对外部环境变化的耐性提高的固定化蛋白酶制造技术

本发明专利技术的课题在于，提供一种能够用于蛋白质的质谱分析用样品的制备的、对外部环境变化的稳定性优异的高活性的固定化蛋白酶。根据本发明专利技术，可提供一种固定化蛋白酶及其制造方法，其特征在于，在纳米颗粒表面固定有粗纯化的蛋白酶或未进行耐自体分解处理的蛋白酶。本发明专利技术的固定化蛋白酶能够不受外部环境变化的影响地维持高活性，因此例如对供于临床被检体中的蛋白质质谱分析的样品的制备有效。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对外部环境变化的耐性提高的固定化蛋白酶
本专利技术涉及一种能够用于蛋白质的质谱分析用样品的制备的、对外部环境变化的耐性提高的固定化蛋白酶。
技术介绍
随着质谱分析技术的发展，对于蛋白质，也在进行应对多检体处理的高通量解析平台的开发，但作为其开发基础的蛋白质解析则落后于基因组解析。其原因在于，就基因组解析而言，存在PCR、质粒扩增等多种用于制备样品的通用性好且定量性的方法，与此相对地，蛋白质解析方面则未能建立再现性高的样品制备技术。第一，蛋白质尚未建立起有效的扩增手段。第二，在质谱分析对象为抗体等巨大蛋白时，由于难以直接进行分析，因此作为其前处理，虽然用蛋白酶来消化蛋白质、进行片段化，但无法充分确保该消化反应的再现性。作为提高蛋白质消化反应的再现性的尝试，进行了使蛋白酶结合在固相载体上的尝试。截至目前，有多个报道指出，通过使胰蛋白酶等蛋白酶结合在玻璃表面、膜、中空纤维、高分子、凝胶、溶胶、多孔二氧化硅等固相载体上，从而使酶活性、反应速度提高(非专利文献1～5等)。此外还报道了：在通过限制蛋白酶接近底物而选择性地水解蛋白质的方法中，使用固定化有胰蛋白酶的纳米颗粒(非专利文献6)。通过是否本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种固定化蛋白酶，其特征在于，在纳米颗粒表面固定化有粗纯化的蛋白酶或未进行耐自体分解处理的蛋白酶。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.03.09 JP 2015-0463801.一种固定化蛋白酶，其特征在于，在纳米颗粒表面固定化有粗纯化的蛋白酶或未进行耐自体分解处理的蛋白酶。2.根据权利要求1所述的固定化蛋白酶，其中，纳米颗粒的粒径为100～500nm。3.根据权利要求1或2所述的固定化蛋白酶，其中，纳米颗粒为磁性纳米颗粒。4.根据权利要求1～3中任一项所述的固定化蛋白酶，其中，蛋白酶为胰蛋白酶、糜蛋白酶、赖氨酰肽链内切酶、V8蛋白酶、AspN蛋白酶、ArgC蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或二肽基肽酶。5.根据权利要求1～3中任一项所述的固定化蛋白酶，其中，耐自体分解处理为还原性二甲基化处理。6.根据权利要求5所...

【专利技术属性】
技术研发人员：嶋田崇史，岩本典子，
申请(专利权)人：株式会社岛津制作所，
类型：发明
国别省市：日本,JP