大肠埃希氏菌菌株NF在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用制造技术

本发明专利技术公开了大肠埃希氏菌菌株NF在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用。本发明专利技术公开的大肠埃希氏菌菌株NF为保藏编号为CGMCC No.12646的Escherichia菌株NF。实验证明，非酒精性脂肪肝动物灌胃菌株NF后，体重增高，空腹血糖水平升高，糖耐量受损，血清ALT和AST以及炎性因子(TNF‑α，IL‑6，IFN‑γ，IL‑17A)升高，病理学上出现了脂肪性肝炎的表现，脂肪酸合成相关基因水平升高，动物非酒精性脂肪肝转变为非酒精性脂肪性肝炎。表明，本发明专利技术的菌株NF可以促进非酒精性脂肪肝转为非酒精性脂肪性肝炎，可以用来制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型。

The application of Escherichia coli strain NF in the preparation of animal model of nonalcoholic steatohepatitis

【技术实现步骤摘要】
大肠埃希氏菌菌株NF在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用
本专利技术涉及生物
中大肠埃希氏菌菌株NF在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用。
技术介绍
非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholicfattyliverdisease，NAFLD)已经成为许多国家最为常见的慢性肝脏疾病之一，NAFLD包含非酒精性脂肪肝(Non-alcoholicfattyliver，NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并最终可以进展为肝硬化及肝癌。NASH是病情较为严重的阶段，以肝细胞脂质沉积伴有炎症为病理特点，如果不加以干预，其中约有10％-25％的病人会最终发展为肝硬化。关于NAFLD的发病机制尚不完全清楚。它与宿主遗传和环境因素有关，目前广为接受的是“多重打击”学说，胰岛素抵抗是NAFLD发生的“首次打击”，除此以外，来自饮食成分(果糖、脂肪)以及脂肪组织中脂肪酸、炎性因子等信号，肠源性因素以及免疫因素等也促进了NAFLD的发生。近年来，肝脏和肠道的相互关系引起关注，这是由于肝脏和肠道在解剖学上通过门静脉相互连接，来自于肠道中的血液通过门静脉流入肝脏，从而使肝脏极易暴露于从肠道来源的食物抗原和代谢产物，因此肝脏和肠道在功能上有着密不可分的联系，许多研究提示肠道菌群可能在NAFLD的发病机制中起到了重要作用。人体肠道中的细菌数以亿计，拥有较宿主基因150倍之多的基因数，被称为微生物组(microbiome)，正常情况下，它是一个复杂、动态、多样的微生物群体，形成微生态平衡，在机体健康和疾病中发挥重要作用，它参与了能量获取和储存、代谢以及与肠道免疫系统的相互作用，促进免疫细胞成熟和正常免疫反应的发生。菌群结构一旦失调，则会导致诸如肥胖、糖尿病、非酒精性脂肪肝，炎症性肠病、抑郁及多发性硬化等多种疾病的发生。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了下述任一应用：1)埃希氏菌属(Escherichia)在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用；2)埃希氏菌属(Escherichia)与非酒精性脂肪肝动物在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用；3)菌剂在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用；所述菌剂的活性成分为埃希氏菌属(Escherichia)；4)所述菌剂与非酒精性脂肪肝动物在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用。上述应用中，所述埃希氏菌属(Escherichia)可为保藏编号为CGMCCNo.12646的大肠埃希氏菌菌株NF。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了下述M1)或M2)：M1)保藏编号为CGMCCNo.12646的大肠埃希氏菌菌株NF；M2)活性成分为保藏编号为CGMCCNo.12646的大肠埃希氏菌菌株NF的菌剂。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型的成套产品，所述成套产品由下述P1)-P4)中的任一种与非酒精性脂肪肝动物组成：P1)埃希氏菌属(Escherichia)；P2)保藏编号为CGMCCNo.12646的大肠埃希氏菌菌株NF；P3)活性成分为埃希氏菌属(Escherichia)的菌剂；P4)活性成分是保藏编号为CGMCCNo.12646的大肠埃希氏菌菌株NF的菌剂。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型的方法。本专利技术所提供的制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型的方法，包括对动物或非酒精性脂肪肝动物施用埃希氏菌属(Escherichia)或活性成分为埃希氏菌属(Escherichia)的菌剂，得到非酒精性脂肪性肝炎动物模型。上述方法中，所述埃希氏菌属(Escherichia)可为保藏编号可为CGMCCNo.12646的大肠埃希氏菌菌株NF。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了下述X1)或X2)：X1)抑制埃希氏菌属(Escherichia)的物质在制备治疗非酒精性脂肪性肝炎产品中的应用；X2)抑制埃希氏菌属(Escherichia)的物质在治疗非酒精性脂肪性肝炎中的应用。上述应用中，所述埃希氏菌属(Escherichia)可为保藏编号可为CGMCCNo.12646的大肠埃希氏菌菌株NF。本专利技术中，所述非酒精性脂肪肝(NAFL)动物可为饲喂动物45％fat实验动物饲料得到的具有如下表型的动物：肝细胞脂肪变性和脂质异位贮积，但无炎症、坏死和纤维化等其他明显组织学改变。所述45％fat实验动物饲料具体可为江苏美迪森生物医药有限公司的货号MD12032的产品。本专利技术中，所述动物可为哺乳动物。所述哺乳动物具体可为小鼠，如SPF级C57/BL6小鼠。实验证明，在给非酒精性脂肪肝动物灌胃保藏编号可为CGMCCNo.12646的大肠埃希氏菌菌株NF(以下简称菌株NF)后，动物体重有了较快增高趋势，空腹血糖水平升高，糖耐量受损，血清ALT和AST均较未灌胃菌株NF非酒精性脂肪肝动物与正常动物升高，并且病理学上出现了脂肪性肝炎的表现，肝脏脂肪酸合成相关基因水平升高。表明，菌株NF影响了非酒精性脂肪肝动物的代谢功能，使其更快速的发展为非酒精性脂肪性肝炎。此外，非酒精性脂肪肝动物灌胃菌株NF后血清中TNF-α，IL-6，IFN-γ，IL-17A均较未灌胃菌株NF非酒精性脂肪肝动物与正常动物升高，表明，菌株NF可以引起非酒精性脂肪肝动物低度全身系统性炎症。说明，本专利技术的菌株NF可以促进NAFL转为非酒精性脂肪性肝炎，可以用来制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型，也可作为治疗非酒精性脂肪性肝炎靶标菌。生物材料保藏说明生物材料的分类命名：大肠埃希氏菌Escherichiacoli生物材料的菌株编号：NF生物材料的保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心生物材料的保藏单位简称：CGMCC生物材料的保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101生物材料的保藏日期：2016年6月20日生物材料的保藏中心登记入册编号：CGMCCNo.12646附图说明图1为高脂饮食喂养12周后HFD组小鼠肝细胞。图2为正常喂养12周后ND组小鼠肝细胞。图3为菌株NF悬浮液灌胃后小鼠体重的变化。图4为0min小鼠的血糖含量(空腹血糖含量)。图5为0min-120min小鼠的血糖含量变化及OGTT曲线下面积。图6为各组小鼠门静脉血清中炎性因子(TNF-α，IFN-γ，IL-6和IL-17A)的表达水平。图7为小鼠血中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平检测结果。图8为各组小鼠的肝脏组织的HE染色结果(×200)。图9为各组小鼠的肝脏内脂肪酸合成基因FASN在mRNA水平上的相对表达量。其中，*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；ns，无明显统计学差异。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的SPF级C57/BL6小鼠为北京维通利华实验动物技术有限公司产品。实施例1、大肠本文档来自技高网...

