一种单克隆抗体的制备方法技术

一种单克隆抗体的制备方法。涉及单克隆抗体，尤其涉及一种单克隆抗体的制备方法。提供了一种方便可靠，降低成本，提高产量的单克隆抗体的制备方法。所述完全培养基为SFM培养基，不完全培养基为DMEM培养基。无血清细胞培养基中还包括维生素B6、维生素E和叶酸。本发明专利技术使用杂交瘤细胞培养法生产单克隆抗体，产量高且方法简便。其既不需要使用实验动物，也不需要特设设备，且抗体产生的量也高于常规方法；使用本方法所产生的单克隆抗体比常规的培养方法抗体量高20‑25倍。本发明专利技术节省了成本，保证了质量。

【技术实现步骤摘要】
一种单克隆抗体的制备方法
本专利技术涉及单克隆抗体，尤其涉及一种单克隆抗体的制备方法。
技术介绍
单克隆抗体，由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体即单克隆抗体。现有技术中，如何制备质量好产量高的单克隆抗体是当前研究的重要问题，通常用于生产单克隆抗体的方法有两种：①利用纯系小鼠生产免疫腹水，该法的优点是产量和效价高，但纯化困难，价格昂贵，生产周期长：②杂交瘤细胞常规体外培养法，此法虽然产量不高效价低，但不含正常小鼠免疫球蛋白，较易纯化且成本低，但此法若需大量生产则需特殊设备。
技术实现思路
本专利技术针对以上问题，提供了一种方便可靠，降低成本，提高产量的单克隆抗体的制备方法。本专利技术的技术方案为：包括以下步骤：1）制备无血清细胞培养基；2）将无血清细胞培养基置于容器内，无血清细胞培养基的体积为容器的1/10；3）将杂交瘤细胞初次接种到容器中，杂交瘤细胞密度控制在2-5*105个/ml；4）待杂交瘤细胞生长到48小时后，进行补充1/4容积量的无血清细胞培养基，随后每48小时后补充一次，每次补充1/4容积量，直到容器内的无血清细胞培养基完全满，进行单克隆抗体的生产。步骤1）中，无血清细胞培养基包括完全培养基和/或不完全培养基。步骤1）中，在细胞培养过程中每24小时一次，添加葡萄糖，葡萄糖的浓度为50-100mmol/ml。步骤1）中，在细胞培养过程中每24小时一次，添加丙酮酸钠，丙酮酸钠的浓度为20-50mmol/ml。所述完全培养基为SFM培养基，不完全培养基为DMEM培养基。无血清细胞培养基中还包括维生素B6、维生素E和叶酸。本专利技术使用杂交瘤细胞培养法生产单克隆抗体，产量高且方法简便。其既不需要使用实验动物，也不需要特设设备，且抗体产生的量也高于常规方法；使用本方法所产生的单克隆抗体比常规的培养方法抗体量高20-25倍。本专利技术节省了成本，保证了质量。具体实施方式本专利技术包括以下步骤：1）制备无血清细胞培养基；2）将无血清细胞培养基置于容器内，无血清细胞培养基的体积为容器的1/10；3）将杂交瘤细胞初次接种到容器中，杂交瘤细胞密度控制在2-5*105个/ml；4）待杂交瘤细胞生长到48小时后，进行补充1/4容积量的无血清细胞培养基，随后每48小时后补充一次，每次补充1/4容积量，直到容器内的无血清细胞培养基完全满，进行单克隆抗体的生产。步骤1）中，无血清细胞培养基包括完全培养基和/或不完全培养基。步骤1）中，在细胞培养过程中每24小时一次，添加葡萄糖，葡萄糖的浓度为50-100mmol/ml。步骤1）中，在细胞培养过程中每24小时一次，添加丙酮酸钠，丙酮酸钠的浓度为20-50mmol/ml。所述完全培养基为SFM培养基，不完全培养基为DMEM培养基。无血清细胞培养基中还包括维生素B6、维生素E和叶酸。通过加入维生素等，使得培养基能够使杂交瘤细胞快速生长，满足培养的需求。本专利技术使用杂交瘤细胞培养法生产单克隆抗体，产量高且方法简便。提供了一种静止无血清培养杂交瘤细胞株培养法，其具体内容如下：细胞使用无血清培养基；细胞培养过程中24小时一次，添加一定量的葡萄糖（50-100mmol/ml）；细胞培养过程中24小时一次，添加一定量的丙酮酸钠（20-50mmol/ml）；根据所用细胞容器大小，培养基的量为容器的1/10；杂交瘤细胞初次接种到容器中的比例严格控制在2-5X105个/ml；杂交瘤细胞生长到48小时后进行补充1/4容积量的培养基，随后每48小时后补充一次，每次1/4容积量，直到培养基完全满，随后培养之细胞培养基变黄；随后可以按此方法循环。根据该方法所产生的单克隆抗体比常规的培养方法抗体量高20-25倍。以上，仅为本案所公开的具体实施方式，但本公开的保护范围并不局限于此，本案所公开的保护范围应以权利要求的保护范围为准。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1）制备无血清细胞培养基；/n2）将无血清细胞培养基置于容器内，无血清细胞培养基的体积为容器的1/10；/n3）将杂交瘤细胞初次接种到容器中，杂交瘤细胞密度控制在2-5 * 105个/ml；/n4）待杂交瘤细胞生长到48小时后，进行补充1/4容积量的无血清细胞培养基，随后每48小时后补充一次，每次补充1/4容积量，直到容器内的无血清细胞培养基完全满，进行单克隆抗体的生产。/n

【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）制备无血清细胞培养基；
2）将无血清细胞培养基置于容器内，无血清细胞培养基的体积为容器的1/10；
3）将杂交瘤细胞初次接种到容器中，杂交瘤细胞密度控制在2-5*105个/ml；
4）待杂交瘤细胞生长到48小时后，进行补充1/4容积量的无血清细胞培养基，随后每48小时后补充一次，每次补充1/4容积量，直到容器内的无血清细胞培养基完全满，进行单克隆抗体的生产。


2.根据权利要求1所述的一种单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤1）中，无血清细胞培养基包括完全培养基和/或不完全培养基。


3.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹爱军，单君忆，招沐，闫文龙，
申请(专利权)人：扬州千代科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32