一种牛支原体环介导等温扩增检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种牛支原体环介导等温扩增检测方法，包括以下步骤：(1)引物合成；(2)配制PPLO液体培养基；(3)培养牛支原体；(4)环介导等温扩增反应；(5)环介导等温扩增反应产物分析。本发明专利技术根据牛支原体特异性基因P81设计两对特异性引物建立的牛支原体环介导等温扩增方法，快速、简单、灵敏，能够特异的检测出牛支原体感染。

A bovine mycoplasma loop mediated isothermal amplification detection method and its application

The invention discloses a bovine mycoplasma loop mediated isothermal amplification detection method, which comprises the following steps: (1) primer synthesis; (2) preparation of PPLO liquid culture medium; (3) bovine mycoplasma; (4) a loop mediated isothermal amplification reaction; (5) a loop mediated isothermal amplification reaction product analysis. The present invention design two pairs of specific primers of Mycoplasma bovis loop mediated isothermal amplification method based on Mycoplasma bovis specific gene P81, rapid, simple, sensitive and specific to detect Mycoplasma bovis infection.

【技术实现步骤摘要】
一种牛支原体环介导等温扩增检测方法及其应用
本专利技术涉及动物病原分子检测
，具体涉及一种牛支原体环介导等温扩增检测方法及其应用。
技术介绍
牛支原体(mycoplasmabovis)是一种重要的引起牛呼吸道炎症、乳腺炎和关节炎等多系统炎症的致病性病原体。牛支原体属于柔膜体纲，支原体目，支原体属，1961年Hale等在美国首次从患有乳腺炎的病牛中分离得到。世界多个国家都证实该病原及其相关疾病广泛流传，极大地威胁了养牛业的健康发展。我国自2008年首次在病牛肺脏分离得到M.bovis病原，随后证实该病在全国不同地方广泛流行，导致严重的经济损失。虽然，病毒分离可确诊牛支原体，但是，由于支原体培养周期长、难度大，不能作为快速诊断牛支原体感染的方法。PCR方法虽然快速精确，但是需要在实验室才能完成，不适合临床和基层使用。因此，建立一种高效、快速、特异的检测方法具有重要意义。环介导等温扩增技术(Loop-mediatedisothermalamplificationmethod，LAMP)具有高特异性、高灵敏性、简单、快捷及成本低的特点，很好的解决了上述难题，广泛用于疾病的诊断、检测等领本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛支原体环介导等温扩增检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：(1)引物合成：根据牛支原体特异性基因P81设计两对特异性引物，所述引物组成的DNA序列如下：FIP5’‑TGACCAGATGAAAAGCTAACACCTTATGAAGATCTAGGAAAAGATGCA‑3’，BIP5’‑TGAGGCTCACAAAAATGATAAACACTCAGGGTAACCTGAACCTA‑3’，F3 5’‑CTAAGTGTGGTGGAACTGTA‑3’，B3 5’‑TTTAATTCAGTGATGACTGTGT‑3’；(2)配制PPLO液体培养基；(3)培养牛支原体：取PPLO液体培养基接种牛支原体菌...

【技术特征摘要】
1.一种牛支原体环介导等温扩增检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：(1)引物合成：根据牛支原体特异性基因P81设计两对特异性引物，所述引物组成的DNA序列如下：FIP5’-TGACCAGATGAAAAGCTAACACCTTATGAAGATCTAGGAAAAGATGCA-3’，BIP5’-TGAGGCTCACAAAAATGATAAACACTCAGGGTAACCTGAACCTA-3’，F35’-CTAAGTGTGGTGGAACTGTA-3’，B35’-TTTAATTCAGTGATGACTGTGT-3’；(2)配制PPLO液体培养基；(3)培养牛支原体：取PPLO液体培养基接种牛支原体菌液，在含有5％CO2、37℃温箱中培养3天，待PPLO液体培养基由红色变为橙色并液体透亮后停止培养，使用DNA提取试剂盒提取DNA；(4)环介导等温扩增反应：以FIP、BIP为内引物，F3、B3为外引物对牛支原体DNA进行等温扩增，其反应体系为：1mMdNTPs，2.5μL10×BstBuffer，5UBst聚合酶，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李一权，
申请(专利权)人：吉林省凯博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22