鉴定VSIG8作为推定VISTA受体及其用以产生VISTA/VSIG8激动剂和拮抗剂的用途制造技术

鉴定了VISTA的受体(VSIG8)，以及使用这个受体鉴定或合成激动或拮抗VSIG8和/或VISTA的作用和/或VSIG8/VISTA结合相互作用的激动剂或拮抗剂化合物，优选是抗体、多肽和融合蛋白。这些拮抗剂可用于抑制VISTA对T细胞免疫性的抑制作用，以及更特定地，用于治疗癌症或感染性疾病。这些激动剂化合物可用于加强或增强VISTA对T细胞免疫性的抑制作用，并且由此抑制T细胞免疫性，诸如在治疗自体免疫性、过敏或炎症性病状时。也提供用于鉴定这些激动剂和拮抗剂化合物的筛选测定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】鉴定VSIG8作为推定VISTA受体及其用以产生VISTA/VSIG8激动剂和拮抗剂的用途相关申请本申请要求2014年12月5日提交的美国临时序列号62/088,058的优先权，所述美国临时申请的内容以引用的方式整体并入本文。领域本申请大体上涉及鉴定VISTA(含有V区免疫球蛋白的T细胞活化抑制剂(V-regionImmunoglobulin-containingSuppressorofTcellActivation)1)的受体，所述VISTA是一种先前鉴定的属于B7家族的调节T细胞活化和增殖的免疫调节多肽。本专利技术也涉及所得受体用以产生激动或拮抗VSIG8的作用的化合物的用途，所述化合物可用作治疗剂，尤其在治疗癌症、感染性病状、自体免疫性、炎症和过敏性病症方面。本专利技术明确涉及所得受体用以产生激动或拮抗VISTA/VISTA-R结合相互作用的化合物的用途。此外，本专利技术涉及所述激动剂或拮抗剂用以增强或抑制受VISTA影响的免疫功能诸如CD4+或CD8+T细胞增殖、CD4+或CD8+T细胞活化和免疫细胞因子产生的用途。背景免疫负性检查点调节剂(NCR)路径已被证明是治疗人免疫相关疾病的卓越临床靶标。使用单克隆抗体(mAb)阻断两种NCR即CTLA-4和PD-1以增强肿瘤免疫性正在彻底改变对癌症的治疗，并且已将这些路径确定为人疾病情况下的临床验证靶标。更新近地，触发NCR路径的可溶性形式的NCR配体已作为用以治疗自体免疫性的免疫抑制性药物(即针对类风湿性关节炎的AMP-110/B7-H4-Ig)进入临床，并且急切等待着早期临床结果。VISTA(含有V区免疫球蛋白的T细胞活化抑制剂(1))是一种新近鉴定的NCR配体，其最密切系统发生亲缘物是PD-L1。如同PD-L1一样，VISTA是深度抑制免疫性的配体(1)，并且如同PD-L1一样，阻断VISTA允许在临床前肿瘤学模型中产生对癌症的治疗免疫性(2)。尽管阻断VISTA会增强免疫性，尤其是CD8+和CD4+介导的T细胞免疫性，但用VISTA的细胞外结构域的可溶性Ig融合蛋白(VISTA-Ig)治疗会抑制免疫性，并且已显示会遏止多个鼠类自体免疫性疾病模型的进展。明确科学证据已显示VISTA是诱导深度T细胞抑制的配体；然而，转导这个抑制作用的受体的身份当前未知。鉴于在NCR路径方面的受体的极低uM亲和力和低密度，对它们的鉴定已特别具有挑战性。在本文中，我们呈现已将那个“含有V组和免疫球蛋白结构域的蛋白8(V-SetandImmunoglobulindomaincontaining8)”鉴定为VISTA的受体(下文称为“V-R”或“VSIG8”)的实验方法。我们进一步公开验证VSIG8与VISTA在体外和在体内特异性相互作用，并且VISTA与VSIG8的相互作用对T细胞活化、增殖和/或免疫细胞因子产生具有抑制作用的测定。鉴定VSIG8作为VISTA的受体具有许多临床和科学前景。已知VISTA拮抗剂例如αVISTAmAb适用作治疗肿瘤学疾病和感染的治疗剂。此外，VISTA的片段可用作VISTA拮抗剂，并且潜在适用作治疗肿瘤学疾病和感染的治疗剂。此外，已证明VISTA多肽例如VISTA-Ig融合蛋白用于预防和治疗自体免疫性、炎症和过敏性病症。因此，VSIG8将类似地适用，因为它将提供用于开发VISTA-R激动剂和拮抗剂的第二独立靶标。实际上，关于B7家族中的受体，迄今为止出现的最有效治疗剂是(αCTLA4{叶沃(Yervoy)}和αPD-1{纳武单抗(Novolumab)})，其两者均是阻断受体信号传导的抗体而非针对相应配体的抗体。