一种细胞制剂及其制备方法和应用技术

本申请属于生物学技术领域，具体涉及一种细胞制剂及其制备方法和应用。本申请提供了一种细胞制剂，包括Treg细胞、IL‑4、丹参提取物和医学上可接受的溶剂，其中，所述Treg细胞的浓度为5×10

Cell preparation and its preparation method and Application

The invention belongs to the field of biological technology, in particular relates to a cell preparation, its preparation method and application. The invention provides a cell preparation, including Treg cells, IL 4, Danshen Extract and pharmaceutically acceptable solvent, the concentration of the Treg cells is 5 * 10

【技术实现步骤摘要】
一种细胞制剂及其制备方法和应用
本专利技术属于生物学
，具体涉及一种细胞制剂及其制备方法和应用。
技术介绍
湿疹是常见的变态反应性皮肤病，有剧烈瘙痒、多形性皮疹、渗出倾向的特点，较为难治，缠绵不愈。由于皮肤损容，瘙痒剧烈，患者的心理、穿衣、社交娱乐、工作学习及治疗等方面造成了不同程度的影响，严重影响患者的生活质量。目前的湿疹治疗药物包括糖皮质激素制剂、抗组胺药和免疫抑制剂。其中，糖皮质激素制剂是治疗湿疹的主要药物，糖皮质激素制剂能有效缓解症状，但湿疹本身容易反复发作，长期使用糖皮质激素会导致皮肤萎缩，毛细血管扩张，色素沉着，有时出现继发感染；抗组胺药是最常用的系统治疗药物，用于抗炎止痒，其作用机理为阻断组胺与H1受体结合，对抗组胺引起毛细血管通透性增加，抑制炎症反应，抗组胺药作用时间短，中枢活性强，引起明显的镇静作用，不适用于驾车、高空作业患者；免疫抑制剂可用于重度湿疹，但副作用大，临床很少使用。现有药物的主要目的在于缓解湿疹症状，而对导致湿疹的免疫系统动态失衡无任何实质性影响。Th1/Th2细胞的动态平衡失调在湿疹起重要作用。湿疹发病过程中Th2细胞起优势，Th2细胞分泌IL-17上升，IL-17诱导IgE的生成和嗜酸性粒细胞的活化，引起超敏反应。Treg细胞具有免疫应答低下和免疫抑止两大特征，通过抑制Th2细胞的优势，维持Th1/Th2细胞的动态平衡，从而维持自身耐受、自身稳定，抑制湿疹的进一步发展。Treg细胞作为免疫调节剂，已经广泛应用于免疫失调疾病的治疗，如系统性红斑狼疮和类风湿关节炎等，但目前尚无采用Treg细胞直接回输至皮肤，用于湿疹治疗方面的应用。
技术实现思路
为了解决现有技术中治疗药物治疗效果不彻底和副作用较大这一技术问题，本专利技术实施例提供一种细胞制剂及其制备方法。本专利技术提供了一种细胞制剂，包括Treg细胞、IL-4、丹参提取物和医学上可接受的溶剂；所述Treg细胞的浓度为5×106～1×107个/mL；所述IL-4的浓度为5～20ng/mL；所述丹参提取物的浓度为1～5mg/mL，所述丹参提取物为乙醇提取物。其中，Treg细胞失去其正常功能是湿疹发病的重要环节之一，输入Treg细胞能够抑制Th2细胞的活性，维持Th1/Th2细胞的动态平衡，从而抑制湿疹的进一步发展；在湿疹的形成过程中，IL-17作为早期细胞因子诱导免疫细胞释放促炎症因子，IL-17升高加强了皮肤屏障受损。目前认为IL-4能调节Th1和Th2细胞分化，从而抑制Th17细胞的成熟，减少IL-17的表达。因此，IL-4是一个治疗湿疹的靶点。湿疹患者丝聚蛋白表达减少，引起皮肤保湿功能、弹性以及机械性能下降，增加机体对半抗原敏感性，各种变应原和微生物则可通过皮肤屏障进入体内，诱发免疫反应。丹参提取物可以促进丝聚合蛋白的合成并且促进丝聚合蛋白的分解代谢成保湿因子，也可以提高表皮细胞分化的活性和增强皮肤水合作用，从而具有加强皮肤屏障功能和防止干燥等功能。优选地，所述Treg细胞的浓度为5×106个/mL；所述IL-4的浓度为20ng/mL；所述丹参提取物的浓度为2mg/mL。优选地，所述Treg细胞的浓度为1×107个/mL；所述IL-4的浓度为5ng/mL；所述丹参提取物的浓度为5mg/mL。优选地，所述Treg细胞的浓度为8×106个/mL；所述IL-4的浓度为10ng/mL；所述丹参提取物的浓度为5mg/mL。。优选地，所述溶剂为注射用生理盐水或5％葡萄糖注射液。优选地，所述细胞制剂的保存条件为0～4℃。