内切β-1,4-葡聚糖酶的分离提纯方法技术

本发明专利技术公开了一种内切β－１，４－葡聚糖酶的分离提纯方法。方法的步骤如下：１）首先，将粗纤维素酶溶于乙醇－水溶液中，配制粗纤维素酶质量百分比浓度为１～３％，乙醇体积百分比浓度为１０～４０％的溶液，充分振荡使溶液混合均匀；２）然后，取２０ｍＬ上述混合溶液加入到预热温度为２０℃～４０℃的高压釜中，继而通入预热温度为２０℃～４０℃，压力为３．５～８．０ＭＰａ的ＣＯ↓［２］，调节ｐＨ为３．８～４．２，并保持２５～６０分钟，过滤得内切β－１，４－葡聚糖酶。本发明专利技术具有分离后所得产品可保持较高酶活，水溶性蛋白质易于形成沉淀等的特点，是一种操作参数可精确控制，操作过程无波动，沉淀能力较强的内切β－１，４－葡聚糖酶的分离提纯方法。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
,4－葡聚糖酶的分离提纯方法
本专利技术涉及一种分离纯化方法，尤其是涉及一种采用加压CO2作为挥发性酸，乙醇作为助沉淀剂的等电沉淀技术分离提纯内切β-1，4-葡聚糖酶的方法。
技术介绍
内切β-1，4-葡聚糖酶是纤维素酶中的一种。纤维素酶(cellulase)指的是降解纤维素的一类酶的总称，其最大的用途是把纤维素通过酶法水解成葡萄糖。纤维素是自然界中含量最丰富的碳水化合物，超过其他碳水化合物的总和，是一类重要的可再生资源和能源。因而纤维素酶的研究被认为是新世纪开发利用可再生性资源的关键，对于解决工农业原料来源、能源危机、环境污染等问题具有十分重要的意义。现在纤维素酶应用已扩展到医药、纺织、日用化工、造纸、食品发酵、工业洗涤、烟草、石油开采、废水处理及饲料等许多领域。目前尚未有专门针对内切β-1，4-葡聚糖酶的分离提纯工艺，该酶主要存在于粗纤维素酶之中。作为本方法原料的粗纤维素酶由里氏木霉(菌株3.3006经诱变得到，CGMCC菌种目录，1997第三版)经固体培养后，盐析制得。该提纯工艺存在酶活损失较为严重等缺点，且产品一般为多种酶类混合制品，不利于单一酶组分性质的研究和单一酶组分的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种内切β－１，４－葡聚糖酶的分离提纯方法，其特征在于方法的步骤如下：１）首先，将粗纤维素酶溶于乙醇－水溶液中，配制粗纤维素酶质量百分比浓度为１～３％，乙醇体积百分比浓度为１０～４０％的溶液，充分振荡使溶液混合均匀；２）然后 ，取２０ｍＬ上述混合溶液加入到预热温度为２０～４０℃的高压釜中，继而通入预热温度为２０～４０℃，压力为３．５～８．０ＭＰａ的ＣＯ↓［２］，调节ｐＨ为３．８～４．２，并保持２５～６０分钟，过滤得内切β－１，４－葡聚糖酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：姚善泾，关怡新，齐祥明，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]