含自噬抑制剂和薯蓣皂素的组合药物及其用途制造技术

本发明专利技术属医药、生物技术领域。涉及由一种或几种安全剂量的自噬抑制剂与薯蓣皂素组成组合药物及其用途。经体外干预实验显示：薯蓣皂素能够显著抑制肿瘤细胞的增殖并诱导肿瘤细胞凋亡，能诱导肿瘤细胞发生细胞自噬，实验结果表明，细胞自噬在薯蓣皂素杀伤肿瘤细胞中起到保护肿瘤细胞的作用，通过抑制细胞自噬能产生明显增强薯蓣皂素对肿瘤细胞的杀伤效果。本发明专利技术的组合药物通过联合或序贯使用方式用于治疗包括慢性髓系白血病、急性白血病、淋巴瘤、肝癌等肿瘤，能明显增强薯蓣皂素杀伤肿瘤细胞的能力，进一部可用于辅助治疗对伊马替尼耐药的肿瘤。采用本发明专利技术组合药物可以减少药物的用量，逆转肿瘤细胞的耐药性，降低对人体的毒副作用。

Combination medicine containing autophagy inhibitor and diosgenin and its use

The invention belongs to the field of medicine and biotechnology. Pharmaceutical composition comprising one or more safe doses of an inhibitor of autophagy and diosgenin and its use. As revealed by the experiments in vitro: diosgenin can significantly inhibit the proliferation of tumor cells and induce the apoptosis of tumor cells, can induce autophagy in tumor cells, the experimental results show that autophagy in diosgenin killing plays an important role in protecting tumor cells in tumor cells, which significantly enhance the killing effect of diosgenin on tumor cells by inhibiting cell autophagy can. The combination of the medicine of the invention by combined or sequential manner for the treatment of chronic myeloid leukemia, including acute leukemia, lymphoma, liver cancer, diosgenin can significantly enhance the capability of killing tumor cells, into a can be used for the adjuvant treatment of imatinib resistant tumors. By adopting the combined medicine of the invention, the dosage of the medicine can be reduced, the drug resistance of the tumor cells can be reversed, and the toxic and side effects on the human body can be reduced.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属医药、生物
涉及抗肿瘤增效药物，具体涉及一种含自噬抑制剂和薯蓣皂素的组合药物及其用途，尤其涉及该组合药物通过联合给药或序贯使用在制备治疗慢性髓系白血病、急性白血病、淋巴瘤、肝癌或辅助治疗伊马替尼耐药的药物中的用途。
