利用农杆菌介导的培育籼稻转基因植株的方法技术

本发明专利技术属于植物转基因技术领域。公开了一种利用农杆菌介导的培育转基因籼稻植株的新方法。筛选了几个专用培养基，对四个有代表性籼稻如明恢６３、珍汕９７Ｂ、中４１９和Ｗ９８６４Ｓ等品种的外植体进行了基因转化试验，获得了较高效率的转基因小植株。转化率分别为明恢６３达２３．４％，珍汕９７Ｂ达９．３％，中４１９达８．５％以及Ｗ９８６４Ｓ达２２．２％。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用农杆菌介导的培育转基因籼稻植株的方法，它包括以下步骤：第一步：愈伤组织的诱导将籼稻的成熟胚、幼胚或花药作外植体，先用７５％酒精清洗所述的外植体１分钟，再用０．１５％的升汞浸泡外植体１０～１５分钟，无菌水洗涤，然后将灭 过菌的外植体接入诱导培养基，在２６℃下暗培养，诱导出愈伤组织；第二步：愈伤组织的继代培养从第一步得到的愈伤组织中挑取活力旺盛、表面干燥的愈伤组织转入继代培养基，置于２６℃暗培养条件下，继代培养２０天；第三步：愈伤组织 的预培养将继代培养后的愈伤组织切成约０．２厘米大小的于上组织块，接入预培养培养基，于２６℃下暗培养４天；第四步：愈伤组织与农杆菌的共培养将预培养后得到的小块愈伤组织加入农杆菌工作菌液浸泡３０ｍｉｎ，然后接入共培养培养 基，于１９～２０℃下暗培养３天；第五步：抗性愈伤组织的筛选将共培养得到的愈伤组织用无菌水洗净，加入含４００ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素或头孢霉素的无菌水溶液浸泡１５ｍｉｎ，用无菌滤纸吸干后接入筛选培养基，于２６℃下暗培养，每两周继代１ 次，共筛选继代３次，直到长出所需的抗性愈伤；第六步：抗性愈伤组织的预分化将第五步得到的抗性愈伤组织接入预分化培养基，于２６℃下暗培养７天；第七步：抗性愈伤组织再生植株经预分化后的抗性愈伤组织转入分化培养基，２ ５℃，２０００Ｌｕｘ，光照培养，再生转基因植株。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林拥军，张启发，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]