一种防治牛乳房炎的复合微生态制剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种防治奶牛乳房炎的复合微生态制剂及其应用，以贝莱斯芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌为活性成分复配而成。本发明专利技术中的贝莱斯芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌菌株对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌等病原菌有较强抑制作用，复合使用一方面可抑制养殖环境中病原微生物，改善饲养环境，另一方面可抑制病原微生物对奶牛的感染，有效防治奶牛乳房炎。有效防治奶牛乳房炎。有效防治奶牛乳房炎。

【技术实现步骤摘要】
一种防治牛乳房炎的复合微生态制剂及其应用


[0001]本专利技术涉及饲料
，具体地，本专利技术涉及一种防治牛乳房炎的复合微生 态制剂的制备及其应用方法。

技术介绍

[0002]乳房炎是奶牛饲养过程中最常见的乳腺疾病之一，可分成临床型乳房炎和隐性 乳房炎两大类型，通常是泌乳初期的奶牛和处于泌乳高峰期的高产奶牛易发。调查 研究表明，有5％
‑
10％奶牛发生临床型的乳房炎，不仅降低奶牛泌乳量，还会导致乳 区纤维化和小胳肿，升高牛乳中纤溶酶的水平，导致乳蛋白如酪蛋白的蛋白水解增 加，引起牛奶和相关乳制品的质量显著降低，带来较大的经济损失。
[0003]奶牛乳房炎的发生是由病原微生物感染、奶牛自身及遗传因素、饲养管理因素 营养因素、环境因素等多种复杂因素综合作用的结果。其中，病原微生物感染是引 起奶牛乳房炎的最主要原因，病原微生物主要为细菌，如金黄色葡萄球菌、无乳链 球菌、大肠杆菌等，此外还有某些真菌和病毒。金黄色葡萄球菌是奶牛乳房炎的常 见病原体，可由乳头管侵入，再向乳腺组织内部蔓延，产生细胞黏附素、毒性胞溶 外蛋白和荚膜多糖等多种致病因子，造成急性乳房炎或慢性乳房炎，该菌的某些特 性如生物膜形成、胞内生存、荚膜表达等与奶牛乳房炎的发生有关。无乳链球菌是 传染性致病菌，具有高度传染性，主要引起奶牛乳腺隐性感染，在管理及防控措施 缺乏的情况下，无乳链球菌能在牛群中迅速扩散。大肠杆菌在乳房通过多种细胞因 子和趋化因子引起炎症和免疫防御反应，主要在宿主免疫受到抑制时的围产期和泌 乳早期引起大肠杆菌性奶牛乳房炎，症状不一，有的是轻微的、局部性的乳腺炎症， 有的则造成严重的乳腺炎症，甚至死亡。
[0004]世界各国的研究人员应用多学科的理论与方法，从不同角度对奶牛乳房炎的诊 断和防治做了深入的基础研究，但是由于致病因素是多方面的，同时这些因素之间 又有交互、协同作用，迄今仍无防治奶牛乳房炎的有效方法。目前，在防治奶牛乳 房炎时多采取多种综合措施，包括奶牛的抗病育种、营养调控、加强饲养管理、早 期检测与药物治疗等，抗生素治疗仍是防治奶牛乳房炎的主要方法。近年来，研究 人员在益生菌抑菌、调节肠道健康、改善养殖场微生态环境、提高动物免疫机能等 方面取得了许多成果，在疾病防治及提高生产性能等方面也获得了良好的效果。益 生菌可以通过竞争黏附位点或产生细菌素等具有抗菌活性的物质，抑制金黄色葡萄 球菌、无乳链球菌及大肠杆菌等病原微生物的增殖或直接将其杀死，调节养殖场环 境，维持动物健康，从而降低奶牛乳房炎的发生。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于，提供一种由贝莱斯芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌组成的复合微 生态制剂。该贝莱斯芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌菌株对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌 和大肠杆菌等病原菌有较强抑制作用，复合使用一方面可抑制养殖环境中病原微生 物，改善饲养环境，另一方面可抑制病原微生物对奶牛的感染，有效防治奶牛乳房 炎。
0.5％
‑
1.0％，葡萄糖1.0％
‑
3.0％，柠檬酸二胺0.05％
‑
0.10％，磷酸氢二钾0.05％
‑
0.10％， 硫酸镁0.05％
‑
0.10％，硫酸锰0.05％
‑
0.10％，调节pH值6.0
‑
7.0。
[0028]将贝莱斯芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌混合，以沸石粉为载体，混合后贝莱斯芽孢 杆菌活菌数为5.0
×
109‑
1.0
×
10
10
CFU/g，凝结芽孢杆菌活菌数为5.0
×
109‑
1.0
×
10
10 CFU/g。
[0029]本专利技术还提供一种防治奶牛乳房炎的复合微生态制剂的应用方法，将复合微生 态制剂按照5
‑
10g/m2使用量撒到奶牛养殖环境或将复合生微生态制剂按50
‑
100g/头 加入到日粮中，可以抑制或杀灭金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌等病原菌， 改善饲养环境，防止病原微生物对奶牛的感染，有效防治奶牛乳房炎。
[0030]本专利技术的贝莱斯芽孢杆菌CA03001(Bacillus velezensis)已于2020年1月13日 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1 号院3号，中国科学院微生物研究所，100101)，保藏编号为CGMCC NO.19349。 凝结芽孢杆菌CA04121(Bacillus coagulans)已于2018年8月10日保藏于中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.16244。