因此，阻断或抑制VISTA/VISTA-R相互作用的针对VSIG8的抗体应有效治疗肿瘤学疾病和感染性疾病。特定来说，VISTA-R拮抗剂将潜在用于治疗癌症或感染性疾病适应症诸如黑素瘤和肺癌或HIV感染。相比来说，促进或增强VISTA/VISTA-R结合相互作用的VISTA-R激动剂将潜在用于治疗自体免疫适应症、过敏性适应症和炎症性适应症、GVHD、移植适应症或其中需要抑制T细胞活化、T细胞增殖或细胞因子产生的其它适应症。此外，对V-R的鉴定将极大加快作为免疫抑制性药物的VISTA-Ig的临床开发，并且进一步促进药力学、靶标衔接和药物动力学研究的探知，所述研究可用于探知为产生最优临床结果所需的受体占位水平。本专利技术通过鉴定VSIG8作为VISTA的受体来满足这些目标。概述本专利技术的一个目标在于使用结合和功能性测定来鉴定和确认VSIG8是VISTA的受体。本专利技术的一个目标也在于使用鉴定的受体来产生激动或拮抗VISTA/VISTA-R结合相互作用的化合物，诸如激动性和拮抗性抗VISTA-R抗体以及VISTA-R多肽、VISTA-R片段和衍生物以及VISTA-R融合蛋白。本专利技术的一个目标也在于使用激动或拮抗VISTA-R和/或VISTA/VISTA-R结合相互作用的VSIG8激动剂或拮抗剂例如激动性和拮抗性抗VSIG8抗体以及VSIG8多肽、VSIG8片段和衍生物以及VISTA-R融合蛋白来调节免疫性，尤其是T细胞和树突细胞免疫性。本专利技术的一个特定目标也在于使用激动或拮抗VISTA-R和/或VISTA/VISTA-R结合相互作用的VISTA-R激动剂或拮抗剂例如激动性和拮抗性抗VISTA-R抗体以及VISTA-R多肽、VISTA-R片段和衍生物以及VISTA-R融合蛋白来调节CD4+或CD8+T细胞活化、增殖和细胞因子产生。本专利技术的一个特定目标也在于使用激动或拮抗VISTA-R和/或VISTA/VISTA-R结合相互作用的VISTA-R激动剂或拮抗剂例如激动性和拮抗性抗VISTA-R抗体以及VISTA-R多肽、VISTA-R片段和衍生物以及VISTA-R融合蛋白来治疗癌症、感染性疾病诸如病毒性感染。本专利技术的一个特定目标也在于使用激动或拮抗VISTA-R和/或VISTA/VISTA-R结合相互作用的VISTA-R激动剂或拮抗剂例如激动性和拮抗性抗VISTA-R抗体以及VISTA-R多肽、VISTA-R片段和衍生物以及VISTA-R融合蛋白来治疗自体免疫性、过敏性和炎症性疾病适应症。本专利技术的另一个目标在于使用鉴定的V-R来加快作为免疫抑制性药物的VISTA-Ig的临床开发，并且促进药力学、靶标衔接和药物动力学研究的探知，以及限定为产生VISTA-Ig治疗性化合物的最优临床结果所需的受体占位水平和剂量。本专利技术的一个特定目标在于提供一种激动或拮抗VISTA和VSIG8的相互作用的化合物，例如特异性结合VSIG8的抗体或抗体片段，诸如激动性抗VSIG8抗体或抗体片段或拮抗性抗VSIG8抗体或抗体片段。本专利技术的一个特定目标在于提供一种激动或拮抗VISTA和VSIG8的相互作用的化合物，例如人源化、人、灵长类动物源化或嵌合抗VSIG8抗体或抗体片段，例如Fab、Fab’、scFv或Fab2。本专利技术的一个特定目标在于提供一种激动或拮抗VISTA和VSIG8的相互作用的化合物，例如包含VSIG8的细胞外区域的全部或一部分或与优选是人、灵长类动物或鼠类VSIG8的VSIG8的细胞外区域具有至少80％、90％、95％或更大序列同一性％的所述细胞外区域的衍生物的化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种化合物，其激动或拮抗VISTA和V‑R(VSIG8)的相互作用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.05 US 62/088,0581.一种化合物，其激动或拮抗VISTA和V-R(VSIG8)的相互作用。2.如权利要求1所述的化合物，其是激动性抗VSIG8抗体或抗体片段。3.如权利要求1所述的化合物，其是拮抗性抗VSIG8抗体或抗体片段。4.如权利要求1所述的化合物，其包含至少一个拷贝的引发对T细胞免疫性的抑制作用的包含VSIG8的细胞外区域的多肽、其片段或所述VSIG8多肽的衍生物，所述衍生物与VSIG8的所述细胞外区域或与SEQIDNO:1、2或3具有至少80、90、95、96、97、98或99％序列同一性。