一种与肾癌相关的基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与肾癌相关的基因及其应用，所述基因为ATP8B3，ATP8B3基因及其编码的蛋白在肾癌患者中表达上调，通过检测ATP8B3的表达水平可以判断患者是否患有肾癌；通过下调ATP8B3的表达可以抑制癌细胞的增殖以及迁移，从而为肾癌的治疗提供了新的靶标。

A gene associated with renal cell carcinoma and its application

The invention discloses a renal cell carcinoma and related gene and its application, the gene ATP8B3, expression of ATP8B3 gene and its encoding protein in renal cell carcinoma patients increased by detecting the expression level of ATP8B3 can determine whether patients with renal cell carcinoma; by down regulating the expression of ATP8B3 can inhibit cancer cell proliferation and migration, thus providing the new target for the treatment of renal cell carcinoma.

【技术实现步骤摘要】
一种与肾癌相关的基因及其应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种与肾癌相关的基因及其应用，具体的所述基因为ATP8B3。
技术介绍
肾细胞癌是在肾实质中泌尿小管上皮系统来源的恶性肿瘤，简称肾癌。肾癌在肾脏所有恶性肿瘤中占90％左右。流行病学调查显示肾癌患病率有逐年上升的趋势，在泌尿系统肿瘤中居第二位，其中男性高于女性，好发年龄在50-70岁。根据肾癌病理组织学分类，可分为肾透明细胞癌(renalclearcellcarcinoma，RCCC)，肾乳头状腺癌、肾嫌色细胞癌及肾梭形细胞癌等，其中RCCC占肾癌的60％～85％，是肾癌中最常见的恶性肿瘤。目前在临床上，肾癌的检查主要通过彩超、螺旋CT及核磁共振。在治疗上，转移性肾癌对放化疗不敏感，外科手术只能作为转移性肾癌的辅助治疗，免疫治疗有效率较低，即使是分子靶向治疗(如阿西替尼、索拉菲尼和坦西莫司等)有效率也仅为10％-40％，况且远期疗效不佳。因此，探求RCCC的发病机制并找到新的早期诊断和治疗途径刻不容缓。在分子学中，随着对转录组测序的不断深入，探寻与疾病相关的基因已成为当前抗肿瘤靶点研究的有效途径。相关基因标志物的发现不仅有助于肾癌患者的预后评估，同时也有助于临床上对肾癌的诊断、术后局部复发或远处转移的预测、也有望成为分子靶向药物研发的靶点，应用于临床。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种与肾癌发生发展相关的基因，通过检测样本中该基因的表达水平，可以判断患者是否患有肾癌或者患肾癌的风险的大小，通过靶向于该基因，改变该基因的表达水平或活性，可以实现肾癌患者的精准靶向治疗。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测ATP8B3表达水平的试剂在制备诊断肾癌的产品中的应用。进一步，所述试剂包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原味杂家或芯片技术检测ATP8B3表达水平用试剂。进一步，所述试剂包括针对ATP8B3基因的引物和/或探针，或针对ATP8B3蛋白的抗体和/或配体。本专利技术提供了一种诊断肾癌的产品，所述产品包括样本中检测ATP8B3表达水平的芯片、制剂或试剂盒。进一步，所述试剂盒包括至少一对特异性扩增ATP8B3基因的引物；优选的，所述引物具有SEQIDNO.1～2所示的序列。本专利技术提供了ATP8B3在筛选预防或治疗肾癌的候选化合物中的应用。进一步，筛选候选化合物的步骤如下：用候选物质处理表达或含有ATP8B3基因或其编码的蛋白的体系；和检测所述体系中ATP8B3基因或其编码的蛋白的表达或活性；其中，若所述候选物质可降低ATP8B3基因或其编码的蛋白的表达或活性优选显著降低，如低20％以上，较佳的低50％以上；更佳的低80％以上)，则表明该候选物质是预防或治疗肾癌的候选化合物。在本专利技术中，所述体系包括(但不限于)：细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。所述候选化合物包括(但不限于)：针对ATP8B3基因或其上游或下游基因设计的干扰分子、核酸抑制物、小分子化合物。在本专利技术中，所述的步骤还包括：对获得的候选化合物进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以从候选化合物中进一步选择和确定对于预防、缓解或治疗肾癌有用的物质。本专利技术提供了ATP8B3功能性表达的抑制剂在制备预防或治疗肾癌的药物组合物中的应用。所述ATP8B3功能性表达的抑制剂包括核酸抑制物，蛋白抑制剂，蛋白水解酶，蛋白结合分子。