技术介绍
现有技术公开了慢性粒细胞白血病，简称CML，是一种特定基因异常导致的骨髓癌症，也是临床最常见的一种白血病。伊马替尼(格列卫)是一种高效抗癌药品，其革命性地改变了对慢性粒细胞白血病患者的治疗过程。然而，尽管最初疗效很成功，但实践显示慢性粒细胞白血病患者最终常产生对伊马替尼的抗药性，因此，使得近年来不断发展的治疗肿瘤的辅助药物有了巨大的临床和市场需求。研究报道了薯蓣皂素(化学结构如式Ⅰ所示)是产生甾体激素类药物的重要基础原料，其本身具有很强的抗肿瘤、抗感染、抗过敏、抗病毒和抗休克的药理作用，是临床治疗肿瘤、风湿、心血管、淋巴白血病、细胞性脑炎、皮肤病、抢救危重病人的重要用药。有研究发现，薯蓣皂素具有诱导细胞分化、凋亡的作用，其抗瘤谱广泛，能够抑制多达60种人恶性肿瘤细胞的生长，尤其对白血病、肠癌和前列腺癌细胞尤为敏感，研究还显示薯蓣皂素抑制癌细胞增殖具有时间、剂量的依赖性，使其成为目前化疗的重要药物，被医药界称为“药用黄金”。[Liu,M.J.,etal.(2005).CancerChemotherPharmacol55(1):79-90；Wang,L.,etal.(2013).JNatProd76(5):909-914.]。细胞自噬(autophagy)又称Ⅱ型程序性死亡(typeⅡprogrammedcelldeath)，是真核生物体内常见的“自我消化”(cellulardegradation)的现象，能分解细胞内受损或多余的细胞器和蛋白产生核苷酸，氨基酸等小分子物质供细胞合成新的蛋白质，并能维持细胞内微环境的稳定。近年来随着分子生物学及基因技术的发展和对细胞自噬的深入认识，发现其与多种疾病，尤其是肿瘤的发展关系密切。自噬的主要功能包括：自噬能对细胞对外部环境改变及各种刺激产生应激反应。细胞在生长条件下能发生较低水平的自噬，称基础自噬。然而，一旦受到外界的刺激，如饥饿、缺氧、高温、高细胞密度或是生长因子剥夺等，细胞自噬的水平将会迅速上调。如在营养物质缺乏的情况下，细胞自噬能分解体内坏死细胞器产生氨基酸等供细胞合成新的蛋白质，维持细胞的存活。然而，作为程序性细胞死亡的一种，细胞自噬能通过多种途径直接或是间接导致细胞死亡。这种杀伤可能是通过诱导细胞凋亡、坏死、衰老等机制发生，也可能是使细胞直接发生自噬性死亡。细胞自噬在肿瘤的发生过程中的作用尚不明确，因此在肿瘤治疗中的作用也较复杂，它是一把“双刃剑”，既有可能抑制肿瘤细胞的生长，又有可能促进肿瘤细胞的增值。研究发现细胞自噬能在氨基酸缺乏、缺氧、药物等逆条件下为肿瘤细胞提供必要的营养成分，维持肿瘤细胞的存活。研究发现，曲拓珠和西妥昔等单克隆抗体类药物可诱导肿瘤细胞产生细胞自噬保护肿瘤细胞免于药物杀伤；5氟尿嘧啶作用于肝癌细胞可诱导细胞自噬；白藜芦醇作用于神经胶质瘤细胞可诱导细胞自噬的产生，抑制细胞自噬可增强上述化疗药物对肿瘤细胞的杀伤效果。而三氧化二砷作用于恶性神经胶质瘤细胞可引起肿瘤细胞发生自噬性死亡。这说明不同药物作用于不同肿瘤细胞诱导的细胞自噬不同；近年来研究表明自噬与肿瘤细胞的耐药性产生有密切关系；因此，探究药物作用于肿瘤细胞引发的细胞自噬的作用及调控机制，对肿瘤的治疗具有重要意义。经文献检索等，到目前为止，尚未见有关细胞自噬抑制剂与薯蓣皂素制成组合药物及用于治疗肿瘤的的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于公开一种新的治疗肿瘤的组合药物，具体涉及一种含自噬抑制剂和薯蓣皂素的组合药物及其用途，尤其涉及该组合药物通过联合给药或序贯使用在制备治疗慢性髓系白血病、急性白血病、淋巴瘤、肝癌或辅助治疗伊马替尼耐药的肿瘤药物中的用途。本专利技术公开的一种新的治疗肿瘤的组合药物，其由一种或多种安全剂量的细胞自噬抑制剂和式Ⅰ结构的薯蓣皂素组成，其特点在于，自身无明显细胞毒性或对肿瘤有辅助杀伤作用但能通过抑制细胞自噬来增强薯蓣皂素对肿瘤细胞的杀伤作用，增强其疗效。