一种融合基因载体的构建表达及应用制造技术

本发明专利技术利用基因工程技术，将功能类似或功能互补的２种细胞因子，通过人工接头改造并构建出具有复合功能的细胞因子融合蛋白：人端粒酶逆转录酶（ｈＴＥＲＴ）／人白细胞介素１８（ｈＩＬ１８）融合蛋白。并建立人端粒酶逆转录酶（ｈＴＥＲＴ）／人白细胞介素１８（ｈＩＬ１８）融合蛋白载体的表达，使其有可能既具有对肿瘤细胞杀伤靶向性强的特点，又能明显提高树突状细胞介导的免疫效应，扩大其抗肿瘤范围，为制备理想的树突状细胞疫苗奠定了实验基础，研究表明在恶性血液病患者达到异基因骨髓移植相当的疗效，可明显降低医疗费用，为研制肿瘤的治疗性疫苗提供基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属生物技术，涉及一种融合基因载体的构建表达及在制备肿瘤生物治疗药物中的应用。
技术介绍
白细胞介素18(IL-18)是1995年克隆的一种新型细胞因子，又称γ干扰素诱导因子。能刺激γ干扰素的分泌，增强ThI型免疫反应。诱生IL-18的早期研究主要集中于肝脏，后来有研究者用体外培养的巨噬细胞经适当诱导来获得IL-18cDNA。本研究从健康人外周血单核细胞的RNA中，直接经RT-PCR法扩增出IL-18基因，说明生理情况下，单核细胞就有IL-18 MRNA的表达。在功能上，IL-18更接近于IL-12，被认为是一种很有潜力的抗肿瘤，抗感染的细胞因子。近年的研究发现IL-18可以促进DC的成熟，显著提高DC的抗原递呈功能，并且能吸引II类DC和诱导ThI型免疫反应，国内陈吉泉等报道以mIL-18基因修饰和3LL Lewis肺癌细胞提取物致敏的DC治疗后，小鼠肺部转移癌有明显的抑制，肺转移结节减少，而且CTL、NK杀伤活性显著增强，但这种CTL效应只针对3LL Lewis肺癌细胞，而对其他肿瘤细胞株几乎无杀伤作用。 目前研究表明，绝大多数人类恶性肿瘤均存在高水平的端粒酶活性，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人端粒酶逆转录酶／人白细胞介素１８融合蛋白载体，ＳＥＱＩＤＮＯ：１为该融合蛋白的基因序列。

【技术特征摘要】
1.一种人端粒酶逆转录酶/人白细胞介素18融合蛋白载体，SEQ ID NO1为该融合蛋白的基因序列。2.根据权利要求1所述的人端粒酶逆转录酶/人白细胞介素18融合蛋白载体的构建，其特征是通过以下步骤实现PCDNA3.1(+)/hTERT-hIL18质粒的构建标本为正常人外周血10毫升，淋巴细胞分离液分离单个核细胞，用Trizol试剂盒提取总RNA，检测A260/A280＞1.8，hIL18 cDNA的合成采用Promega公司的逆转录试剂盒，基因扩增采用PCR法，PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳检测有无目的基因，将IL-18PCR扩增、电泳、回收和纯化片段，通过T-A克隆，经DNA测序鉴定后亚克隆到PCDNA 3.1(+)/hTERT质粒中Nhe I和Hind III位点之间，在两个基因连接区插入直链氨基酸，连接后，以氯化钙沉淀法转化大肠杆菌DH5α，接种于含有氨苄抗性的琼脂平皿，挑选阳性菌落，接种于2毫升含有氨苄的LB液体培养基中过夜，抽提质粒。3.根据权利要求2所述的人端粒酶逆转录酶/人白细胞介素18融合蛋白载体的构建，其特征是PCR引物1CTGGCTAGCATGGCTGCTGAACCAGTAGAAG，Nhe I位点，引物2GGGAAGCTTGTCTTCGTTTTGAACCAGTGA，Hind III位点。4.根据权利要求2所述的人端粒酶逆转录酶/人白...

【专利技术属性】
技术研发人员：童向民，金洁，姚航平，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]