本发明专利技术涉及微生物领域，具体地，本发明专利技术涉及一种产酸屎肠球菌、抑菌微生态制剂及其应用。本发明专利技术使用的乳酸菌是从动物肠道中筛选到的高产酸屎肠球菌，保存编号为CGMCC No.9666。本发明专利技术提供了一种以此屎肠球菌结合枯草芽孢杆菌产生的细菌素进行生产高效抑菌微生态制剂的方法。屎肠球菌在动物肠道内快速增殖，产生有机酸，降低动物肠道pH值。本发明专利技术中使用到的细菌素在低pH值环境中抑菌效果显著提升，对肠道内有害菌产生抑制杀灭作用，进而促进屎肠球菌等有益菌在动物肠道内的定植。本发明专利技术提供的高效抑菌的微生态制剂将枯草芽孢杆菌所产生的细菌素与屎肠球菌有机的结合在一起，协同发挥抑菌作用，增强机体免疫力，促进养殖动物的生产性能，应用前景广阔。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及微生物领域，具体地，本专利技术设及一种产酸尿肠球菌、抑菌微生态制剂 及其应用。
技术介绍
随着我国农业养殖结构调整，规模化、集团化养殖已成为发展趋势，养殖户为了追 求经济效益最大化，在饲料中添加饲用抗生素、激素及益生菌制剂等，W达到促进动物增重 和快速生长的目的。但是添加促生长饲用抗生素等药物会使致病菌的耐药性越来越普遍、 耐药谱越来越广，由此引起动物疫病越来越难W控制，形成恶性循环，不但影响畜牧养殖业 的可持续发展，还会造成畜禽类产品中残留抗生素和激素的严重超标，直接影响到人类的 身体健康。 细菌素是由某些细菌通过基因编码、核糖体合成的具有抑菌生物活性的蛋白或肤 类。细菌素与抗生素在生物合成、作用机制、抑菌谱等方面明显不同，细菌素可W安全、有效 地使用已达到控制目标病原微生物生长的目的。乳酸菌为人类和动物肠道主要菌群，在动 物肠道内可W分泌出乳酸，降低动物肠道的抑值，常用于人和动物益生菌产品。 枯草芽抱杆菌不是肠道的常住菌，只属于过路菌，不会在肠道内长期定植与生长， 它会随着食物进入胃肠道，最终又与粪便一起排出体外。若直接添加由枯草芽抱杆菌，由于 其在动物肠道内停留时间短，其代谢产物--细菌素还未合成或合成量较少，无法充分发挥 抑菌作用。 本专利技术将枯草芽抱杆菌在体外进行大规模发酵生产细菌素，并将其与乳酸菌进行 协同组合，制备出高效抑菌的微生态制剂。该微生态制剂进入动物胃肠道后可快速发挥抑 菌作用，有效调节胃肠道的微生态平衡，维护动物健康。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种产酸尿肠球菌及其抑菌微生态制剂，其具有高效抑菌 的能力。 本专利技术的另一目的提供上述产酸尿肠球菌及其抑菌微生态制剂的应用。 本专利技术提供的产酸尿肠球菌CE001巧nterococ州S faecium)，其菌种保藏编号为： CGMCCNO. 9666。本专利技术的尿肠球菌，具有良好的产酸性能。 本专利技术的抑菌微生态制剂，包括枯草芽抱杆菌所产细菌素和本专利技术上述的产酸尿 肠球菌；所述细菌素与尿肠球菌的比例为Ig细菌素比2~5亿尿肠球菌活菌数。 本专利技术所使用的枯草芽抱杆菌可W是现有的细菌素的任意菌株，尤其优选的， 本专利技术所述枯草芽抱杆菌选用购自中国农业微生物菌种保藏管理中屯、，其保藏号为ACCC 10619的菌株。 本专利技术的上述抑菌微生态制剂的制备方法，包括W下步骤： 1)将制备的枯草芽抱杆菌所产细菌素按比例加入到发酵后期的尿肠球菌发酵液 中，揽拌混合均匀； 2)将混合后的发酵液固液分离获得菌泥，在菌泥中加入干燥保护剂，所述菌泥与 干燥保护剂的质量体积比（g/L)为5%~25%，采用制粒、冻干或喷雾干燥制成抑菌微生态 制剂。 进一步地，根据本专利技术的制备方法，所述细菌素的制备包括W下步骤： 1)将枯草芽抱杆菌菌株接种到发酵用培养液中，在37~39°C条件下，培养48~ 50h，得到发酵液； 2)将发酵液经5000~1200化/m离屯、5-30min中取上清液，在上清液中缓慢加入 硫酸锭固体粉末进行盐析，边加边揽拌，直到饱和度达20~80%，然后在4~5°C条件下静 置4~化，再在2~10°C条件下、W5000~12000r/m转速离屯、10~30min，弃去上清液得 到细菌素。 本专利技术所述的枯草芽抱杆菌菌株发酵用培养液可W使用本领域公知的任意用于 枯草芽抱杆菌的培养液，优选地，所用培养液包含（重量比）：玉米粉0.5%~3. 5%、豆饼 粉1. 0 %~5. 0 %、鱼粉0. 