【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程领域，具体地，本专利技术涉及一种耐高温碱性蛋白酶及其基因和应用。
技术介绍
1、蛋白酶是一种能够通过切割肽键实现蛋白质及肽链降解的水解酶，其发现及使用历史悠久，是全球用量最大的酶制剂之一。蛋白酶广泛分布于自然界中，几乎所有生物体内都有蛋白酶的存在。蛋白酶参与生物体内各种生理代谢过程，其在食物消化、溶血消炎、调节血压、细胞自溶及机体衰老调控方面发挥着重要作用。
2、目前主要根据蛋白酶最适作用ph将其分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶以及碱性蛋白酶三类。碱性蛋白酶的活性中心一般为丝氨酸，所以又称碱性丝氨酸蛋白酶。工业上应用较多的碱性蛋白酶主要来自于芽孢杆菌。碱性蛋白酶被广泛应用于洗涤、食品、纺织、制革等多个领域。在洗涤行业，碱性蛋白酶可用作洗涤用品的添加剂用于水解污渍中的蛋白质，能够起到降低清洗温度、减少漂洗次数，减少含磷化合物用量的作用；在食品行业，通过碱性蛋白酶水解的动植物蛋白用途广泛，可用于生产婴儿食品配料、功能性食物和饮品、及其他具有高营养价值的水解蛋白质食品；在纺织行业，碱性蛋白酶可用于熟丝的制备；在制革行业，碱性蛋白酶在皮革脱毛和软化工序中发挥着越来越重要的作用。
3、在实际工业应用中，对碱性蛋白酶往往也会提出更高的要求使其能够适应不同的使用场景，目前现有的碱性蛋白酶的酶活和热稳定性往往达不到上述要求，因此开发一种耐高温碱性蛋白酶具有重要意义。
4、公开号为cn116904428a的专利中公开了：一种改良高温碱性蛋白酶aprthc的稳定性的方法及突变体，对碱性蛋白酶apr
5、公开号为cn 110777136 a的专利中公开了：一种洗涤用的碱性蛋白酶突变体及其在液体洗涤剂中的应用。所述碱性蛋白酶突变体的亲本蛋白酶为枯草芽孢杆菌pb92的蛋白酶，所述碱性蛋白酶突变体至少包含以下氨基酸的置换：v262i。使其能更好的适用于工业领域，特别是洗涤剂行业。使碱性蛋白酶在碱性ph条件下以及耐热性方面的酶活有所提高，为其更好的适应工业化生产奠定了基础。但其耐热性能的提升有限。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种碱性蛋白酶突变体，它具有耐高温，较宽的ph稳定性等优点，相对于突变前性能更优。
2、具体地，本专利技术提供了一种耐高温碱性蛋白酶，即所述的碱性蛋白酶突变体。本专利技术中对其编号为耐高温碱性蛋白酶aplm，其由seq id no.1所示的氨基酸序列突变得到，突变位点包括s101p、g131a、k170r中的任一或多。
3、如本领域技术人员一般理解，所述的氨基酸取代的含义分别是第101位丝氨酸突变体为脯氨酸、第131位甘氨酸突变为丙氨酸、第170位赖氨酸突变为精氨酸。
4、本专利技术的突变前序列seq id no.1为来自地衣芽孢杆菌（ bacillus licheniformis）的碱性蛋白酶apl，该酶基因编码275个氨基酸，理论分子量为27.5 kda。
5、具体地，突变后的氨基酸序列（耐高温碱性蛋白酶aplm）如seq id no.2所示。
6、seq id no. 1：
7、maqtvpygiplikadkvqaqgfkganvkvavldtgiqashpdlnvvggasfvageayntdgnghgthvagtvaaldnttgvlgvapsvslyavkvlnssgsgsysgivsgiewattngmdvinmslggasgstamkqavdnayargvvvvaaagnsgssgntntigypakydsviavgavdsnsnrasfssvgaelevmapgagvystyptntyatlngtsmasphvagaaalilskhpnlsasqvrnrlsstatylgssfyygkglinveaaaq；
8、seq id no.2：
9、maqtvpygiplikadkvqaqgfkganvkvavldtgiqashpdlnvvggasfvageayntdgnghgthvagtvaaldnttgvlgvapsvslyavkvlnssgpgsysgivsgiewattngmdvinmslggasastamkqavdnayargvvvvaaagnsgssgntntigyparydsviavgavdsnsnrasfssvgaelevmapgagvystyptntyatlngtsmasphvagaaalilskhpnlsasqvrnrlsstatylgssfyygkglinveaaaq。
10、本专利技术还提供了前述耐高温碱性蛋白酶的相关基因工程产物，选自：
11、1、表达基因（基因）
12、2、表达载体（重组载体）；
13、3、基因工程细胞（重组菌株）。
14、具体地：
15、基于前述的氨基酸序列，本专利技术提供编码前述的耐高温碱性蛋白酶的基因。
16、基于密码子简并性原则，在知晓氨基酸序列的条件下，本领域技术人员可以设计出多种基因用于表达相应耐高温碱性蛋白酶。
17、作为优选，所述的基因可以包括如seq id no.3所示的核苷酸序列或与其具有80%以上同一性的核苷酸序列。
18、本专利技术通过基因合成方法合成了蛋白酶突变体基因 aplm，dna全序列分析结果表明，蛋白酶aplm基因 aplm全长828bp。
19、seq id no.3：
20、atggcgcaaactgtaccatacggtattccactcataaaagccgataaggtgcaggcacaaggatttaaaggggccaatgttaaggttgcagtacttgacacgggtatccaggcaagtcatccggacctcaatgtcgtgggcggggcttctttcgttgctggtgaggcatataataccgatggtaacgggcatgggacacacgtggcgggtacagtcgcggctctcgataacacgacaggggtcttaggcgttgcgcccagtgtatcactatacgcggttaaggtgttgaacagctcgggcccgggatcttattctgggattgtgagtggcatcgaatgggctactacgaacggaatggatgttataaacatgtcgttgggtggcgcctcagcatctacggctatgaagcaggcggtagacaacgcatacgcccggggagttgtcgttgtggctgcggccggca本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种耐高温碱性蛋白酶，其特征在于，为耐高温碱性蛋白酶APLM，其由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列突变得到，突变位点包括S101P、G131A、K170R中的任一或多。
2.编码权利要求1所述的耐高温碱性蛋白酶的基因。
3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO.3具有80%以上同一性的核苷酸序列。
4.包含权利要求2-3任一项所述基因的重组载体。
5.包含权利要求2-3任一项所述基因的基因工程细胞。
6.权利要求1所述的耐高温碱性蛋白酶的制备方法，其特征在于，包括通过基因工程进行表达。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.权利要求1所述的耐高温碱性蛋白酶在蛋白质及肽链降解中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，用于洗涤、食品制备或制革。
10.包括权利要求1所述的耐高温碱性蛋白酶的酶制剂。
【技术特征摘要】
1.一种耐高温碱性蛋白酶，其特征在于，为耐高温碱性蛋白酶aplm，其由seq id no.1所示的氨基酸序列突变得到，突变位点包括s101p、g131a、k170r中的任一或多。
2.编码权利要求1所述的耐高温碱性蛋白酶的基因。
3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，包括如seq id no.3所示的核苷酸序列或与seq id no.3具有80%以上同一性的核苷酸序列。
4.包含权利要求2-3任一项所述基因的重组载体。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴培均，门佳轩，罗建杰，李富伟，
申请(专利权)人：北京科为博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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