线粒体耳聋C1494T突变的荧光定量PCR检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种线粒体耳聋常见突变C1494T的荧光定量PCR检测试剂盒，包含定量PCR反应液、第一阳性对照品、第二阳性对照品、阴性对照品、说明书和盒体，其中定量PCR反应液含有PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、耐热DNA聚合酶、上游扩增引物、下游扩增引物、第一荧光探针和第二荧光探针。本发明专利技术提供的试剂盒，针对mtDNA第1494位点的C>T单碱基突变设计两条MGB探针，通过荧光定量PCR对耳聋相关性的线粒体第1555位核苷酸进行检测，明确该位点是否发生C>T突变，具有简便、快速、准确等优点，可应用于线粒体C1494T突变相关性耳聋的临床诊断和防治，也为C1494T突变导致的线粒体耳聋的预防和治疗提供依据。

Fluorescent quantitative PCR kit for detection of mitochondrial deafness C1494T mutation and its application

The invention provides a common mutation in mitochondrial deafness fluorescent quantitative PCR detecting kit C1494T, containing quantitative PCR reaction solution, the first positive control, second positive control, negative control, product specification and box body, wherein the quantitative PCR reaction liquid containing PCR buffer, MgCl2, dNTPs, DNA polymerase, upstream primer resistant first, the downstream primers, second fluorescent probes and fluorescent probes. The kit provided by the invention, the mtDNA 1494th locus C> T single nucleotide mutation design two MGB probes were detected by fluorescence quantitative PCR on mitochondrial deafness related nucleotide 1555th, clear the site is C> T mutation, has the features of simple, rapid and accurate, and can be applied to the mitochondrial C1494T mutation the clinical diagnosis and treatment related deafness, provide the basis for prevention and treatment of deafness caused by mutations of mitochondrial and C1494T.

【技术实现步骤摘要】
线粒体耳聋C1494T突变的荧光定量PCR检测试剂盒及其应用
本专利技术属分子生物学和基因工程
，具体涉及线粒体耳聋C1494T突变的荧光定量PCR检测试剂盒及其应用。
技术介绍
耳聋是全球关注的公共卫生问题，由遗传和环境因素共同作用引起，其中超过50％的耳聋患者由遗传因素导致。在遗传性耳聋中，30％为综合征耳聋，70％为非综合征耳聋。耳聋的遗传方式可表现常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传、X连锁遗传和母系遗传，线粒体DNA(mtDNA)突变是母系遗传性耳聋发生的重要原因之一，在遗传性耳聋中的发病率约为1％～2％。已有明确文献显示，位于mtDNA12SrRNA的C1494T突变与氨基糖苷类药物诱发的耳聋密切相关。由于人mtDNA12SrRNA的结构和序列与细菌的16SrRNA非常相似，第1494位点又位于mtDNA12SrRNA的高度保守区，当发生C1494T突变时，mtDNA12SrRNA的A区能形成新的1494U-A1555配对，导致12SrRNA与氨基糖苷类药物结合部位的空间增大，从而促进了氨基糖苷类抗生素与之结合，影响了线粒体核糖体蛋白质的合成和氧化磷酸化过程，最终因A本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种线粒体耳聋C1494T突变的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，由定量PCR反应液、第一阳性对照品、第二阳性对照品、阴性对照品、说明书和盒体组成，其中定量PCR反应液含有PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、耐热DNA聚合酶、上游扩增引物、下游扩增引物、第一荧光探针和第二荧光探针；上游扩增引物序列为：5’‑GCCCTGAAGCGCGTACAC‑3’下游扩增引物序列为：5’‑CCATGTTACGACTTGTCTCCTCTATATAA‑3’第一荧光探针序列为：5’‑FAM‑CCGTCACTCTCCT‑MGB‑3’第二荧光探针序列为：5’‑HEX‑CCGTCACCCTCCT‑MGB‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种线粒体耳聋C1494T突变的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，由定量PCR反应液、第一阳性对照品、第二阳性对照品、阴性对照品、说明书和盒体组成，其中定量PCR反应液含有PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、耐热DNA聚合酶、上游扩增引物、下游扩增引物、第一荧光探针和第二荧光探针；上游扩增引物序列为：5’-GCCCTGAAGCGCGTACAC-3’下游扩增引物序列为：5’-CCATGTTACGACTTGTCTCCTCTATATAA-3’第一荧光探针序列为：5’-FAM-CCGTCACTCTCCT-MGB-3’第二荧光探针序列为：5’-...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒强，尚世强，李伟，陶然，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33