XTEN缀合组合物和制造其的方法技术

本发明专利技术涉及延伸重组多肽(XTEN)组合物、包含XTEN和连接到适用于与药理活性的有效负载缀合的交联剂的XTEN的缀合组合物、制造高度纯化的XTEN的方法、制造XTEN‑接头和XTEN‑有效负载缀合物的方法，以及使用XTEN‑交联剂和XTEN‑有效负载组合物的方法。

XTEN conjugated compositions and methods to make them

The present invention relates to the extension of the recombinant polypeptide (XTEN) composition, including XTEN and connected to the suitable payload and pharmacological activity of conjugated crosslinking agent XTEN conjugated composition, manufacturing highly purified XTEN manufacturing method, XTEN and XTEN joint payload conjugate method, and method of using XTEN crosslinking agent XTEN and payload composition.

【技术实现步骤摘要】
XTEN缀合组合物和制造其的方法本申请是2013年02月27日提交的专利技术名称为“XTEN缀合组合物和制造其的方法”的第201380020791.8号(国际申请号PCT/US2013/028116)中国专利申请的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求2012年2月27日提交的美国临时申请序号61/634,312、2012年6月18日提交的美国临时申请序号61/690,187和2012年10月4日提交的美国临时申请序号61/709,942的优先权益，这些申请以引用的方式并入本文中。专利技术背景延长治疗剂(不管是治疗性蛋白质、肽还是小分子)的半衰期常常需要对治疗剂本身进行专门的配制或修饰。常规的修饰方法，如聚乙二醇化、向治疗剂中添加抗体片段或白蛋白分子，具有许多明显的缺点。虽然这些经修饰的形式可以大规模地制备，但这些常规方法一般受到高的商品成本、复杂的制造工艺和最终产物的低纯度所困扰。时常难以(如果不是不可能的话)纯化到目标实体的同质性。对于聚乙二醇化来说尤其如此，聚乙二醇化的反应本身无法精确地受控制以产生带有相同数目或质量的聚乙二醇的经聚乙二醇化的试剂的同质群体。此外，这些经聚乙二醇化的试剂的代谢物可以具有严重的副作用。举例来说，已经观测到经聚乙二醇化的蛋白质在动物模型中引起肾小管空泡形成(Bendele,A.,Seely,J.,Richey,C.,Sennello,G.和Shopp,G.Shortcommunication:renaltubularvacuolationinanimalstreatedwithpolyethylene-glycol-conjugatedproteins.Toxicol.Sci.1998.42,152-157)。肾清除的经聚乙二醇化的蛋白质或其代谢物可以在肾中积聚，导致PEG水合物的形成，PEG水合物干扰正常的肾小球滤过。另外，动物和人类可以经过诱导来制造针对PEG的抗体(Sroda,K.等人RepeatedinjectionsofPEG-PEliposomesgenerateanti-PEGantibodies.Cell.Mol.Biol.Lett.2005.10,37-47)。因此，对适用于在合理的成本下生产具有延长的半衰期特性的治疗剂的高纯度形式的替代性组合物和方法仍有相当大的需要。专利技术概要本专利技术解决了这一需要并且提供了相关优势。本文所公开的组合物和方法不仅适用作治疗剂，而且特别适用作候选治疗剂的临床前和临床开发的研究工具。在一些方面，本专利技术一部分是通过产生延伸重组多肽(XTEN)试剂来解决这一需要，这些试剂可以使用一个或几个简单的步骤纯化到同质，和/或可以使用多种多样的缀合方法与具有反应基团的有效负载肽、蛋白质和小分子进行化学缀合。XTEN试剂的使用产生XTEN连接的试剂的高产率产物，其与未经缀合的产物相比在一个或多个方面是优良的，包括高同质性、高溶解度、长稳定性和提高的终末半衰期。本专利技术一部分是关于新颖组合物，其包含基本上同质的延伸重组多肽(XTEN)，这些XTEN适用作连接到一个或多个有效负载药理活性剂或生物活性剂的缀合伴侣，从而得到XTEN-有效负载组合物。在一个方面，本专利技术提供了经过工程改造以直接或经由交联剂共价连接到一个或多个有效负载的XTEN，从而得到XTEN-有效负载组合物，这种组合物包含一种、两种、三种或更多种类型的有效负载的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个或更多个分子。