一种人成纤维细胞的培养组合物制造技术

本发明专利技术属于细胞培养领域，尤其涉及一种人成纤维细胞的培养组合物。本发明专利技术提供一种人成纤维细胞的培养组合物，包括：人成纤维细胞培养基和脐血浆5％～15％。实验结果表明，本发明专利技术培养组合物能够极大的促进人成纤维细胞的增殖，纯化人成纤维细胞，保证人成纤维细胞的表型。

A culture composition for human fibroblasts

The invention belongs to the field of cell culture, in particular to a culture composition of human fibroblasts. The invention provides a culture composition of human fibroblast, which comprises a human fibroblast culture medium and a umbilical cord plasma of 5%-15%. The experimental results show that the culture composition of the invention can greatly promote the proliferation of human fibroblasts, purify human fibroblasts and ensure the phenotype of human fibroblasts.

【技术实现步骤摘要】
一种人成纤维细胞的培养组合物
本专利技术属于细胞培养领域，尤其涉及一种人成纤维细胞的培养组合物。本申请要求2018年1月23日提交的中国专利(专利申请号为201810078781.4)的权益，在此将上述申请的全部内容引用并入本文。
技术介绍
成纤维细胞(fibroblast)，也称为纤维母细胞，是真皮组织的主要组成成分，属于终末分化细胞。成纤维细胞生产胶原蛋白等蛋白质，在构建皮肤和组织创伤修复中发挥着重要作用。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，细胞呈梭形或扁的星状，具有突起。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞和细胞核较大，轮廓清楚，核仁大而明显，细胞质弱嗜碱性，具有明显的蛋白质合成和分泌活动，可与纤维细胞互相转化。不同类型的结缔组织含成纤维细胞的数量不同。通常，疏松结缔组织中成纤维细胞的数量比同样体积的致密结缔组织中所含成纤维细胞的数量要少，故分离培养成纤维细胞多以真皮等致密结缔组织为取材部位。对于成纤维细胞的获取，主要有两种原代分离方法，即酶消化法和组织块贴壁法。酶消化法使用胰蛋白酶或胶原酶对用含双抗PBS漂洗干净并剪碎的皮肤组织进行消化，分离细胞，过200筛，离心、重悬、对细胞密度计数并接种培养。组织块贴壁法分别用含双抗的PBS和75％乙醇漂洗干净皮肤组织，眼科剪把皮肤组织剪碎成1mm3组织块，用培养基接种于6孔板中进行培养。目前，成纤维细胞的培养组合物已经在含血清的培养基(通常5-20％血清)中获得，但成纤维细胞的增殖速率不高。
技术实现思路
本专利技术提供了一种人成纤维细胞的培养组合物，用于解决现有培养组合物培养人成纤维细胞增殖率不高的问题。本专利技术的具体技术方案如下：一种人成纤维细胞的培养组合物，包括：人成纤维细胞培养基和脐血浆5％～15％。脐血浆单个核细胞中除了含有大量造血干细胞和造血祖细胞，脐血浆中还含有蛋白质、多种激素、免疫球蛋白以及丰富的细胞因子，如粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF，granulocyte-macrophagecolonystimulatingfactor)、白介素3(IL-3，interleukin-3)、白介素6(IL-6，interleukin-6)、促红细胞生成素(EPO，erythropoietin)、血小板生成素(TPO，thrombopoietin)等，可促进体外细胞增殖生长。优选的，包括：人成纤维细胞培养基和脐血浆5％～10％。进一步的，还包括：干细胞条件培养基5～15％。优选的，包括：人成纤维细胞培养基、脐血浆5％～10％和干细胞条件培养基5～15％。优选的，包括：人成纤维细胞培养基、脐血浆5％～15％和干细胞条件培养基5～10％。优选的，包括：人成纤维细胞培养基、脐血浆5％～10％和干细胞条件培养基5～10％。本专利技术还提供一种人成纤维细胞的培养组合物，包括：人成纤维细胞培养基和干细胞条件培养基5～15％。优选的，包括：人成纤维细胞培养基和干细胞条件培养基5％～10％。优选的，所述干细胞条件培养基为脂肪干细胞条件培养基。