5.如权利要求4所述的化合物，其包含至少一个包含人、非人灵长类动物或鼠类VSIG8的整个细胞外区域的多肽。6.如权利要求4或5所述的化合物，其是融合蛋白。7.如权利要求6所述的化合物，其是Ig融合蛋白。8.如权利要求7所述的化合物，其包含任选被诱变以消除FcR或补体结合的人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区或其片段。9.一种分离的复合物，其包含VISTA和VSIG8。10.如权利要求9所述的复合物，其中所述VISTA和/或VSIG8是寡聚的或多聚的。11.一种抗体或抗体片段，其特异性结合如权利要求10所述的VISTA-VSIG8复合物。12.一种药物组合物，其包含至少一种根据上述权利要求中任一项所述的化合物。13.一种疫苗组合物，其包含至少一种根据上述权利要求中任一项所述的化合物和抗原。14.一种含有根据前述权利要求中任一项所述的VSIG8或VSIG8/VISTA激动剂或拮抗剂的组合物用于诊断或治疗使用的治疗和/或诊断方法或用途，所述方法或用途包括向有此需要的受试者施用至少一个剂量或包含治疗或诊断有效量的至少一种根据前述权利要求中任一项所述的VSIG8或VSIG8/VISTA激动剂或拮抗剂的组合物或根据上述权利要求中任一项所述的含有其的组合物。15.一种抗体或抗原结合片段或含有其的组合物检测个体是否患有与VSIG8和/或VISTA介导的对免疫性的作用增加或降低相关的病状的诊断方法或用途，其中所述方法或用途包括使来自所述个体的组织样品与根据前述权利要求中任一项所述的化合物例如抗体或抗原结合片段或组合物接触，以及检测与所述化合物的特异性结合。16.一种含有抗VSIG8抗体或抗原结合片段的组合物用于诊断或治疗使用的治疗和/或诊断方法或用途，其包括在有此需要的受试者中促进T细胞免疫性或天然杀伤(NK)免疫性和/或抑制Treg或MDSC，其包括施用治疗或诊断有效量的至少一种根据上述权利要求中任一项所述的抗体、抗原结合片段或含有其的组合物，其中所述抗体或抗原结合片段抑制、拮抗或阻断具有与SEQIDNO:1、2或3的多肽至少90％同一的氨基酸序列的VSIG8多肽对免疫性或免疫细胞的至少一种作用。17.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其使用抑制VSIG8和/或VISTA对T细胞免疫性的抑制作用的VSIG拮抗剂。18.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其使用促进CTL活性的VSIG拮抗剂。19.一种含有抗VSIG8抗体或抗原结合片段的组合物用于诊断或治疗使用的治疗和/或诊断和/或诊断方法或用途，其包括促进有此需要的受试者中NK或T细胞免疫性，并且其包括施用治疗或诊断有效量的至少一种根据前述权利要求中任一项所述的抗体、抗原结合片段或含有其的组合物，其中所述抗体或抗原结合片段抑制具有氨基酸序列SEQIDNO:1、2或3的多肽(VSIG8)或与所述多肽或与非人VSIG8直系同源物具有至少90％序列同一性的多肽对免疫性或免疫细胞或与人VISTA的至少一种作用。20.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其中所治疗的个体罹患感染性疾病。21.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其中所治疗的个体罹患癌症。22.一种根据前述权利要求中任一项所述的任何化合物的方法或用途，所述化合物例如抗VSIG8抗体或抗原结合片段或VSIG8融合蛋白，其介导任何一种以下免疫抑制性作用或至少一种以下免疫抑制作用的组合：(i)降低免疫应答，(ii)降低T细胞活化，(iii)降低细胞毒性T细胞活性，(iv)降低天然杀伤(NK)细胞活性，(v)降低T细胞活性，(vi)降低促炎性细胞因子分泌，(vii)降低IL-2分泌；(viii)降低干扰素-γ产生，(ix)降低Thl应答，(x)降低Th2应答，(xi)增加调节性T细胞的细胞数目和/或活性，(xii)增加调节性细胞活性和/或骨髓源性抑制细胞(MDSC)、iMC、间质基质细胞、TIE2