【技术保护点】
下述任一应用：1)埃希氏菌属(Escherichia)在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用；2)埃希氏菌属(Escherichia)与非酒精性脂肪肝动物在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用；3)菌剂在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用；所述菌剂的活性成分为埃希氏菌属(Escherichia)；4)所述菌剂与非酒精性脂肪肝动物在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用。

【技术特征摘要】
1.下述任一应用：1)埃希氏菌属(Escherichia)在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用；2)埃希氏菌属(Escherichia)与非酒精性脂肪肝动物在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用；3)菌剂在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用；所述菌剂的活性成分为埃希氏菌属(Escherichia)；4)所述菌剂与非酒精性脂肪肝动物在制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述埃希氏菌属(Escherichia)为保藏编号为CGMCCNo.12646的大肠埃希氏菌菌株NF。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述动物为a1)或a2)：a1)哺乳动物；a2)小鼠。4.下述M1)或M2)：M1)保藏编号为CGMCCNo.12646的大肠埃希氏菌菌株NF；M2)活性成分为保藏编号为CGMCCNo.12646的大肠埃希氏菌菌株NF的菌剂。5.制备非酒精性脂肪性肝炎动物模型的成套产品，由下述P1)-P4)中的任一种与非酒精性脂肪肝动物组成：P1)埃希氏菌属(Escherichia)；P2)保藏编号为C...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘玉兰，武娜，蒋伟伟，吴哲，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：北京,11