一种双链小分子干扰ＲＮＡ，其特征是由具有下述核苷酸序列的正义链和反义链组成： 正义链５′－ＡＣＵＧＧＡＣＡＧＡＧＡＡＡＧＡＧＣＣＸ－３′， 反义链３′－ＸＵＧＡＣＣＵＧＵＣＵＣＵＵＵＣＵＣＧＧ－５′ 其中Ｘ代表ｔｔ、ＴＴ或ＵＵ。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一个凋亡抑制因子survivin基因为靶标的小分子干扰RNA(siRNA)，及其抗肿瘤的用途。
技术介绍
恶性肿瘤是当前威胁人类生命健康的主要杀手之一，尽管各种的治疗方法不断出现，但目前还没有找到真正有效的根治方法，因此肿瘤的治疗是长期困扰医学界的世界性难题，这也迫使科研工作者不断寻找新的技术和方法，试图从根本上攻克癌症。凋亡抑制基因survivin是1997年发现的一种重要的肿瘤相关基因，该基因是Ambrosini等(.Nature Med，1997，3(8)917-921)在人类基因组文库中筛选克隆到的，它定位于17q25，该基因具有两个突出的特点①几乎在所有种类的肿瘤组织中特异性地表达，而正常组织几乎没有表达；②具有抗肿瘤细胞凋亡、促进有丝分裂、调节细胞周期、参与血管形成和放化疗耐受多种功能于一体，而引起了国内外学者的广泛关注，成为IAP家族中最令人瞩目的一员。有研究者(.Lab Invest，1999，79(11)1327-1333；Am J Pathol，1998，152(1)43-49)对正常增殖细胞中survivin基因的潜在分布进行研究发现包括皮肤表面的角化细胞、肠道的上皮细胞和正常的骨髓细胞在内，在各种有丝分裂细胞系中均没有检测到survivin基因的表达；成人体内只有胸腺、生殖腺中有微量表达，但在14-21wk的胎儿不同部位组织中均可以明显检测到survivin表达。当这些组织发育成熟后，就很难检测到survivin的表达。这表明survivin参与了正常胚胎组织的发育过程，具体的机制目前尚不明确。同时也充分证实，在绝大多数正常成人组织中survivin基因并不表达。因此，针对survivin基因的靶向性治疗的毒副作用也可能降到最低。有研究证实(.Lab Invest，1999，79(11)1327-1333；Cancer Res，1998，58(23)5315-5320)，survivin基因是肿瘤组织中表达上调最为普遍的基因之一。在大多数肿瘤组织中，如肺癌、肝癌、白血病、结直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌和50％以上的高分化淋巴瘤中survivin基因的表达水平异常升高，且与个体发育和组织分化平衡有关(Cell Death Differ，2002，9(12)1334-1342；Arch Pathol Lab Med，2004，128(1)39-43；Acta Neuro pathol(Berl)，2002，104(1)105-109；J Cancer Res Clin Oncol，2002，128(6)302-306)。这些现象显示survivin基因在癌症中可能处于失控的表达状态。survivin基因主要有以下功能抑制细胞凋亡、参与细胞周期调节、参与血管形成、参与肿瘤对放化疗的耐受。体外实验表明，(1)survivin可以通过其唯一的BIR结构域与细胞凋亡效应蛋白酶caspase-3和caspase-7结合，抑制他们的活性，并抑制由Fas，Bax、抗癌药物诱导的细胞凋亡(Cancer Res，1998，58(23)5315-5320)。survivin抑制细胞凋亡的另一作用机制可能是survivin在细胞核内与Cdk4形成复合物，使p21在Rb蛋白磷酸化过程中释放出来，释放出来的p21易位到线粒体内，并以N-末端的氨基酸序列与caspase-3前体形成复合物，使caspase-3前体不能活化，从而抑制由Fas介导的细胞凋亡(Oncogene，2000，19(10)1346-1353)。(2)BIR结构可以直接同线粒体活化因子Smac/DIABLO相作用间接抑制Caspases的级联反应，阻断线粒体依赖的凋亡途径(Cell，2000，102(1)33-42)。