一种肾透明细胞癌的诊断标志物及其治疗靶标制造技术

本发明专利技术公开了一种肾透明细胞癌的诊断标志物及其治疗靶标，所述诊断标志物及其治疗靶标为MRO，属于基因新用途技术领域。本发明专利技术首次发现标志物MRO在肾透明细胞癌患者中表达下调，且通过上调MRO的表达可以降低癌细胞的增殖、迁移和侵袭，提示MRO作为靶标可用于实现肾透明细胞癌、肾癌转移的治疗。

A diagnostic marker of renal clear cell carcinoma and its therapeutic target

The invention discloses a diagnostic marker for renal clear cell carcinoma and a therapeutic target thereof, wherein the diagnostic marker and the therapeutic target thereof are MRO, belonging to the new gene application technology field. It is the first time that the expression of MRO is down regulated in patients with clear cell renal cell carcinoma, and the proliferation, migration and invasion of cancer cells can be reduced by up regulating the expression of MRO, suggesting that MRO can be used as a target for the treatment of clear cell renal cell carcinoma and renal cell carcinoma metastasis.

【技术实现步骤摘要】
一种肾透明细胞癌的诊断标志物及其治疗靶标
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种肾透明细胞癌的诊断标志物及其治疗靶标，具体的所述诊断标志物及其治疗靶标为MRO。
技术介绍
肾细胞癌(renalcellcarcinoma,RCC)，又称肾腺癌，简称为肾癌，是起源于肾小管上皮细胞的恶性肿瘤，其发病率位居泌尿系肿瘤的第二位。近年来，肾癌发病率呈明显上升趋势。肾透明细胞癌(clearcellrenalcellcarcinoma，ccRCC)是肾癌中最为多见的组织分型，约占80-85％。目前治疗肾癌最主要的方法就是根治性肾切除，对于肿块局限于肾周筋膜内的肾癌，手术切除的疗效最为确切，但对于已发生浸润转移的患者则疗效十分有限。此外，肾癌根治术后约20-40％患者在术后3年内会出现复发或转移。由于肾癌对于放化疗均不敏感，对于晚期肾癌和肾癌术后复发转移患者目前仍缺乏十分有效的治疗手段，虽然分子靶向药物治疗的开展对此类患者的预后有了一定的改善，但肾癌患者总体的治疗效果仍难令人满意。因此，探寻新的有效的诊断和治疗手段对于肾癌而言已是刻不容缓。既往的研究表明，多个因素促进了ccRCC的发生和发展，比如癌基因的激活、抑癌基因的失活或生长因子的异常表达等。国内外学者在该领域开展了大量研究，相继发现VHL、VEGF等一系列与肾癌发生和发展密切相关的基因或信号通路。尽管如此，我们对ccRCC发生发展的具体机理仍不完全清楚，需要开展更多的基础实验研究。高通量测序技术的发展为疾病发病机理的研究提供了更加全面和快速的分析手段，高通量测序技术因其产生数字化信号、高灵敏度以及全基因组分析而得到广泛的应用。通过对患者的样本进行高通量测序，寻找在疾病中差异表达的基因，并通过进一步实验排除假阳性，发现与疾病发生发展直接相关的基因，从而为疾病机理的研究，以及疾病的预测和药物开发提供研究基础。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一，提供一种肾透明细胞癌的诊断标志物，通过检测样本中标志物的表达水平来判断患者是否患有肾透明细胞癌或者患肾透明细胞癌的风险。本专利技术的目的之二，提供一种肾透明细胞癌的治疗靶标，通过改变患者中靶标的表达水平，从而达到治疗肾透明细胞癌的目的。本专利技术的目的之三，提供一种筛选预防或治疗肾透明细胞癌的潜在物质的方法，通过所述物质能否调节生物靶标的表达水平来判断所筛选的物质是否是预防或治疗肾透明细胞癌的潜在物质。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测MRO表达水平的试剂在制备诊断肾透明细胞癌的产品中的应用。进一步，所述产品包括芯片、制剂或试剂盒。其中，所述产品可以通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片技术等检测技术来检测MRO的表达。本专利技术提供了一种芯片、制剂或试剂盒，包括检测样本中MRO基因或其编码的蛋白表达水平的试剂。进一步，所述试剂包括特异性识别MRO的探针或特异性扩增MRO的引物；或特异性结合MRO编码的蛋白的抗体或配体。进一步，所述试剂至少包括一对特异性扩增MRO的引物，优选的所述特异性扩增MRO的引物的序列如SEQIDNO.1～2所示。在本专利技术中，所述芯片、制剂或试剂盒可用于检测包括MRO在内的与肾透明细胞癌相关的多个基因和/或其表达产物的表达水平。