体可以中和TNFα，在体内对TNF的活性起到了负调节的作用。而且有大量研究表明，TNF还是引起脓毒性休克综合症的主要介质。脓毒性休克综合症患者血清中TNF-α水平升高预示着死亡率或致残率升高。临床上应用TNF-α抗体或者其受体对脓毒性休克综合症有一定疗效。另外TNF抗体有疗效的疾病还包括细菌或病毒感染、慢性炎症、自身免疫疾病、恶性肿瘤和/或神经退行性疾病等。1987年，Cerami等人获得一种TNF的多克隆鼠抗体(EPO专利出版物0212489，1987年3月4日)，可用于细菌感染引起的休克诊断性免疫测定和治疗。后来又相继获得了TNF的单克隆抗体，如Rubin et al.，EPO专利出版0218868，1987年4月22日和Yone等人的EPO专利出版物0288088，1988年10月28日中所描述的。另外一些研究者描述了对重组人TNF特异性的单克隆抗体，在体外具有TNF中和活性(Liang，et al.，Biochem.Biophys.Res.Comm.137847-854，1986；Meager，et al.，Hybridoma 6305-311，1987)。但是，由于上述研究得到的多为鼠源抗体，这些抗体都存在不同程度的免疫原性高、特异性低和/或稳定性不够等问题，没有提供一种能够在体内发挥诊断或治疗作用。因此，本领域迫切需要建立既能够保持或提高抗体的亲和力和特异性，又能够降低或基本消除抗体免疫原性的抗TNF抗体，从而可以用于临床治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种特异性高、免疫原性低的抗TNF单克隆抗体。本专利技术的另一目的是提供所述抗TNF单克隆抗体的制备方法。本专利技术的另一目的是提供一种含所述抗TNF单克隆抗体的药物组合物。在本专利技术的第一方面，提供了一种单克隆抗体VH链，具有选自下组的氨基酸序列SEQ ID NO10中1-119；SEQ ID NO12中1-118；SEQ ID NO14。在本专利技术的第二方面，提供了一种单克隆抗体VL链，具有选自下组的CDR的氨基酸序列SEQ ID NO10中135-241；SEQ ID NO12中134-244；SEQ ID NO16。在本专利技术的第三方面，提供了一种单克隆抗体，其VH链具有选自下组的氨基酸序列SEQ ID NO10中1-119；SEQ ID NO12中1-118；SEQ ID NO14；且其VL链具有选自下组的氨基酸序列SEQID NO10中135-241；SEQID NO12中134-244；SEQ ID NO16。在一优选例中，所述的单克隆抗体的Fc区为人IgG的恒定区。在另一优选例中，所述抗体是单链抗体。在另一优选例中，所述抗体具有SEQ ID NO10或12所示的氨基酸序列。在本专利技术的第四方面，提供了一种DNA分子，它编码选自下组的多肽本专利技术上述的单克隆抗体VH链；本专利技术上述的单克隆抗体VL链；本专利技术上述的单克隆抗体。较佳地，所述的DNA分子具有选自下组的DNA序列SEQID NO9、11、13、和15。在本专利技术的第五方面，提供了一种药物组合物，它含有单克隆抗体和药学上可接受的载体，其中所述抗体的VH链具有选自下组的氨基酸序列SEQ ID NO10中1-119；SEQ ID NO12中1-118；SEQ ID NO14；且其VL链具有选自下组的氨基酸序列SEQ ID NO10中135-241；SEQ ID NO12中134-244；SEQ ID NO16。在本专利技术的第六方面，提供了本专利技术所述单克隆抗体的用途，它被用于制备治疗类风湿关节炎的药物。附图说明图1是质粒pL101的结构图。其中，pA表示SV40病毒的加“poly A”尾信号；hCMV promotor表示人巨细胞病毒的启动子(含增强子序列)；AmpR表示氨苄青霉素抗性基因；IgG1 constant表示人IgG1恒定区。图2显示了不同剂量的本专利技术单克隆抗体对类风湿关节炎的治疗作用。具体实施例方式本专利技术基于噬菌体抗体库技术克隆和表达肿瘤坏死因子抗体，经过筛选获得的抗体是全人源的，克服了目前存在的鼠源抗体免疫原性高的缺点。比之从杂交瘤等获取抗体基因，本专利技术的全人源和嵌合抗体制备程序先进简便、价格低廉，更重要的是这种直接从人外周血淋巴细胞中扩增抗体基因的方法，是解决杂交瘤技术等一直无法解决的人源性抗体来源问题的根本途径。本专利技术提供了一种嵌合或重组抗TNF人源化单克隆抗体，它包括人源恒区(如人源恒区IgG1-Fc)，经过人工设计后的重链可变区和轻链可变区具有独特的不同于现有技术的结构。本专利技术还提供了嵌合抗TNF单克隆抗体的氨基酸序列及其其可变区链，以及具有这些链的其他蛋白质或融合表达产物。具体地，本专利技术包括具有含超变区(互补决定区，CDR)的轻链和重链的任何蛋白质或蛋白质偶联物及融合表达产物(即免疫偶联物及融合表达产物)，只要该超变区与本专利技术的轻链和重链的超变区相同或至少90％同源性，较佳地至少95％同源性。抗体的抗原结合特性可由位于重链和轻链可变区的3个特定的区域来描述，称为超变区域(CDR)，将该段间隔成4个框架区域(FR)，4个FR的氨基酸序列相对比较保守，不直接参与结合反应。这些CDR形成环状结构，通过其间的FR形成的β折叠在空间结构上相互靠近，重链上的CDR和相应轻链上的CDR构成了抗体的抗原结合位点。可以通过比较同类型的抗体的氨基酸序列来确定是哪些氨基酸构成了FR或CDR区域。此外，最近还发现由轻链可变区构成的相关结构，与相应的重链可变区相比，其结合的动力学比较小，分离的重链可变区域自身具有抗原结合活性。本专利技术不仅包括完整的单克隆抗体，还包括具有免疫活本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马菁，
申请(专利权)人：马菁，
类型：发明
国别省市：