一种H5亚型禽流感病毒荧光微球检测卡及其应用制造技术

一种H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条，包括背衬(1)、吸水纸垫(7)、纤维素膜(2)、样品垫(4)、以及喷涂有荧光微球标记H5亚型禽流感病毒单克隆抗体(4A3)的荧光标记垫，其中，纤维素膜(2)的上表面从左到右依次设有另一株H5亚型禽流感病毒单克隆抗体(4B6)层及羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白层，其中H5亚型禽流感病毒单克隆抗体(4B6)层上设有检测线(5)，羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白层上设有对照线(6)。H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条操作简单，实用性极强，检测效率较高。

A fluorescent microsphere detection card for H5 subtype avian influenza virus and its application

A fluorescent H5 subtype of avian influenza virus immunochromatographic strip, comprising a backing (1), absorbent paper washer (7), cellulose membrane (2), the sample pad (4), and coated with fluorescent microspheres labeled H5 monoclonal antibody against avian influenza virus (4A3) fluorescent labeling pad, wherein the fiber plain film (2) on the surface from left to right with the other strains of H5 subtype avian influenza virus monoclonal antibody (4B6) and Goat anti mouse immunoglobulin Balb/c, the monoclonal antibody of H5 subtype avian influenza virus (4B6) layer is provided with a detection line (5), Goat anti mouse Balb/c the immune globulin layer is arranged on the control line (6). The H5 subtype avian influenza virus fluorescent chromatogram test paper is easy to operate, is very practical and has high detection efficiency.

