用于胰腺癌的生物标志物制造技术

本发明专利技术涉及胰腺癌和生物样品中的生物标志物在诊断此类病症尤其是胰腺导管腺癌中的用途。生物标志物组包括LYVE1、REG1和TFF1。本发明专利技术还提供了治疗方法，以及用于诊断和治疗胰腺导管腺癌的试剂盒。本发明专利技术在诊断早期阶段PDAC方面尤其有用。

Biomarkers for pancreatic cancer

The present invention relates to the use of biomarkers in the diagnosis of pancreatic cancer and biological samples in the diagnosis of such diseases, especially in pancreatic ductal adenocarcinoma. Biomarker groups include LYVE1, REG1 and TFF1. The invention also provides a treatment method, as well as a kit for the diagnosis and treatment of pancreatic duct adenocarcinoma. The invention is particularly useful in the diagnosis of early stage PDAC.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于胰腺癌的生物标志物
本专利技术涉及胰腺癌以及生物样品中的生物标志物在诊断此类病症特别是胰腺导管腺癌中的用途。
技术介绍
胰腺导管腺癌(pancreaticductaladenocarcinoma,PDAC)是最常见的外分泌胰腺恶性肿瘤，占发生在胰腺的恶性肿瘤的80％以上。它是西方世界中癌症相关死亡的第四最常见原因。在诊断时，大多数患者显示局部晚期疾病或具有确定的转移，因此外科手术仅在10-20％的患者中是可行的(Seneretal.(1999)JAmCollSurg,189:1-7)。虽然总体上的5-年生存率小于5％，但是在手术切除和辅助化疗之后患者的5-年生存率能够达到30％。胰腺导管腺癌(PDAC)是一种罕见的癌症，在过去的十年中，针对该病在诊断和治疗方法方面没有显著的改进。尽管在分子水平我们对该病的理解有了相当大的进步，但是新的发现尚未应用于临床且大多数患者仍然面临5至6个月的严峻的平均生存期。随着2013年在美国有超过38,000例PDAC-相关死亡以及在欧洲有超过40,000例，这种恶性肿瘤目前是癌症相关死亡的第四主要原因，但是预计到2030年这种恶性肿瘤将会成为第二主要原因。PDAC是一种最难发现的癌症。胰腺的腹膜后位置、很多复杂潜在的分子异常和缺少明确的临床症状导致大多数患者在晚期才发现患病。因此，少于20％的患者会接受可能治愈性的手术，而剩余患者只能被提供姑息治疗。这些令人担忧的数字将随着早期检测工具的改进而发生显著的改变，因为在阶段IPDAC肿瘤的偶然诊断之后已经报导了接近70％的5-年存活，在阶段I时，PDAC肿瘤仍然只限于胰腺内，尺寸<2cm。重要的是，对于早期诊断存在大约十年的相当长的机会“窗”(YachidaS,etal.(2010)Nature467(7319):1114-1117)。当可能治愈性的手术不再可行时，考虑到转移性疾病当前治疗的疗效不佳，在早期阶段进行检测也是至关重要的。然而，PDAC的及时检测受到若干因素阻碍：疾病早期阶段缺少具体的临床症状，尽管竭尽全力但是当前的显像模式的灵敏度不够，和早期阶段疾病缺少精确的基于体液的生物标志物(参见Kauretal.(2012)BiomarkMed6(5):597-612.)。早期阶段的PDAC还难以区别于慢性胰腺炎(CP)、胰腺的良性炎性疾病和PDAC的一个危险因素。血清糖类抗原19.9(carbohydrateantigen19.9,CA19.9)是目前广泛用于临床的唯一PDAC生物标志物，其受如下问题困扰：在具有路易斯阴性基因型(Lewis-negativegenotype)的患者中出现假阴性结果，在无症状人群中存在差的阳性预测值，和在有症状患者中的灵敏度低(79％-81％)。小于50％的早期疾病(肿瘤<2cm)病例具有升高的CA19-9水平，但是，在各种其它的良性和恶性的胰腺与肝胆疾病(包括慢性胰腺炎)以及不相关的囊性与炎性疾病中，CA19.9水平可能会升高(参见BallehaninnaUK,ChamberlainRS,"SerumCA19-9asaBiomarkerforPancreaticCancer-AComprehensiveReview",IndianJSurgOncol,2011；2:88-100)。另外，路易斯a/b抗原(Ca19.9识别该抗原)在大约10％的人群中不表达。最近，蛋白质组技术已经用于研究胰腺癌组织、胰液和血清/血浆标本中蛋白质表达(例如参见Koomenetal.(2005)ClinCancerRes,11:1110-1118)，但是，迄今为止，这些都没有导致发现适合于临床实践的生物标志物。最近，尿作为生物标志物的可能来源而被研究，因为它是能够容易且无创地获得的生物流体(Pieperefal.(2004)Proteomics,4:1159-1174)。与血浆相比，尿蛋白较不复杂且热稳定性更好。此外，大部分的常见蛋白质(白蛋白、尿调素)包括比例较小的尿蛋白质组，所以样品处理需要较少的预清洗/分馏。大约49％的尿蛋白是血浆肾小球滤过的可溶性产物(Barratetal.(2007)Cmaj,177:361-368)，因此，尿中相当数量的蛋白质来自于肾外来源(Thongboonkerdetal.(2005)CurrOpinNephrolHypertens,14:133-139)。除了泌尿系统癌症之外，在肺癌、卵巢癌和乳腺癌患者的尿中还已经鉴定了几种癌症相关蛋白质。WO2004/102189描述了用于诊断胰腺癌(pancreaticcancer)的生物标志物。将来自胰腺癌患者的血清样品与来自健康供体的血清样品进行比较，并且产生的生物标志物以其重量为特征。