其中核酸抑制物选自：以ATP8B3或其转录本为靶序列、且能够抑制ATP8B3基因表达或基因转录的干扰分子，包括：shRNA(小发夹RNA)、小干扰RNA(siRNA)、dsRNA、微小RNA、反义核酸，或能表达或形成所述shRNA、小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。蛋白结合分子选自：与ATP8B3蛋白特异性结合的物质，如能够抑制ATP8B3蛋白活性的抗体或配体。进一步，所述抑制剂为siRNA；优选的，所述siRNA序列如SEQIDNO.9～10所示。在筛选有效的siRNA序列时，本专利技术人通过大量的比对分析，从而找出最佳的有效片段。本专利技术人设计合成了多种siRNA序列，并将它们分别通过转染试剂转染肾癌细胞系进行验证，选出干扰效果最佳的siRNA(在本专利技术中，最佳siRNA序列如SEQIDNO.9～10所示)。本专利技术中的核酸抑制剂如siRNA可以化学合成，也可以通过一个重组核酸结构里的表达盒转录成单链RNA之后进行制备。siRNA等核酸抑制物，可通过采用适当的转染试剂被输送到细胞内，或还可采用本领域已知的多种技术被输送到细胞内。本专利技术提供了一种治疗肾癌的药物组合物，所述药物组合物包括ATP8B3功能性表达的抑制剂，和/或与所述抑制剂配伍的其他药类以及药学上可接受的载体和/或辅料。所述ATP8B3功能性表达的抑制剂是指任何可降低ATP8B3蛋白的活性、降低ATP8B3基因或蛋白的稳定性、下调ATP8B3蛋白的表达、减少ATP8B3蛋白有效作用时间、或抑制ATP8B3基因的转录和翻译的物质，这些物质均可用于本专利技术，作为对于下调ATP8B3有用的物质，从而可用于预防或治疗肾癌。例如所述的抑制剂包括核酸抑制物，蛋白抑制剂，蛋白水解酶，蛋白结合分子。进一步，所述抑制剂为siRNA；优选的所述siRNA具有如SEQIDNO.9～10所示的序列。所述药学上可接受的载体包括(但不限于)稀释剂、赋形剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、表面活性剂、致湿剂、吸附载体、润滑剂、缓冲剂、稳定剂、抑菌剂、等渗剂、螯合剂、pH控制剂。附图说明图1是利用QPCR检测ATP8B3基因在肾癌组织中的表达情况图；图2是利用westernblot检测ATP8B3蛋白在肾癌组织中的表达情况图；图3是检测ATP8B3在细胞中的表达情况图；其中图A是利用QPCR检测ATP8B3mRNA在肾癌细胞中的表达情况图；图B是利用Westernblot检测ATP8B3蛋白在肾癌细胞中的表达情况图；图4是检测siRNA对肾癌细胞中ATP8B3表达的干扰效果图；其中图A是检测siRNA对细胞中ATP8B3mRNA的干扰效果图；图B是检测siRNA对细胞中ATP8B3蛋白的干扰效果图；图5是用MTT法检测ATP8B3基因对肾癌细胞增殖的影响图；图6是检测ATP8B3对肾癌细胞凋亡的影响图；图7是利用细胞划痕实验检测ATP8B3对肾癌细胞迁移的影响图；图8是利用Transwell小室检测ATP8B3对肾癌细胞侵袭的影响图。具体的实施方式本专利技术经过广泛而深入的研究，通过高通量测序方法，检测肾癌标本中基因在肿瘤组织和癌旁组织的表达，发现其中具有明显表达差异的基因，探讨其与肾癌的发生之间的关系，从而为肾癌的早期检测及靶向治疗寻找更好的途径和方法。通过筛选，本专利技术首次发现了肾癌中ATP8B3显著性上调。实验证明，通过降低ATP8B3的表达水平，能够有效地抑制肾癌细胞的生长、凋亡和侵袭，提示检测ATP8B3基因的表达水平可成为肾癌早期诊断的辅助诊断指标之一，干扰ATP8B3基因表达可成为预防或治疗肾癌或肾癌转移的新途径。ATP8B3基因ATP8B3是位于人19号染色体短臂1区3带上，本专利技术中的ATP8B3包括野生型、突变型或其片段。一种代表性的AT本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测ATP8B3表达水平的试剂在制备诊断肾癌的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测ATP8B3表达水平的试剂在制备诊断肾癌的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片技术检测ATP8B3表达水平用试剂。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括针对ATP8B3基因的引物和/或探针，或针对ATP8B3蛋白的抗体和/或配体。4.一种诊断肾癌的产品，其特征在于，所述产品包括检测样本中ATP8B3表达水平的芯片、制剂或试剂盒。5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，所述试剂盒包括至少一对特异性扩增ATP8B3基因的引物；优选的，所述引物具有SEQIDNO.1～2所示的序列。6.ATP8B3在筛选预防或治疗肾癌的候选化合物中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，筛选候选化合...

【专利技术属性】
技术研发人员：马翠，任静，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11