一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法技术

一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法。涉及黄曲霉素，尤其涉及一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法。提供了方便加工，提高检测速度的利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法。本发明专利技术中的AFB1免疫荧光量子点检测卡特异性强，检测同族黄曲霉毒素以及其他真菌霉素结果均为阴性。反应时间一般在3‑5 min，与传统的色谱，ELISA等检测方法相比大大缩短了检测时间，提高了检测速度，且彻底摆脱了大型设备的限制。本发明专利技术中的检测卡其检测灵敏度达到1 ppb，高于同类型胶体金产品。

【技术实现步骤摘要】
一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法
本专利技术涉及黄曲霉素，尤其涉及一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法。
技术介绍
量子点标记的免疫层析技术由于具有胶体金免疫层析检测技术的全部优点而且具有更高的灵敏度而受到广泛的关注。量子点主要是由主族元素Ⅱ～Ⅵ，Ⅲ～Ⅴ如CdSe、CdTe、InP组成的纳米颗粒，粒径一般介于1～100nm之间。由于电子和空穴被量子限域，连续的能带结构变成具有分子特性的分立能级结构，受激后可以发射荧光。量子点由于存在显著的量子尺寸效应和表面效应，从而使它具有常规材料所不具备的光吸收特性，使其应用领域越来越广，特别是其在临床检验学和免疫学检测研究中的应用价值，引起了科学工作者的极大关注，发光量子点作为荧光探针标记生物大分子，是近年来纳米材料在生物分析领域的重要应用之一。综合现在的免疫学检测方法，量子点在标记免疫分析方面展现了诱人的前景。将荧光分析与免疫层析相结合应用于现在的免疫层析快速检测，其灵敏性相较于胶体金有较大的提高。另外利用不同粒径量子点具有不同颜色的特点将不同的量子点标记不同的抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1）材料选择；/n2）荧光量子点试剂配方；/n3）黄曲霉毒素免疫抗原的合成；/n4）黄曲霉毒素特异性抗体的制备；/n5）单克隆抗体亲和常数及效价检测；/n6）黄曲霉毒素检测抗原合成；/n7）荧光微球标记黄曲霉毒素b1抗体的制备；/n8）AFB1抗体结合垫制备；/n9）黄曲霉毒素b1荧光量子点检测试剂条的制备；/n10）完成。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）材料选择；
2）荧光量子点试剂配方；
3）黄曲霉毒素免疫抗原的合成；
4）黄曲霉毒素特异性抗体的制备；
5）单克隆抗体亲和常数及效价检测；
6）黄曲霉毒素检测抗原合成；
7）荧光微球标记黄曲霉毒素b1抗体的制备；
8）AFB1抗体结合垫制备；
9）黄曲霉毒素b1荧光量子点检测试剂条的制备；
10）完成。


2.根据权利要求1所述一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法，其特征在于，步骤1）中的材料包括MES、NHS、碳二亚胺、2-（N-吗啉代）乙磺酸、牛血清白蛋白、Tween-20,Tritonx-100、PVP-40；
HAT培养基、荧光微球、羊抗鼠二抗、硝酸纤维膜、玻璃纤维膜和吸水纸。


3.根据权利要求1所述一种利用黄曲霉素制备荧光量子点免疫层析检测卡的方法，其特征在于，步骤2）包括：
硼砂缓冲液配置：硼酸6.183g，硼酸钠6.864g；超纯水定容至860mL；0.22µm膜滤过，置4℃备用；
0.1M、pH4.7MES缓冲液：19.52gMES，58.44g氯化钠加超纯水至1L，用氢氧化钠调节PH值至4.7，置4℃储存不超过一周；
10%BSA的配制：100.0gBSA；超纯水定容至1000.0mL；0.22µm膜滤过，置4℃备用；
10%PVP-40的配制：100.0gPVP-40；超纯水定容至1000.0mL；0.22µm膜滤过，置4℃备用；
10%Tween-20的配制：100.0mLTween-20；超纯水稀释定容至1000.0mL；0.22µm膜滤过，置4℃备用；
10%叠氮钠的配制：100.0g叠氮钠；超纯水定容至1000.0mL；0.22µm膜滤过，置4℃备用；
玻璃器皿清洁液：重铬酸钾1000g，浓硫酸2500mL，加蒸馏水至10000mL；
抗体标记物稀释缓冲液的配制：取50g蔗糖于250mL试剂瓶中，加入5mL10%BSA，3mL10%Tween-20，2mL10%PVP-40，0.2MPH7.4PB定容至100mL，加入200uL10%叠氮钠；
玻纤垫片处理液的配置：称取海藻糖30.0g、BSA5g、蔗糖15g于1000mL试剂瓶中，加入0.02mol/LPBS(pH7.4)100mL，5mL山羊血清，3.1mLTriton-100，加超纯水定容至1L；
样品垫处理液的配置：称取海藻糖1.8g、BSA6g、酪蛋白2.5g、BRIJ-355g、PVP-k405.4g、Na2HPO413.578g、NaH2PO42.8g、NaCl4.015g于1000mL试剂瓶中，加入5mLTween-20，加超纯水定容至1L；
抗原、二抗稀释液的配置：称取2g海藻糖于250mL试剂瓶中，加入1mL甲醇、5mL10%丙三醇，加0.02mol/LPBS定容至100mL；
0.2mol/LPB：称取2.3gNa2HPO4和0.456gNaH2PO4，加超纯水溶解后定容至1000mL，高压灭菌20min后常温保存，工作液pH值7.4；
0.02mol/LPBS称取17.4gNaCl，2.3gNa2HPO4和0.456gNaH2PO4，加超纯水溶解后定容至1000mL，高压灭菌20min后常温保存，工作液pH值7.4；
5%二氯二钾硅烷的氯仿溶液：将25mL二氯...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹爱军，单君忆，招沐，闫文龙，
申请(专利权)人：扬州千代科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32