一种胰高血糖素的纯化方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种胰高血糖素的纯化方法。本发明专利技术所述纯化方法将胰高血糖素粗肽溶解后，调节粗肽溶液的pH至碱性，往粗肽溶液中加入蛋白变性剂和氯化物盐反应至胰高血糖素含量不再增加，然后降温进行RP‑HPLC纯化和转盐。本发明专利技术发现了制约胰高血糖素粗肽纯化效率低下的关键因素，进而据此发现采用蛋白变性剂和氯化物盐对粗肽预处理，而后进行纯化，由此可将纯化收率和总收率大幅提高。在此基础上可进一步以复合盐溶液为流动相进行纯化，能够提高胰高血糖素的品质。在胰高血糖素现有纯化工艺中，本发明专利技术纯化方法优势明显，收率和品质提高明显，带来的经济效益也非常可观。

A purification method of glucagon

The invention relates to the field of biological technology, and discloses a purification method of glucagon. The purification methods of glucagon crude peptide dissolved after adjusting crude peptide solution to alkaline pH, adding protein denaturant and chloride salt response to glucagon content of crude peptide solution does not increase, and then temperature were purified and salt RP HPLC. The key factor that restricts the purification efficiency of glucagon and crude peptide is found. Based on this, it is found that protein denaturant and chloride salt can be used for pretreatment of crude peptide and then purified, so that the purification yield and total yield can be greatly improved. On this basis, the compound salt solution can be further purified to the mobile phase, which can improve the quality of glucagon. In the existing purification process of glucagon, the advantage of the purification method is obvious, the yield and quality are improved obviously, and the economic benefit is very considerable.

【技术实现步骤摘要】
一种胰高血糖素的纯化方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种胰高血糖素的纯化方法。
技术介绍
胰高血糖素(升糖素)是一种由胰脏胰岛α-细胞分泌的激素，由29个氨基酸组成直链多肽，分子量为3485道尔顿。胰高血糖素肽序如下：NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-COOH胰高血糖素通过与体内受体结合，通过糖原分解而释放肝脏中以糖原形式贮存的葡萄糖，从而帮助维持血液中的葡萄糖水平可以升高血糖，其半衰期较短。现有文献表明，胰高血糖素在体内的能量代谢或者是能量摄取调解中起重要的作用[Habegger等,NatureReviewsEndocrinology2010，6，689-697]，所以胰高血糖素在代谢疾病方面或许同样扮演重要的角色，比如在心血管、肥胖、糖尿病等等。另外胰高血糖素可用于注射胰岛素过量引起的低血糖昏迷及心源性休克、充血性心功能不全，心肌梗死及心脏手术后的急性心功能不全。鉴于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胰高血糖素的纯化方法，其特征在于，包括：步骤1、将胰高血糖素粗肽溶解后，调节粗肽溶液的pH至碱性，往粗肽溶液中加入蛋白变性剂和氯化物盐反应至胰高血糖素含量不再增加；步骤2、将步骤1经过处理的粗肽溶液降温后进行RP‑HPLC纯化和转盐。

【技术特征摘要】
1.一种胰高血糖素的纯化方法，其特征在于，包括：步骤1、将胰高血糖素粗肽溶解后，调节粗肽溶液的pH至碱性，往粗肽溶液中加入蛋白变性剂和氯化物盐反应至胰高血糖素含量不再增加；步骤2、将步骤1经过处理的粗肽溶液降温后进行RP-HPLC纯化和转盐。2.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述蛋白变性剂为盐酸胍、尿素或两者的组合。3.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述蛋白变性剂的浓度为100mmol/L。4.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述氯化物盐为氯化钠、氯化钾、氯化铵的一种或者两种以上。5.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述氯化物盐的浓度为200-400mmol/L。6.根据权利要求1所述纯化方法，其特征在于，所述调节粗肽溶液的pH至碱性为以碱性物质调节粗肽溶液的pH为9.5-10。7.根据权利要求1-6任意一项所述纯化方法，其特征在于，步骤2为：将步骤1经过处理的粗肽溶液降温后，以复合盐溶液为流动A相，以乙腈为流动B相进行RP-HPLC梯度洗脱纯化，收集目的峰多肽溶液浓缩，然后进行转盐；所述复合盐溶液为高氯酸盐、硫酸盐...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹传龙，赵忠卫，康旭，宓鹏程，陶安进，袁建成，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44