本专利技术还提供了上述细胞制剂的制备方法，将所述IL-4、丹参提取物和溶剂混合，得到混合液；将所述混合液重悬所述Treg细胞，得到所述细胞制剂。本专利技术还提供了前述细胞制剂或上述制备方法得到的细胞制剂在制备预防或治疗皮肤湿疹药物中的应用。本专利技术的有益效果在于：(1)选用了Treg细胞作为皮肤湿疹的治疗细胞，其安全性高、治疗效果显著。此外，无需对机体进行穿刺等手术，大大的降低了对机体的创伤；(2)选用体外扩增Treg细胞，状态优良，增长速度快，可在短时间内提供数量充足的Treg细胞，保证了多次治疗所需；(3)制剂中首次添加IL-4和丹参提取物，通过协同作用提高Treg细胞免疫抑制的功效，促进皮肤自我修复。具体实施方式为了解决现有技术中治疗药物治疗效果不彻底和副作用较大这一技术问题，本专利技术实施例提供一种细胞制剂及其制备方法。下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例11.分离、培养Treg细胞和体外扩增本专利技术中Treg细胞的分离、培养以及体外扩增参考以下文献中所提及的第三组扩增培养方法：郝俊.雷帕霉素对人CD4+CD25+调节性T细胞体外扩增的影响[M]，华东师范大学，2012年硕士论文。2.收集Treg细胞(1)收集体外培养的Treg细胞，800g离心5min，弃上清；(2)用20mL的生理盐水重悬Treg细胞，800g离心5min，弃清液，如此重复3次，得到纯净Treg细胞。3.本专利技术所述的细胞制剂的制备(1)按照的IL-4(5ng/mL，购自上海沪鼎生物科技有限公司)和丹参提取物(5mg/mL，购自东莞市巴科医药科技有限公司)的浓度溶解于10mL生理盐水中，混匀；(2)用含IL-4和丹参提取物的生理盐水溶液重悬收集的Treg细胞，使其细胞浓度为1×107个/mL，混匀即得到本专利技术所述的细胞制剂。该细胞制剂于0～4℃保存或运输。实施例2(1)造模选取60只豚鼠，雌雄各半，体重相近，健康状态良好.。将豚鼠随机分为5组，每组12只，背部两侧去毛，其中一组为空白组，不涂任何东西，其余4组为模型组，外涂7％DNCB(2,4-二硝基氯苯)及丙酮溶液致敏，2周后剃毛处外涂1％DNCB诱导剂丙酮溶液激发，每周一次，连续4周，皮肤出现湿疹即造模成功。(2)给药按照表1所述的Treg细胞、IL-4和丹参提取物成分浓度配制细胞制剂，并分别对应4组模型组给药，给药方式为，对空白组和模型组的剃毛皮肤和湿疹皮肤处进行皮肤内真皮层分散点打，9cm2的注射总体积为1mL，每周回注1次，连续4周，观察疗效。表1(3)指标检测给药4周后按照下述判定标准评价不同实验组大鼠湿疹情况：(1)临床痊愈：皮损全部消退，症状消失，中医证候积分下降>95％；(2)显效：皮损大部分消退，症状明显减轻，中医证候积分下降>70％，<95％；(3)有效：皮损部分消退，症状有所改善，中医证侯积分下降>30％，<70％；(4)无效：皮损消退不明显，症状未见减轻或反见恶化，中医证候积分下降<30％。以总体有效率指标评价不同配比的细胞制剂对湿疹的治疗效果：总有效率＝(痊愈例数+显效例数+有效例数)/总例数×100％。(4)实验结果空白组和不同实验组的湿疹大鼠治疗情况和总体有效率如表2所示，空白组的总有效率为100.0％，实验组1的总有效率为41.67％，通过X2统计分析，具有极显著差异，P<0.01。而实验组2～4的总有效率本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞制剂，包括：Treg细胞、IL‑4、丹参提取物和医学上可接受的溶剂；所述Treg细胞的浓度为5×10

【技术特征摘要】
1.一种细胞制剂，包括：Treg细胞、IL-4、丹参提取物和医学上可接受的溶剂；所述Treg细胞的浓度为5×106～1×107个/mL；所述IL-4的浓度为5～20ng/mL；所述丹参提取物的浓度为1～5mg/mL。2.根据权利要求1所述的细胞制剂，其特征在于，所述Treg细胞的浓度为5×106个/mL；所述IL-4的浓度为20ng/mL；所述丹参提取物的浓度为2mg/mL。3.根据权利要求1所述的细胞制剂，其特征在于，所述Treg细胞的浓度为1×107个/mL；所述IL-4的浓度为5ng/mL；所述丹参提取物的浓度为5mg/mL。4.根据权利要求1所述的细胞制剂，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：马颖，郑皓钧，
申请(专利权)人：广东颜值科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44