一种提取植物RNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种提取植物ＲＮＡ的方法。该方法，包括以下步骤：１）在植物材料中加入６０％－８０％的丙酮和１％－３％的巯基乙醇，进行抽提，弃上清液，保留抽提过的植物材料；２）加入提取液Ｉ，并加入蛋白酶Ｋ，４０－４５℃水浴０．５－２小时；３）加入ＫＣｌ，使其终浓度为１５０－１８０ｍｏｌ／Ｌ，－１～１℃放置１－３小时后，９０００－１３０００ｇ离心１５－３０分钟，收集上清溶液；４）加入ＬｉＣｌ，使其终浓度为１．５－２ｍｏｌ／Ｌ，０－５℃放置３－１０小时后，９０００－１３０００ｇ，１５－３０分钟，收集沉淀；５）加入ＬｉＣｌ，使其终浓度为１－１．８ｍｏｌ／Ｌ　　ｍｏｌ／Ｌ，９０００－１３０００ｇ，１５－２５分钟，重复１－３次，得到的沉淀即为提取的ＲＮＡ。该方法解决了ＲＮＡ中多糖、酚类等化合物氧化问题；获得的ＲＮＡ纯度高，操作过程中不易降解；ＲＮＡ在提取过程中损失少。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种提取植物ＲＮＡ的方法，包括以下步骤：１）在植物材料中加入含有体积百分含量为６０％－８０％的丙酮和体积百分含量为１％－３％的巯基乙醇混合液，进行抽提，９０００－１３０００ｇ离心１０－２０分钟，弃上清液，保留抽提过的植物材料；　 　２）在步骤１）抽提过的植物材料中加入提取液Ｉ，并加入蛋白酶Ｋ，４０－４５℃水浴０．５－２小时；所述提取液Ｉ的ｐＨ为８－１０，按如下方法配制：取ＳＤＳ０．２－１ｇ，硼砂１－２ｇ，脱氧胆酸或脱氧胆酸盐０．２－０．６ｇ和ＥＧＴＡ０．２７ －０．５ｇ，加水定溶至２０ｍｌ后用２０μｌＤＥＰＣ振荡混匀，３７℃放置４－１０小时，灭菌后加入１００－２００μｌ１ＭＤＴＴ、１００－２００μｌＮｏｎｉｄｅｔＰ－４０和０．２－０．５ｇＰＶＰ－４０，混匀后使用；３） 加入ＫＣｌ，使其终浓度为１５０－１８０ｍｍｏｌ／Ｌ，－１～１℃放置１－３小时后，４℃，９０００－１３０００ｇ离心１５－３０分钟，收集上清溶液；４）在步骤３）收集的上清溶液中加入ＬｉＣｌ，使其终浓度为１．５－２ｍｏｌ／Ｌ，０－５℃放置 ３－１０小时后，９０００－１３０００ｇ离心１５－３０分钟，收集沉淀；５）在步骤４）收集的沉淀中加入ＬｉＣｌ，使其终浓度为１－１．８ｍｏｌ／Ｌ，９０００－１３０００ｇ离心１５－２５分钟，重复１－３次，得到的沉淀即为提取的ＲＮＡ。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张莉莉，张蕾，张会新，夏勉，王喜萍，
申请(专利权)人：北京未名凯拓农业生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]