本专利技术的一个目的在于提供这些经工程改造的XTEN多肽，用来与所关注的有效负载剂形成缀合物，作为具有增强的医药学特性(包括增强的药物动力学特性)的组合物。本专利技术提供了在长度和序列上基本上同质的XTEN，其适用于制备包含连接到一个或多个有效负载的XTEN的缀合物，以使所得XTEN-有效负载缀合物具有高纯度。高纯度的这些缀合物适用于制备用于患有医学病状的受试者的医药组合物，对此，一个或多个有效负载具有预防、治疗或改善这种病状的效用。在第一个方面，本专利技术提供了基本上同质的XTEN多肽组合物，其适用作缀合伴侣以形成XTEN-交联剂中间物和XTEN-有效负载组合物。在一些实施方案中，本专利技术提供了多肽的基本上同质的群体，其包含延伸重组多肽(XTEN)，并且其中所述群体中至少90％、91％、92％、93％、94％或95％的个别多肽分子具有相同的序列长度。在前述的一个实施方案中，XTEN的特征在于：总XTEN氨基酸残基是至少36个至约3000个氨基酸残基；甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)和脯氨酸(P)残基的总和占XTEN的总氨基酸残基的约90％以上；XTEN序列是基本上非重复的，以使得(i)XTEN序列不含有相同的三个连续氨基酸，除非这些氨基酸是丝氨酸，(ii)至少约80％、或约90％、或约95％的XTEN序列由非重叠的序列基序组成，这些序列基序中的每一者包含约9个至约14个氨基酸残基，其中任何两个相连氨基酸残基在这些序列基序中的每一者中不会出现两次以上；或(iii)XTEN序列具有小于10的子序列计分；如通过GOR算法所测定，XTEN序列具有大于90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或大于99％的无规卷曲形成率；如通过Chou-Fasman算法所测定，XTEN序列具有小于2％、或3％、或4％、或5％的α螺旋；XTEN序列具有小于2％、或3％、或4％、或5％的β折叠；并且当通过TEPITOPE算法进行分析时，XTEN序列缺乏预测的T细胞表位，其中对于XTEN序列内的表位的TEPITOPE算法预测是基于-8、或-9、或-10的计分。在前述的另一个实施方案中，XTEN包含与选自由表2、表3、表4和表22-25中所阐述的序列组成的组的序列具有至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％、或100％的序列同一性的序列。在其它实施方案中，基本上同质的XTEN多肽组合物包含一个或多个亲和标签。在一个实施方案中，本专利技术提供了基本上同质的XTEN多肽组合物，其包含第一亲和标签，其中这个第一亲和标签对选自由疏水相互作用色谱(HIC)底物、阳离子交换底物、阴离子交换底物、固定化金属离子亲和色谱(IMAC)底物和固定化抗体底物组成的组的色谱底物具有结合亲和力。在前述的一个实施方案中，第一亲和标签与选自由表7中所阐述的序列组成的组的序列具有至少约90％、91％、92％、93％、94％或至少约95％的序列同一性。在前述XTEN和亲和标签的另一个实施方案中，组合物进一步包含一个或多个辅助序列。在一个实施方案中，辅助序列包含与选自由表10中所阐述的序列组成的组的序列具有至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％、或100％的序列同一性的序列。在另一个实施方案中，辅助序列选自由以下组成的组：KNPEQAEEQX1EET，其中X1独立地是S或R；ANPEQAEEQX1EET，其中X1独立地是S或R；KNPE本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其包含如表2中所示的延伸重组多肽(XTEN)，其中所述XTEN包含序列GSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAP。

【技术特征摘要】
2012.02.27 US 61/634,312;2012.06.18 US 61/690,187;1.一种组合物，其包含如表2中所示的延伸重组多肽(XTEN)，其中所述XTEN包含序列GSPAGSPTSTEEGTSESATPESGPGTSTEPSEGSAP。2.如权利要求1所述的组合物，其进一步包含一个或多个分子的至少第一交联剂，其中所述第一交联剂选自由表13中的交联剂、表15中的炔烃反应物和表15中的叠氮化物反应物组成的组。3.如权利要求2所述的组合物，其中所述至少第一交联剂在选自由以下组成的组的位置处缀合到所述XTEN：a.所述XTEN的N端氨基酸残基的α-氨基；和b.所述XTEN的每个半胱氨酸残基的硫醇基。4.如权利要求3所述的组合物，其中所述第一交联剂选自由以下组成的组：N-马来酰亚胺、碘乙酰基试剂、吡啶基二硫化物试剂、乙烯基砜试剂、3-炔丙氧基丙酸、其...

【专利技术属性】
技术研发人员：V·谢尔恩伯杰，弗拉迪米尔·波杜斯特，王家威，沈美贞，
申请(专利权)人：阿穆尼克斯运营公司，
类型：发明
国别省市：美国,US