The invention relates to a dextran in the loop mediated isothermal amplification and its application in the kit and the detection method, based on loop mediated isothermal amplification system with dextran to a final concentration of 0.1 ~ 0.5mol/L (as glucose), improve the polymerase stability, it can replace the ordinary LAMP kit is expensive \by\ and \GB\, can be very good to promote the high content of GC amplification can be detected, the reaction time is reduced to 20 30 minutes, can reduce the cost and shorten the test cycle, the loop mediated isothermal detection plays an important role in the amplification of pathogenic microorganism.
【技术实现步骤摘要】
右旋糖苷在环介导等温扩增中的应用及其试剂盒和检测方法
本专利技术属于生物
,涉及右旋糖苷在环介导等温扩增中的应用,还涉及含有右旋糖苷的试剂盒和检测方法。
技术介绍
目前,原微生物的检测方法主要有分离培养鉴定法、聚合酶链式反应(PCR)法和荧光定量PCR(FQ-PCR)法,但分离培养鉴定法操作繁琐、费时,PCR法和FQ-PCR法需要昂贵的仪器和试剂,检测成本高,不适合中小型单位和现场检测应用。环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)技术与其它核酸扩增技术相比,可以在等温条件下快速、高效、特异地扩增靶序列,且操作简便,不需要昂贵的仪器和试剂,成本低,已在病原微生物检测领域显示出广阔的发展前景。但扩增过程中仍需要价格较高的DNA聚合酶,如果能减少DNA聚合酶的使用量将对进一步降低病原微生物检测成本具有重要意义。克雷伯氏菌属(Klebsiella)为革兰氏阴性杆菌。主要有肺炎克雷伯氏菌(K.peneumoniae)、臭鼻克雷伯氏菌(K.ozaenae)和鼻硬结克雷伯氏菌(k.rhinoscleromatis)。其中臭鼻克雷伯氏菌对家禽致病性较强,是重要的条件致病菌和医源性感染菌之一。由其引起的鸡鼻炎型克雷伯氏菌病是危害鸡、火鸡和山鸡等家禽和野禽的一种接触性传染病。该病发病率和死亡率通常在10~30%,但有的鸡场感染鸡鼻炎型克雷伯氏菌的病鸡死亡率高达75%。一旦某地区的鸡群发生鸡鼻炎型克雷伯氏菌感染,该病就会成为地方性疾病,很难彻底根除,并且经常反复爆发,带来巨大的经济损失。鸡鼻炎型克雷伯氏菌感染以引 ...
【技术保护点】
右旋糖苷在环介导等温扩增中提高酶稳定性或/和缩短反应时间中的应用。
【技术特征摘要】
1.右旋糖苷在环介导等温扩增中提高酶稳定性或/和缩短反应时间中的应用。2.含有右旋糖苷的环介导等温扩增的检测试剂盒,其特征在于,包括如下组分:环介导等温扩增内引物和外引物,嗜热乳酸枯草芽孢杆菌DNA聚合酶、10×热聚合反应缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物、硫酸镁、甜菜碱、右旋糖苷和荧光染料赛博绿Ⅰ;所述10×热聚合反应缓冲液由浓度为150-250mmol/L、pH为8.5-8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、浓度为50-100mmol/L的氯化钾、浓度为50-100mmol/L的硫酸铵、浓度为15-20mmol/L的硫酸镁和质量分数为0.5-1%的曲拉通X-100组成;所述三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物由三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸和三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸组成。3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于:所述环介导等温扩增内引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示;所述外引物序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。4.根据权利要求2或3所述的试剂盒,其特征在于:所述环介导等温扩增内引物浓度分别为5μmol/L;所述外引物浓度分别为20μmol/L。5.根据权利要求2或3所述的试剂盒,其特征在于:所述嗜热乳酸枯草芽孢杆菌DNA聚合酶浓度为8U/μl、所述三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物各组分浓度为10mmol/L、硫酸镁浓度为100mmol/L、甜菜碱浓度为2mol/L、右旋糖苷浓度为4mol/L和荧光染料赛博绿Ⅰ质量分数为10%。6.根据权利要求2或3所述的试剂盒,其特征在于:所述10×热聚合反应缓冲液由浓度为250mmol/L、pH为8.8的Tris–HCl、浓度为100mmol/L的...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨金龙,戴茜茜,殷素会,许国洋,周婵,王海燕,谷山林,王介平,吕金凤,王小燕,李晋,
申请(专利权)人:重庆市畜牧科学院,
类型:发明
国别省市:重庆,50
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