【技术实现步骤摘要】
一种H5亚型禽流感病毒荧光微球检测卡及其应用
本专利技术属于病毒检测领域，具体涉及一种H5亚型禽流感病毒荧光微球检测卡及其应用。
技术介绍
禽流感(Avianinfluenza，AI)是由正粘病毒科A型流感病毒引起的禽类高度接触性传染病，有16个HA亚型和10个NA亚型，禽流感病毒(Avianinfluenzavirus，AIV)是养禽业毁灭性疾病之一，属于正粘病毒科流感病毒属(Influenzavirus)，其感染范围较广，根据病毒致病性的不同，可分为高致病性禽流感病毒和低致病性禽流感病毒。高致病性的H5亚型禽流感病毒不仅对家禽造成严重危害，严重影响国际贸易，还对人类的健康构成严重威胁。数年来,H5N1亚型禽流感病毒一直严重威胁着禽类健康,并造成了巨大的经济损失。近年,世界各地相继出现H5N1亚型禽流感病毒感染人类的情况,感染死亡率高达50％,提示其具有造成大流行的潜能。H5亚型AIV首先于2014年1月在韩国引起疫情暴发，随后迅速席卷了亚洲、欧洲和北美洲；2016年10月，欧洲再次暴发了H5N8亚型高致病性禽流感疫情，且传播迅速，危害严重。目前，针对AIV的检测主要是通过病原分离和血清学试验，这些方法耗时、费力，在实际应用中对混合感染的AIV的检测具有一定的局限性。实时荧光定量PCR是将普通PCR方法与荧光检测方法相结合，通过在PCR反应体系中加入能与扩增模板特异性结合、并标有荧光基团的探针，通过荧光积累来实时监测PCR进程，结果可以直接通过电脑实时观察，不需要进行凝胶电泳，样品中相应病毒的含量可以根据荧光曲线的域值估算，实现了实时、定量检测的目的，但所需检测仪器昂贵，实验室条件严苛，不易在基层兽医部门推广。胶体金检测法检测灵敏度太低，很容易造成漏检。因此急需要一种能够快速简便、检测成本低、检测效率高、灵敏度高的H5亚型禽流感病毒的检测已经成为行业内的一大问题。
技术实现思路
基于荧光微球的免疫层析检测技术相较胶体金检测可提高10倍-100倍，既能实现现场检测，又能够实现超灵敏检测，是取代禽流感胶体金低灵敏检测的必然趋势。通过制订超前的、达到国际领先水平的禽流感病毒系列荧光现场检测标准，可切实提高处置禽流感突发公共事件的能力，将禽流感突发公共事件造成的影响降到最低限度。即，本专利技术的目的在于提供一种H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条，包括背衬(1)、吸水纸垫(7)、纤维素膜(2)、样品垫(4)、以及喷涂有荧光微球标记H5亚型禽流感病毒单克隆抗体(4A3)的荧光标记垫，纤维素膜(2)位于背衬(1)上，荧光标记垫(3)的右侧位于纤维素膜(2)上表面的左侧，荧光标记垫(3)的左侧伸出到纤维素膜(2)外，样品垫(4)的左侧位于荧光标记垫(3)上，样品垫(4)的右侧伸出到荧光标记垫(3)外，吸水纸垫(7)的左侧位于纤维素膜(2)上表面的右侧，吸水纸垫(7)的右侧伸出到纤维素膜(2)外；其中，纤维素膜(2)的上表面从左到右依次设有另一株H5亚型禽流感病毒单克隆抗体(4B6)层及羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白层，其中H5亚型禽流感病毒单克隆抗体(4B6)层上设有检测线(5)，羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白层上设有对照线(6)。优选地，本专利技术所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述纤维素膜(2)为硝酸纤维素膜。优选地，本专利技术所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述硝酸纤维素膜的型号为硝酸纤维素膜140。优选地，本专利技术所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述纤维素膜(2)的厚度为0.2mm、宽度为3.5mm。优选地，本专利技术所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述荧光微球标记H5亚型禽流感病毒抗体中荧光微球为平均直径为110nm、羧基修饰的荧光微球。优选地，本专利技术所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述荧光微球与H5亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的质量比例为5:0.35。优选地，本专利技术所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述检测线喷涂H5亚型禽流感病毒抗体的包被量为0.5μl/cm～1.5μl/cm；质控线用于划膜的羊抗鼠二抗的包被量为0.5μl/cm～1.5μl/cm。优选地，本专利技术所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述检测线用于划膜的禽流感病毒单克隆抗体(4B6)的包被浓度为1.5mg/ml～2.1mg/ml；荧光微球与H5亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体(4A3)偶联物的喷量为2.0μl/cm～2.5μl/cm。优选地，本专利技术所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述质控线喷用于划膜的羊抗鼠二抗的浓度为0.5mg/ml～2mg/ml本专利技术的另一目的在于提供上述H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条在检测H5亚型禽流感病毒中的应用，即使用如上所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条对样品进行检测：如在对照线(6)没有条带，则检测无效；如在对照线(6)出现条带，检测线(5)未出现条带，则为阴性；如在对照线(6)出现条带，检测线(5)出现条带，则为阳性。本专利技术与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术所述的荧光层析试纸条在使用时，只需要将待检测动物的口腔或泄殖腔粘液溶液、组织液滴加在样品垫上，当样品有H5亚型禽流感病毒时，则H5亚型禽流感病毒的抗原与荧光标记垫上的荧光标记H5AIV单抗(4A3)发生反应生成H5亚型禽流感病毒-荧光标记H5AIV单抗的复合物，H5亚型禽流感病毒-荧光标记H5AIV单抗(4A3)的复合物向右移动至H5AIV单抗(4B6)层时，则形成H5AIV单抗(4B6)-H5亚型禽流感病毒-荧光标记H5AIV单抗(4A3)的复合物，并在检测线附近形成激发荧光条带，同时未结合的荧光标记H5AIV单抗向右移动，并与羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白反应生成羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白-荧光标记抗H5AIV单抗(4A3)的复合物，从而在对照线附近形成激发荧光条带，即在用特定荧光层析分析仪检测时，当检测线及对照线上同时出现荧光条带时，则说明待检测动物的液体上含有H5亚型禽流感病毒，操作简单，实用性极强，检测效率较高。附图说明图1为本专利技术的H5亚型禽流感病毒荧光层析检测卡研制和应用技术路线图；图2为本专利技术H5亚型禽流感病毒荧光层析检测卡纵切面和正面示意图；图3为本专利技术的荧光层析检测卡检测反应示意图；图4为本专利技术一个实施例中的H5亚型禽流感病毒荧光微球检测卡的测试结果示意图；图5为本专利技术一个实施例中的H5亚型禽流感病毒荧光检测卡测试结果图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术做进一步详细描述：参考图2，本专利技术所述的荧光层析试纸条结构包括背衬1、吸水纸垫7、纤维素膜2、样品垫4、以及含有荧光标记H5AIV单抗(4A3)的荧光标记垫3，纤维素膜2位于背衬1上，荧光标记垫3的右侧位于纤维素膜2上表面的左侧，荧光标记垫3的左侧伸出到纤维素膜2外，样品垫4的左侧位于荧光标记垫3上，样品垫4的右侧伸出到荧光标记垫3外，吸水纸垫7的左侧位于纤维素膜2上表面的右侧，吸水纸垫7的右侧伸出到纤维素膜2外；纤维素膜2的上表面从左到右依次设有H5AIV单抗(4B6)层及羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白层，其中H5AIV单抗(4B6)层上设有检测线5，羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白层上设有对照线6。需要说明本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条，包括背衬(1)、吸水纸垫(7)、纤维素膜(2)、样品垫(4)、以及喷涂有荧光微球标记H5亚型禽流感病毒单克隆抗体(4A3)的荧光标记垫，纤维素膜(2)位于背衬(1)上，荧光标记垫(3)的右侧位于纤维素膜(2)上表面的左侧，荧光标记垫(3)的左侧伸出到纤维素膜(2)外，样品垫(4)的左侧位于荧光标记垫(3)上，样品垫(4)的右侧伸出到荧光标记垫(3)外，吸水纸垫(7)的左侧位于纤维素膜(2)上表面的右侧，吸水纸垫(7)的右侧伸出到纤维素膜(2)外；其中，纤维素膜(2)的上表面从左到右依次设有另一株H5亚型禽流感病毒单克隆抗体(4B6)层及羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白层，其中H5亚型禽流感病毒单抗(4B6)层上设有检测线(5)，羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白层上设有对照线(6)。