各类型成体间充质干细胞中，脂肪干细胞(ADSCs，adipose-derivedstemcells)能分泌多种细胞因子，包括血管内皮生长因子(VEGF，vascularendothelialgrowthfactor)、胎盘生长因子(PGF，placentalgrowthfactor)、成纤维细胞生长因子(FGF，fibroblastgrowthfactor)、血小板源生长因子(PDGF，plateletderivedgrowthfactor)、转化生长因子(TGF-β，transforminggrowthfactor-β)、肝细胞生长因子(HGF，hepatocytegrowthfactor)等在内的各种生长因子，这些生长因子可参与多种细胞反应，促进细胞生长，收集条件培养基能够获得这些活性成分。本专利技术还提供上述技术方案所述人成纤维细胞的培养组合物在制备人成纤维细胞中的应用。综上所述，本专利技术提供了一种人成纤维细胞的培养组合物，包括：人成纤维细胞培养基和脐血浆5％～15％。实验结果表明，本专利技术培养组合物能够极大的促进人成纤维细胞的增殖，纯化细胞，保证人成纤维细胞的表型。具体实施方式本专利技术提供了一种人成纤维细胞的培养组合物，用于解决现有培养组合物培养人成纤维细胞增殖率不高的问题。下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1对人皮肤成纤维细胞进行原代分离和传代。取5～6岁儿童的包皮手术下包皮组织，用含2×双抗的PBS清洗皮肤3次，4℃保存于含有1×青-链霉素的DMEM保存液中，24h内把皮肤转至50mL离心管中，按照皮肤面积加入0.1％～0.25％胰蛋白酶(7mL/cm2)，放置4～6h后将胰蛋白酶消化液过200目细胞网筛，去除无法消化的组织和杂质，1000rpm低速离心5min，去除上清，倒入适量的含1％双抗的PBS，去除残留的胰蛋白酶，1000rpm低速离心5min，去除上清。得到离心后的细胞，加入DMEM+10％FBS培养基，根据(1～10)×105/mL的密度，重悬细胞。将细胞悬液均匀接种至9cm细胞培养皿中，放至37℃、5％CO2培养箱中进行培养。每个细胞培养皿底层汇合度至80％，去除培养皿上的上清培养液，加入胰蛋白酶，消化5～10min，每1ml消化液加入含10％FBS的PBS中止消化，加入DMEM+10％FBS培养基，以1×105/mL的密度接种至新的培养皿中，置于37％℃，含5％CO2培养箱中传代培养。实施例2收集实施例1中P1代的细胞，对应下列不同实验组，使用不同培养组合物来培养，细胞接种密度为1×106/mL，培养5天。其中，OriCellTM人成纤维细胞培养基的货号为HXXFB-90011。表1不同组别的培养组合物组别培养组合物对照组1OriCellTM人成纤维细胞培养基实验组1OriCellTM人成纤维细胞培养基+5～10％脐血浆实验组2OriCellTM人成纤维细胞培养基+5～10％脂肪干细胞条件培养基实验组3OriCellTM人成纤维细胞培养基+5％脐血浆+10％脂肪干细胞条件培养基实验组4OriCellTM人成纤维细胞培养基+10％脐血浆+5％脂肪干细胞条件培养基实验组5OriCellTM人成纤维细胞培养基+10％脐血浆+10％脂肪干细胞条件培养基实验组6OriCellTM人成纤维细胞培养基+15％脐血浆+15％脂肪干细胞条件培养基实施例3采用CCK-8法检测实施例2不同培养组合物培养的成纤维细胞的增殖活力。收集实施例2中对照组1和实验组1-实验组6的成纤维细胞，接种细胞于96孔板中，2000个/孔，分别检测接种后4h、12h、24h、48h的细胞活性，每个时间检测点设置三个重复样品孔，在待检测孔中加入10μLCCK-8，于37℃、5％CO2培养2h。用酶标仪测检测450nm处的吸光值，实验结果如表2所示。从表2可知，成纤维细胞接种4h时，与对照组1相比，实验组2至实验组6的吸光度没有显著性差异，P&本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人成纤维细胞的培养组合物，其特征在于，包括：人成纤维细胞培养基和脐血浆5％～15％。

【技术特征摘要】
2018.01.23 CN 20181007878141.一种人成纤维细胞的培养组合物，其特征在于，包括：人成纤维细胞培养基和脐血浆5％～15％。2.根据权利要求1所述的培养组合物，其特征在于，包括：人成纤维细胞培养基和脐血浆5％～10％。3.根据权利要求1所述的培养组合物，其特征在于，还包括：干细胞条件培养基5～15％。4.根据权利要求3所述的培养组合物，其特征在于，包括：人成纤维细胞培养基、脐血浆5％～10％和干细胞条件培养基5～15％。5.根据权利要求3所述的培养组合物，其特征在于，包括：人成纤维...

【专利技术属性】
技术研发人员：马颖，郑皓钧，
申请(专利权)人：广东颜值科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44