表达性单核细胞中的一者或多者，(xiii)增加调节性细胞活性和/或骨髓源性抑制细胞(MDSC)、iMC、间质基质细胞、TIE2表达性单核细胞中的一者或多者的活性，(xiii)增加M2巨噬细胞，(xiv)增加M2巨噬细胞活性，(xv)增加N2嗜中性白细胞，(xvi)增加N2嗜中性白细胞活性，(xvii)增加对T细胞活化的抑制，(xviii)增加对CTL活化的抑制，(xix)增加对NK细胞活化的抑制，(xx)增加T细胞耗竭，(xxi)降低T细胞应答，(xxii)降低细胞毒性细胞的活性，(xxiii)降低抗原特异性记忆应答，(xxiv)抑制细胞的凋亡或溶解，(xxv)降低对细胞的细胞毒性或细胞抑制性作用，(xxvi)降低细胞的直接杀灭，(xxvii)降低Thl7活性和/或(xxviii)降低补体依赖性细胞毒性和/或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性，条件是所述抗VSIG8抗体或抗原结合片段可引发(i)-(xxviii)中的一者或多者的相反作用，并且任选用于治疗自体免疫性、过敏、炎症、移植或败血症。23.一种含有抗VSIG8抗体或抗原结合片段的组合物用于诊断或治疗使用的治疗和/或诊断方法或用途，其包括在有此需要的受试者中抑制T细胞免疫性或天然杀伤(NK)免疫性和/或促进Treg或MDSC，其包括施用治疗或诊断有效量的至少一种根据上述权利要求中任一项所述的抗体、抗原结合片段或含有其的组合物，其中所述抗体或抗原结合片段激动、模拟或促进具有氨基酸序列SEQIDNO:1、2或3的多肽(VSIG8)或直系同源物对免疫性或免疫细胞的至少一种作用。24.如权利要求23所述的方法或用途，其用于治疗过敏、自体免疫性、移植、基因疗法、炎症或其组合。25.根据前述权利要求中任一项所述的抗VSIG8抗体或抗原结合片段或VSIG8融合蛋白或组合物或方法或用途，其进一步包括选自以下的另一抗体：靶向CTLA4、PD-1、PDL-1、LAG-3、TIM-3、BTLA、B7-H4、B7-H3、VISTA中的一者或多者的拮抗性抗体和/或靶向CD40、CD137、OX40、GITR、CD27、CD28或ICOS中的一者或多者的激动性抗体。26.如前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其包括在治疗之前、同时和/或之后，通过所述个体的细胞来测定VSIG8和/或VISTA蛋白。27.一种用于选择根据前述权利要求中任一项所述的抗VSIG8抗体或抗原片段或适用于根据前述权利要求中任一项所述的方法或用途中的抗VSIG8抗体的测定方法，其中所述方法包括(i)获得一种或多种抗体，所述抗体推定结合具有选自SEQIDNO:1、2或3中的任一者所示的氨基酸序列的序列的VSIG8多肽，或结合具有与所述VSIG8多肽具有至少90％序列同一性的多肽，或结合非人VSIG8直系同源物，或含有至少一个VSIG8表位的其片段或变体，所述片段或变体与所述VSIG8多肽或与非人VSIG8直系同源物具有至少90％同一性，(ii)确定所述抗体或抗原结合片段是否特异性结合所述VSIG8多肽，(ii)确定所述抗体或抗原结合片段是否调节(激动或拮抗)VSIG8对免疫性的至少一种作用，和(iv)如果(ii)和(ii)得以满足，那么选择所述抗体作为潜在用于根据前述权利要求中任一项所述的方法或用途中的抗体。28.如权利要求27中任一项所述的方法，其中所选抗体被证明介导至少一种以下作用：(i)增加免疫应答，(ii)增加T细胞活化，(iii)增加细胞毒性T细胞活性，(iv)增加NK细胞活性，(v)缓和T细胞抑制，(vi)增加促炎性细胞因子分泌，(vii)增加IL-2分泌；(viii)增加干扰素-γ产生，(ix)增加Thl应答，(x)降低Th2应答，(xi)降低或消除调节性T细胞(Treg)、骨髓源性抑制细胞(MDSC)、iMC、间质基质细胞、TIE2表达性单核细胞中的至少一者的细胞数目和/或活性，(xii)降...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·莫洛伊，Y·郭，J·罗斯坦，M·罗森茨威格，
申请(专利权)人：伊穆奈克斯特股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US