本专利技术中，细胞自噬抑制剂选自3-甲基腺嘌呤(3-MA)、氯喹(Chloroquine)、LY294002或巴伐洛霉素A1；其中优选氯喹(Chloroquine)。本专利技术中，薯蓣皂素(化学结构如式Ⅰ所示)可以是薯蓣皂素本身，也可以是薯蓣皂素的衍生物，其中优选薯蓣皂素；本专利技术中，所述的组合药物可用于治疗的肿瘤包括但不限于慢性髓系白血病、急性白血病、淋巴瘤或肝癌，本专利技术的一个实施例中尤其是用于治疗慢性髓系白血病；本专利技术的另一实施例中还用于辅助治疗伊马替尼耐药的肿瘤；本专利技术提供的治疗肿瘤的组合药物，可以通过薯蓣皂素显著抑制肿瘤细胞的增殖并诱导肿瘤细胞凋亡，以及诱导肿瘤细胞发生细胞自噬，在薯蓣皂素杀伤肿瘤细胞中细胞自噬起到保护肿瘤细胞的作用，使抑制细胞自噬明达到显增强薯蓣皂素对肿瘤细胞的杀伤的效果。本专利技术进行了体外干预实验：选取四株慢性髓系白血病细胞K562、BaF3-WT、BaF3-Y253F、BaF3-T315I，其中BaF3-Y253F、BaF3-T315I为伊马替尼耐药肿瘤细胞，设置不同浓度梯度和时间梯度给予薯蓣皂素诱导肿瘤细胞，MTT法测细胞活性，结果显示，薯蓣皂素能够显著抑制肿瘤细胞的增殖并诱导肿瘤细胞凋亡，20μM的薯蓣皂素对肿瘤细胞作用48h的抑制率达到80％-90％左右；然后激光共聚焦显微镜下观察经薯蓣皂素作用48h的肿瘤细胞，Cyto-ID染色后，显示肿瘤细胞的自噬囊泡数量明显高于对照组，表明薯蓣皂素能诱导肿瘤细胞发生细胞自噬；为了进一步证明上述结果，采用Western-blot法检测自噬标志性蛋白LC3II/LC3-I的表达水平，结果显示，经薯蓣皂素干预的细胞LC3-II/LC3-I比率上调，进而表明薯蓣皂素能够诱导肿瘤细胞发生细胞自噬；最后选用两种自噬抑制剂3-MA、氯喹抑制细胞自噬，MTT法、Western-blot检测细胞自噬在薯蓣皂素杀伤肿瘤细胞中的作用，结果表明，细胞自噬在薯蓣皂素杀伤肿瘤细胞中起到保护肿瘤细胞的作用，通过抑制细胞自噬能产生明显增强薯蓣皂素对肿瘤细胞的杀伤效果。本专利技术的由一种或几种安全剂量的自噬抑制剂与薯蓣皂素组成组合药物，通过联合或序贯使用方式用于治疗肿瘤，能明显增强薯蓣皂素杀伤肿瘤细胞的能力，进一部可用于辅助治疗对伊马替尼耐药的肿瘤患者。采用本专利技术组合药物可以减少药物的用量，逆转肿瘤细胞的耐药性，降低对人体的毒副作用。本专利技术的由一种或几种安全剂量的自噬抑制剂与薯蓣皂素组成组合药物可进一步制成复方药物用于治疗慢性髓系白血病、急性白血病、淋巴瘤、肝癌等肿瘤患者。附图说明图1显示了不同浓度薯蓣皂素作用48h后细胞活力。图2显示了20μM薯蓣皂素作用不同时间后细胞活力。图3显示了激光共聚焦显微镜下的薯蓣皂素诱导肿瘤细胞K562、BaF本文档来自技高网...

【技术保护点】
含自噬抑制剂和薯蓣皂素的组合药物，其特征在于，所述的组合药物由一种或多种安全剂量的细胞自噬抑制剂和式I结构的薯蓣皂素组成，

【技术特征摘要】
1.含自噬抑制剂和薯蓣皂素的组合药物，其特征在于，所述的组合药物由
一种或多种安全剂量的细胞自噬抑制剂和式I结构的薯蓣皂素组成，
2.按权利要求1所述的含自噬抑制剂和薯蓣皂素的组合药物，其特征在于，
所述的细胞自噬抑制剂选自3-甲基腺嘌呤(3-MA)、氯喹(Chloroquine)、
LY294002或巴伐洛霉素A1。
3.按权利要求1所述的含自噬抑制剂和薯蓣皂素的组合药物，其特征在于，
所述的细胞自噬抑制剂是氯喹(Chloroquine)。
4.按权利要求1所述的含自噬抑制剂和薯蓣皂素的组合药物，其特征在于，
所述的薯蓣皂素是薯蓣皂素或薯蓣...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶丽，姜珊珊，冯美卿，鞠佃文，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31