组合物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及细胞领域，特别涉及组合物及其应用。该组合物包括生长因子、白蛋白和脐带间充质干细胞。该组合物可以预防肝衰竭、减缓慢性肝衰竭进展并去除有害的毒性。本细胞组合物对于防止和/或治疗由局部缺血、药物如对乙酞氨基酚、病毒、肥胖症非酒精性脂肪性肝炎、以及阻塞胆管阻塞、肿瘤所引起的慢性肝损伤是有效的。

Compositions and uses thereof

The present invention relates to the field of cells, in particular to compositions and uses thereof. The composition comprises growth factors, albumin, and umbilical cord mesenchymal stem cells. The composition can prevent liver failure, slow progression of chronic liver failure and remove harmful toxicity. The cell composition is effective for preventing and / or chronic liver injury caused by ischemia, treatment of drugs such as acetyl aminophenol, virus, obesity, nonalcoholic steatohepatitis, and obstruction of bile duct obstruction, tumor.

【技术实现步骤摘要】
组合物及其应用
本专利技术涉及细胞领域，特别涉及组合物及其应用。
技术介绍
肝衰竭是多种因素引起的严重肝脏损害，导致其合成、解毒、排泄和生物转化等功能发生严重障碍或失代偿，出现以凝血机能障碍和黄疽、肝性脑病、腹水等为主要表现的一组临床症候群。近些年来，由于肝衰竭死亡的人数逐渐增多，据统计，美国每年约有万人死于肝功能衰竭，而我国每年死于此症的患者约万。急性肝衰竭是一种急性的严重肝功能障碍，其特点是起病急、病情危重、症状表现多样、肝细胞广泛坏死。目前治疗肝衰竭的主要手段为内科治疗、肝移植和细胞治疗等。内科治疗疗效有限，迄今为止尚未有对症的特效药。目前，肝移植虽已成为治疗终末期肝病的重要手段，但供体短缺、手术损伤、免疫排斥以及费用高昂等问题构成了肝移植技术发展的主要障碍。因此，开展具有侵入性小，并发症少等特点的干细胞移植成为最近治疗急性肝衰的研究热点干细胞是一种未分化的细胞，有两个基本特征，一是自我复制能力，二是能分化成一种以上的功能细胞，根据分化潜能的大小，干细胞一般分成三类，第一类是全能干细胞即可以分类为功能一致的全能细胞。第二类是多潜能干细胞，它能分化成为身体中每种细胞类型，但是不能形成胎盘和胎儿发育所必须的支持组织。第三类是成体干细胞是一种将拥有终生自我复制或自我更新能力的干细胞。它分布于不同组织并可养成为各种类型细胞。间充质干细胞，属于成体干细胞，是一种具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞，属于非终末分化细胞，可分化为脂肪、软骨、骨、肌肉、肌腿、神经、肝、心肌、胰岛细胞和内皮等多种组织细胞。间充质干细胞由于免疫原性低，成体组织来源丰富广泛存在于人体的骨髓、脂肪组织、新生儿脐带及胎盘等，易于分离，纯度高，无肿瘤细胞污染扩增时培养体系能统一，便于质控可制成种子细胞冷冻，多次使用，冷冻后细胞损失小潜伏性病毒和病原微生物的感染及传播几率比较低采集时对产妇及新生儿无任何危害及损伤采集方便，易于保存和运输，伦理学争议少。目前不少研究证明干细胞在体外进过特殊培养均有分化成为肝细胞的能力。近年来脐带来源的间充质干细胞，治疗因其有重现性好、低免疫原性、费用低、运作方便、容易等优势，成为继原位肝移植后又一治疗肝衰竭的有效方法。制备过程相对简单、易于收集、生物特性稳定、安全性能稳定、重复性好，病人可以在心理上接受，因此能满足临床应用的需求。增殖能力强，其具有贴壁性有利于细胞的纯化和培养，同时具有较强的分化能力、免疫原性低、避免了胚胎干细胞移植后可能产生畸胎瘤和伦理问题；它可以在异基因移植中长期存活并发挥正常的生理功能，因此新的治疗方法一在治疗有着极大的优势。目前不少研究证明干细胞在体外进过特殊培养均有分化成为肝细胞的能力。证明造血干细胞可以体外培养可以分化成为肝细胞。研究证明骨髓来源的间充质干细胞体外分化培养可以分化成肝细胞。目前大鼠、小鼠和人的有关实验模型，提示骨髓来源细胞可以转化为肝细胞。目前关于不同来源干细胞治疗急性肝衰的报道也有很多。证明脐带间充质干细胞能治疗对乙酞基氨基酚引起的急性肝衰。有人得出结论，肝脏中某些部分损伤可能更适合用骨髓来源的干细胞进行修复。骨髓间充质干细胞治疗急性肝衰的研究也有报道，但是骨髓间充质干细胞取材过程对患者造成较大伤害，用脂肪间充质干细胞也有诱导发生脂肪肝的缺点。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种组合物及其应用。该组合物可以预防肝衰竭、减缓慢性肝衰竭进展并去除有害的毒性。本细胞组合物对于防止和或治疗由局部缺血、药物如对乙酞氨基酚、病毒、肥胖症非酒精性脂肪性肝炎、以及阻塞胆管阻塞、肿瘤所引起的慢性肝损伤是有效的。