(3)Cdc2可以使survivin磷酸化后再同微管与纺锤体结合，抑制Caspase-9的活化和Caspase-3对微管结构蛋白的水解，维持了微管与纺锤体结构的稳定性(Cell，2000，102(1)33-42；Nature，1998，396(6711)580-584)。(4)由线粒体释放出来的凋亡诱导因子AIF可以直接进入细胞核中，导致染色体浓缩、断裂，其作用不依赖caspase。survivin可以抑制AIF的核转位，从而抑制AIF的促凋亡作用(Oncogene，2004，23(1)39-48)。(5)survivin可以通过抑制Caspase对Mdm2的剪切在翻译后水平调节Mdm2，使其降解减少，从而使Mdm2对p53的降解相对增加(Oncogene，2004，23(49)8146-8153)。因此，survivin可以负向调节p53的表达，也是其抗凋亡的机理之一。survivin在G2/M期通过细胞周期调控的方式表达并可能抑制有丝分裂期细胞的凋亡。免疫荧光显示survivin在γ-tubulin周围形成短放射状的“壳”，着色于中心体旁，与γ-tubulin共定位于纺锤体中心(Nat Struct Biol，2000，7(7)602-608)。在体外分别将HeLa细胞阻断在G1期、S期、G2/M期，检测细胞内源性survivin mRNA的表达，发现在G1期检测不到survivin的表达，在S期增加6～7倍，在G2/M期，其表达上调40倍(Nature，1998，396(6711)580-584)。Skoufias等(Cell Biol，2000，10(7)1575-1582)在质粒转染的HeLa细胞系中发现，survivin参与了有丝分裂，调控微管组织中心及纺锤体的形成，是调控细胞增殖与死亡之间平衡的重要分子。有丝分裂初期，在微管动力作用下，survivin与纺锤体中的微管相结合而抑制凋亡，与微管分离可使其抗凋亡作用丧失，并增强caspase-3的活性，这是有丝分裂时细胞死亡的机制。survivin在癌细胞中的过表达可以克服这些凋亡关卡，使细胞加快向S期转换，抑制G1期静止，从而促进细胞增殖。研究表明，无survivin表达的细胞可形成卵裂沟和收缩环，但不能完成正常的细胞质流动过程，因此导致多核细胞的形成。survivin和INCEN(inner centromereprotein在微管组装、卵裂沟的形成、细胞质流动等协同事件中有重要作用；并可通过与CDK4/p 16(INK4a)和CDK2/cycline E复合体活化的竞争性作用，导致Rb蛋白磷酸化，以启动细胞有丝分裂(Oncogene，2000，19(29)3225-3234)。血管形成过程取决于血管内皮细胞生存和凋亡的平衡。正常情况下，血管内皮细胞中很难检测到survivin。在血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)的刺激下，静止的血管内皮表达survivin的能力约可增强4倍，VEGF的许多抗凋亡活性都是通过诱导内皮细胞表达survivin来实现的(Am J Pathol，2001，158(5)1757-1765)。血管生成素一1(angiopoietin-1，Ang-1)是胚胎血管形成过程中维持血管稳定性和管腔形成的关键因子。它没有促进本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种双链小分子干扰ＲＮＡ，其特征是由具有下述核苷酸序列的正义链和反义链组成：正义链５′－ＡＣＵＧＧＡＣＡＧＡＧＡＡＡＧＡＧＣＣＸ－３′，反义链３′－ＸＵＧＡＣＣＵＧＵＣＵＣＵＵＵＣＵＣＧＧ－５′其中Ｘ代表ｔｔ、ＴＴ或ＵＵ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：奚涛，陆云华，邢滢滢，丁黎，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：84
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