01 %~0. 5 %、葡萄糖0. 2 %~2. 0 %、碳酸巧0. 5 %~5. 0 %、 硫酸锭0. 001 %~0. 2 %、憐酸氨二钟0. 001 %~0. 2 %、硫酸儀0. 001 %~0. 2 %、硫酸儘 0. 001%~0. 2%，纯净水 1 升，pH为 7. 0 ~7. 5。 所述的细菌素的活力单位可达17361. 68U/mg，可抑制多种革兰氏阴性和革兰氏阳 性病原菌。 根据本专利技术的制备方法，所述尿肠球菌发酵液的制备方法包括W下步骤： 1)在种子培养基中，35~45°C有氧或兼性条件下培养尿肠球菌18~24小时，成 为一级种子； 2)将一级种子液接种在种子罐中进行扩大培养，在35~45Γ有氧或兼性条件下 培养18~24小时，成为二级种子； 3)将获得的二级种子液接种在发酵罐中进行发酵培养，在30~45Γ有氧或兼性 条件下，采用定时或连续补料分批发酵方式培养18~36小时； 作为优选地，步骤1)和2)使用MRS培养基为种子培养基。 作为优选地，步骤3)发酵采用改良的MRS培养基，所述改良的MRS培养基是在每 升MRS培养基中加有大豆蛋白腺5~30g，葡萄糖1~lOg，酵母粉1~lOg，乙酸钢1~ 10邑，巧樣酸二胺0. 1~8g，TweenSOO. 1~5g，憐酸氨二钟0. 1~5g，硫酸儀0. 05~Ig，硫 酸车孟0. 001~0. 2g，碳酸巧1~30g，纯净水1升，调节抑值至5. 5~7. 5。本专利技术还提供了所述产酸尿肠球菌W及抑菌微生态制剂的应用，尤其是在抑菌和 饲料添加剂方面的应用。申请人研究发现枯草芽抱杆菌产生的细菌素在酸性条件下其抑菌能力会显著提 升。本专利技术将细菌素与高产乳酸的尿肠球菌有机配合，使其发挥协同作用。尿肠球菌产生 乳酸造成动物肠道内的酸性环境，细菌素在此酸性环境中抑菌能力大幅提升，杀灭病原菌， 反过来又能促进尿肠球菌在动物肠道内的定植，补充肠道正常菌群，提高免疫能力，减少在 畜禽养殖中抗生素的使用，促进畜牧业健康可持续发展。【附图说明】 图1是本专利技术的尿肠球菌巧nterococcus faecium)菌株在MRS琼脂培养基上形 成的菌落。 图2是本专利技术的细菌素抑菌活性检测的牛津杯平板示意图，其中甜表示高剂量样 品溶液，化表示低剂量样品溶液，BH表示高剂量标准溶液，化表示低剂量标准溶液。 图3是本专利技术细菌素在不同抑值条件下的抑菌活性比较（实施例3表6组别1)。 图4是本专利技术微生态制剂与单一细菌素、单一枯草芽抱杆菌W及枯草芽抱杆菌与 尿肠球菌的复合微生态制剂在相同浓度下的抑菌活性比较。 本专利技术的尿肠球菌CE001巧nterococ州S faecium)已于2014年9月16日保藏于 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中 国科学院微生物研究所，100101)，保藏编号为CGMCCNO. 9666。【具体实施方式】 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 下述实施例中所用的培养基如无特殊说明配方如下：MRS培养基： 蛋白腺lOg，牛肉粉5g，葡萄糖20g，吐溫80ml，憐酸氨二钟2g，乙酸钢5g，巧樣酸 Ξ氨2g，屯水硫酸儀0. 2g，一水硫酸儘0. 05g，酵母粉4g，用蒸馈水定容至1L。 MRS琼脂培养基： 阳03引 1LMRS培养基中加琼脂15邑。 实施例1尿肠球菌巧nterococcus faecium)的分离及鉴定( 一）尿肠球菌巧nterococcus faecium)的分离与纯化 1. 1菌株的分离培养 将健康鸡致死、解剖后，分别用无菌方法取小肠黏膜和肠内容物各本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种产酸屎肠球菌CE001(Enterococcus faecium)，其特征在于，所述屎肠球菌的菌种保藏编号为：CGMCC NO.9666。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李富伟，吴培均，骆骅，李兆勇，韩明渠，杨忠广，
申请(专利权)人：北京科为博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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