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种组合物，包括生长因子、白蛋白和脐带间充质干细胞。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物中所述生长因子占组合物的质量百分含量为1～10％。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物中所述生长因子占组合物的质量百分含量为5％。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物中所述白蛋白占组合物的质量百分含量为15～30％。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物中所述白蛋白占组合物的质量百分含量为20％。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物中所述脐带间充质干细胞的浓度为1.0～10.0×107/ml。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物中所述脐带间充质干细胞的浓度为1.5×107/ml。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物中所述生长因子选自重组人肝细胞生长因子、胰高血糖素或前列腺素E2。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物中所述组合物的使用剂量以脐带间充质干细胞计为1.0～10.0×107/kg动物体重。本专利技术还提供了所述组合物在制备预防和/或治疗肝脏疾病的药物和/或保健品。所述肝脏疾病选自由局部缺血、药物如对乙酰氨基酚、病毒、肥胖症非酒精性脂肪性肝炎，阻塞胆管阻塞、肿瘤所引起的慢性肝损伤，肝衰竭，或慢性肝衰竭。此外，本专利技术还提供了一种预防和/或治疗肝脏疾病的药物和/或保健品，其特征在于，包括本专利技术提供的所述组合物。本专利技术提供了一种组合物，包括生长因子、白蛋白和脐带间充质干细胞。该组合物可以预防肝衰竭、减缓慢性肝衰竭进展并去除有害的毒性。本细胞组合物对于防止和或治疗由局部缺血、药物如对乙酞氨基酚、病毒、肥胖症非酒精性脂肪性肝炎、以及阻塞胆管阻塞、肿瘤所引起的慢性肝损伤是有效的。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示对照组流式细胞仪检测结果；图2示样本组流式细胞仪检测结果；图3示病理切片显示结果；其中，图3(A)示正常组；图3(B)示对照组；图4示生存期结果。具体实施方式本专利技术公开了一种组合物及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本专利技术提供的组合物及其应用中所用原料及试剂均可由市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：实施例1脐带间充质干细胞分离纯化分离无菌取健康人胎儿脐带10cm，75％乙醇溶液中浸泡消毒5min，用PBS冲洗2次。分离并取出脐带外膜和血管，将脐带Wharton胶组织剪碎至1mm3组织块，移至质量分数为0.1％胶原酶IV中，37℃消化18h，将细胞悬浮液通过70μm的细胞过滤网。用离心管收集细胞悬液，用培养基反复洗涤2次，离心。以含10％FBS的DMEM-F12培养基重悬细胞，并调整细胞密度为2×105/ml接种到15㎝培养皿，转移至5％CO2、37℃、饱和湿度为95％的CO2培养箱中培养。细胞培养6～7天后换液，此后3d换液一次，直到细胞生长至融合度达85％，胰酶消化传代或冻存。此为原代脐带间充质干细胞。传代培养：传代时先全部吸出培养液后，用PBS洗涤二次，加入37℃预热的0.25％(2.5g/L)胰蛋白酶(含1mmol/LEDTA，即用1mmol/L-EDTA-Na2配制)消化2分钟，加入完全培养液终止本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其特征在于，包括生长因子、白蛋白和脐带间充质干细胞。

【技术特征摘要】
1.一种组合物，其特征在于，包括生长因子、白蛋白和脐带间充质干细胞。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述生长因子选自肝细胞生长因子、前列腺素、胰岛素或胰高血糖素。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述肝细胞生长因子占组合物的含量为30μg/ml～60μg/ml、所述前列腺素占组合物的含量为4μg/ml～8μg/ml、所述胰岛素占组合物的含量为20U/ml～40U/ml、所述胰高血糖素占组合物的含量为3mg/ml～6mg/ml。4.根据权利要求1至3任一项所述的组合物，其特征在于，所述白蛋白占组合物的质量百分含量为15～30％。5.根据权利要求1至4任一项所述的组合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛啸虎，陈海佳，王一飞，黄新珠，王小燕，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44