WO2004/099432实现了类似的方法，该专利文献提供了用于检测胰腺癌的另外的生物标志物。WO2000/34787描述了诊断上皮癌的方法，包括测量尿中生物标志物的水平。目前，还没有用于胰腺癌(pancreaticadenocarcinoma)早期诊断的特异性的且灵敏的生物标志物。这是极其重要的，因为如果能够在早期(例如，阶段I)发现胰腺癌，那么此类患者的存活能够被极大提高(目前，大部分患者是在阶段lll/IV被诊断，5-年存活率<5％)。因此，用于早期检测的高度精确的生物标志物预计会显著影响患者的预后。因此，需要一组灵敏的且特异性的标志物，这些标志物不仅能够早期诊断PDAC，而且能够有助于区分PDAC与其它肿瘤以及区分PDAC与慢性胰腺炎(CP)。优选地，这些标志物在容易且无创获得的样品中能够被检测，并且它们是足够灵敏的以便在疾病早期阶段检测疾病。专利技术概述在本专利技术的第一方面，提供了用于诊断胰腺导管腺癌(PDAC)的生物标志物组(panel)，所述组包括LYVE1、REG1和TFF1。本文中REG1的参考包括REG1A和REG1B。在一些具体实施方式中，所述组可进一步包括CA19.9。在本专利技术的第二方面，提供了筛选或检测胰腺导管腺癌(PDAC)的方法，包括检测生物样品中蛋白质的表达水平或浓度，其中所述蛋白质选自LYVE1、REG1(例如，REG1A和/或REG1B)和TFF1或者其组合构成的组。在一些具体实施方式中，生物样品是尿样品。在本专利技术的第三方面，提供了用于诊断胰腺导管腺癌的蛋白质，其选自LYVE1、REG1(例如，REG1A和/或REG1B)和TFF1或者其组合构成的组。还提供了蛋白质在检测或诊断PDAC的方法中的用途，所述蛋白质选自LYVE1、REG1(例如，REG1A和/或REG1B)和TFF1构成的组。在本专利技术的第四方面，提供了用于检测胰腺导管腺癌的试剂盒，包括用于检测生物样品中LYVE1、REG1(例如，REG1A和/或REG1B)或TFF1或者其组合的表达水平或浓度。在本专利技术的另一方面，提供了区分PDAC和慢性胰腺炎的方法，包括检测尿样品中LYVE1、REG1(例如，REG1A和/或REG1B)和/或TFF1的表达水平。所述方法可包括将每个蛋白的表达水平与参照进行比较。在本专利技术的另一方面，提供了检测或诊断早期阶段PDAC(例如，阶段I或阶段IIPDAC)的方法，包括检测生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测胰腺导管腺癌的方法，包括测定生物样品中从LYVE1、REG1和TFF1或者其组合构成的组选出的蛋白质的表达水平或浓度。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.05 GB 1501930.01.一种用于检测胰腺导管腺癌的方法，包括测定生物样品中从LYVE1、REG1和TFF1或者其组合构成的组选出的蛋白质的表达水平或浓度。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法包括测定从由LYVE1、REG1和TFF1构成的组中选出的两种蛋白质的表达水平或浓度。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法包括测定生物样品中LYVE1、REG1和TFF1的每一种的表达水平或浓度。4.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中，所述REG1蛋白质是REG1A和/或REG1B。5.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中，使用对表达水平或浓度有待测定的蛋白质具有特异性的结合分子来进行测定步骤。6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述结合分子是抗体或抗体片段、蛋白质或者适体。7.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中，所述生物样品是尿、全血、血清或胰腺组织样品。8.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中，所述样品来自于人类。9.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中，所述胰腺导管腺癌是阶段I或阶段II胰腺导管腺癌。10.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中，所述方法提供了区分阶段IPDAC和健康患者、区分阶段IPDAC和慢性胰腺炎(CP)或者区分阶段IPDAC和后期PDAC的鉴别诊断。11.根据前述权利要求任一项所述的方法，进一步包括将一种或多种miRNA的表达水平或浓度与参照进行比较的步骤。12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述参照是来自健康患者的生物样品。13.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中，所述生物样品来自患有或怀疑患有PDAC的患者。14.根据前述权利要求任一项所述的方法，进一步包括测定CA19.9蛋白质的表达水平或浓度。15.从LYVE1、REG1和TFF1或者其组合构成的组中选出的一种蛋白质，所述蛋白质用于诊断胰腺导管腺癌。16.从LYVE1、REG1和TFF1构成的组中选出的两种蛋白质的组合，所述组合用于诊断胰腺导管腺癌。17.LYVE1、REG1和TFF1蛋白质的组合，所述组合用于诊断胰腺导管腺癌。18.根据权利要求15-17任一项所述的供使用的蛋白质或蛋白质的组合，其中，所述R...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·茨诺戈拉朱斯维克，T·拉多纳，
申请(专利权)人：伦敦玛丽王后大学，
类型：发明
国别省市：英国,GB