【技术特征摘要】
1.一种H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条，包括背衬(1)、吸水纸垫(7)、纤维素膜(2)、样品垫(4)、以及喷涂有荧光微球标记H5亚型禽流感病毒单克隆抗体(4A3)的荧光标记垫，纤维素膜(2)位于背衬(1)上，荧光标记垫(3)的右侧位于纤维素膜(2)上表面的左侧，荧光标记垫(3)的左侧伸出到纤维素膜(2)外，样品垫(4)的左侧位于荧光标记垫(3)上，样品垫(4)的右侧伸出到荧光标记垫(3)外，吸水纸垫(7)的左侧位于纤维素膜(2)上表面的右侧，吸水纸垫(7)的右侧伸出到纤维素膜(2)外；其中，纤维素膜(2)的上表面从左到右依次设有另一株H5亚型禽流感病毒单克隆抗体(4B6)层及羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白层，其中H5亚型禽流感病毒单抗(4B6)层上设有检测线(5)，羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白层上设有对照线(6)。2.根据权利要求1所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条，其特征在于，所述纤维素膜(2)为硝酸纤维素膜。3.根据权利要求2所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜的型号为硝酸纤维素膜140。4.根据权利要求2所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条，其特征在于，所述纤维素膜(2)的厚度为0.2mm、宽度为3.5mm。5.根据权利要求1所述的H5亚型禽流感病毒荧光层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球标记H5亚型禽流感病毒单克隆抗体(...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹爱军，黄彬庚，招沐，詹雪梅，
申请(专利权)人：扬州千代科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32