附图说明
[0031]图1是不同菌株以金黄色葡萄球菌为病原指示菌的抑菌作用比较。
[0032]图2是不同菌株以无乳链球菌为病原指示菌的抑菌作用比较。
[0033]图3是不同菌株以大肠杆菌为病原指示菌的抑菌作用比较。
具体实施方式
[0034]下面结合附图和实施例进一步描述本专利技术的技术方案：
[0035]实施例1金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌拮抗菌种的筛选及鉴定 1 材料方法
[0036]1.1 试验材料
[0037]1.1.1 菌种
[0038]金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌购自中国工业微生物菌种保藏中心， 益生菌菌株由北京科为博生物技术研究院分离保藏。
[0039]1.1.2培 养基
[0040](1)LB培养基
[0041]胰蛋白胨10.0g，酵母浸粉5.0g，氯化钠10.0g，加蒸馏水至1000mL，pH7.0
±
0.1， 121℃，灭菌30min。
[0042]固体培养基：在液体培养基基础上添加1.6％琼脂粉。
[0043]1.2 试验方法
[0044]1.2.1 金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌拮抗菌株的筛选
[0045](1)病原指示菌菌种的活化
[0046]将金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌菌种分别接种到LB液体培养基中， 在37℃、180rpm条件下振荡培养16h，备用。
[0047](2)益生菌培养物上清的制备
[0048]将益生菌菌种分别接种到LB液体培养基中，在37℃、180rpm条件下振荡培养 24h。
然后将培养液在3500rpm条件下离心10min，放入4℃冰箱备用。
[0049](3)病原指示菌平板的制备
[0050]移取约5mL的LB琼脂培养基，顺时针转动使培养基平铺平板底部，待凝固， 用无菌镊子在平板底部依次对称摆放4个牛津杯。将金黄色葡萄球菌、无乳链球菌 和大肠杆菌分别与已融化冷却至50℃的LB琼脂培养基按1:100比例混匀，分别移取 约15mL含菌培养基至对应摆有牛津杯的培养皿内，待冷却凝固后，用无菌镊子将 牛津杯剔除。
[0051](4)上本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种防治奶牛乳房炎的复合微生态制剂，其特征在于，所述复合微生态制剂由贝莱斯芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和载体组成；贝莱斯芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC NO.19349，凝结芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC NO.16244。2.根据权利要求1所述的一种防治奶牛乳房炎的复合微生态制剂，其特征在于，复合微生态制剂中贝莱斯芽孢杆菌活菌数为5.0
×
109‑
1.0
×
10
10
CFU/g，凝结芽孢杆菌活菌数为5.0
×
109‑
1.0
×
10
10
CFU/g。3.根据权利要求1所述的一种防治奶牛乳房炎的复合微生态制剂，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌的生产方法包括如下步骤：(1)将贝莱斯芽孢杆菌菌种接种于斜面培养基上，于30
‑
40℃下培养12
‑
24小时；(2)将斜面培养的贝莱斯芽孢杆菌接种于种子活化液体培养基中，500mL三角瓶装液量为100
‑
200mL，在30
‑
40℃、180
‑
220rpm的条件下培养12
‑
24小时；(3)将贝莱斯芽孢杆菌种子液以0.5
‑
2％重量比接种于种子罐中，500L种子罐装液量为100
‑
200L，在30
‑
40℃、180
‑
220rpm的条件下培养12
‑
24小时；(4)将种子罐培养液以0.5
‑
2％重量比接种于发酵罐中，罐压为0.01
‑
0.05MPa，搅拌转速为180
‑
220rpm，以体积比计，通风比为0.5
‑
1:0.1
‑
0.5，发酵时间为16
‑
24小时；(5)将贝莱斯芽孢杆菌发酵液通过干燥塔进行喷雾干燥，鼓风机进风温度140
‑
170℃；出口温度60
‑
80℃，干燥后通过60目振动筛。4.根据权利要求3所述的一种防治奶牛乳房炎的复合微生态制剂，其特征在于，步骤(1)中斜面培养基组成：胰蛋白胨5.0
‑
15.0g，牛肉浸粉1.0
‑
5.0g，氯化钠5.0
‑
10.0g，葡萄糖3.0
‑
8.0g，琼脂粉15
‑
20g，蒸馏水1000mL，pH为7.0
‑
7.5；步骤(2)中种子培养基为步骤(1)斜面培养基中去除琼脂粉；步骤(3)中种子罐培养基和步骤(4)中发酵培养基组成...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴培均，李富伟，韩明渠，
申请(专利权)人：北京科为博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：