多个基因联合诊断，可以增加肾透明细胞癌诊断的准确性。本专利技术提供了MRO在筛选预防或治疗肾透明细胞癌的潜在物质中的应用。进一步，所述潜在物质为可以促进MRO基因和/或其编码的蛋白表达水平或活性的物质。进一步，筛选潜在物质的步骤如下：用候选物质处理表达或含有MRO基因或其编码的蛋白的体系；和检测所述体系中MRO基因或其编码的蛋白的表达或活性；其中，若所述候选物质可促进MRO基因或其编码的蛋白的表达或活性(优选显著升高，如高20％以上，较佳的高50％以上；更佳的高2倍以上)，则表明该候选物质是预防或治疗肾透明细胞癌的潜在物质。进一步，所述步骤还包括：对获得的潜在物质进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以从潜在物质中进一步选择和确定对于预防、缓解或治疗肾透明细胞癌有用的物质。在本专利技术中，所述体系包括(但不限于)：细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。所述候选化合物包括(但不限于)：针对MRO基因或其上游或下游基因设计的核酸促进物、蛋白促进剂、蛋白结合分子。本专利技术提供了MRO功能性表达的促进剂在制备治疗肾透明细胞癌的药物组合物中的应用。进一步，所述促进剂包括提高MRO基因或其表达产物稳定性、上调MRO基因或其表达产物的表达水平、增加MRO基因或其表达产物有效作用时间的物质。本专利技术提供了一种治疗肾透明细胞癌的药物组合物，所述药物组合物包括MRO功能性表达的促进剂，和/或与所述促进剂配伍的其他药类以及药学上可接受的载体和/或辅料。所述促进剂包括提高MRO基因或其表达产物稳定性、上调MRO基因或其表达产物的表达水平、增加MRO基因或其表达产物有效作用时间的物质。进一步，所述促进剂为MRO过表达载体。所述药学上可接受的载体和/或辅料，包括(但不限于)稀释剂、粘合剂、表面活性剂、致湿剂、吸附载体、润滑剂、填充剂、崩解剂。附图说明图1是利用QPCR检测MRO基因在肾透明细胞癌组织中的表达情况图；图2是利用Westernblot检测MRO蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达情况图；图3是MRO在肾透明细胞癌细胞中的表达情况图；其中，图A是检测MROmRNA在肾透明细胞癌细胞中的表达情况图；图B是检测MRO蛋白在肾透明细胞癌细胞中的表达情况图；图4是MRO在肾透明细胞癌细胞中的转染情况图；其中，图A是利用QPCR检测转染对肾透明细胞癌细胞中MROmRNA表达的影响图；图B是利用Westernblot检测转染对肾透明细胞癌细胞中MRO蛋白的影响图；图5是用MTT法检测MRO基因对肾透明细胞癌细胞增殖的影响图；图6是用流式细胞仪检测MRO基因对肾透明细胞癌细胞凋亡的影响图；图7是利用细胞划痕实验检测MRO对肾透明细胞癌细胞迁移的影响图；图8是利用Transwell小室检测MRO对肾透明细胞癌细胞侵袭的影响图。具体的实施方式本专利技术经过广泛而深入的研究，通过高通量测序方法，检测肾透明细胞癌标本中基因在肿瘤组织和癌旁组织的表达，发现其中具有明显表达差异的基因，探讨其与肾透明细胞癌的发生之间的关系，从而为肾透明细胞癌的早期检测及靶向治疗寻找更好的途径和方法。通过筛选，本专利技术首次发现了肾透明细胞癌中MRO显著性下调。实验证明，通过增加MRO的表达水平，能够有效地抑制肾透明细胞癌细胞的生长、凋亡和侵袭，提示检测MRO基因的表达水平可成为肾透明细胞癌早期诊断的辅助诊断指标之一，上调MRO基因表达可成为预防或治疗肾透明细胞癌或肾透明细胞癌转移的新途径。MRO基因MRO是位于人18号染色体长臂2区1带上，本专利技术中的MRO包括野生型、突变型或其片段。一种代表性的MRO基因序列如目前国际公共核酸数据库GeneBank中MRO基因(NC_000018.10)所示。本专利技术可以利用本领域内已知的任何方法测定基因表达。本领域技术人员应当理解，测定基因表达的手段不是本专利技术的重要方面。可以在转录水平上检测生物标志物的表达水平。芯片、制剂、试剂盒在本专利技术中，“芯片”、“本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测MRO表达水平的试剂在制备诊断肾透明细胞癌的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测MRO表达水平的试剂在制备诊断肾透明细胞癌的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括芯片、制剂或试剂盒。3.一种芯片、制剂或试剂盒，其特征在于，包括检测样本中MRO基因或其编码的蛋白表达水平的试剂。4.根据权利3所述的芯片、制剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂包括特异性识别MRO的探针或特异性扩增MRO的引物，或特异性结合MRO编码的蛋白的抗体或配体。5.MRO在筛选预防或治疗肾透明细胞癌的潜在物质中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述潜在物质为可以促进MRO基因和...

【专利技术属性】
技术研发人员：任静，马翠，石小峰，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11