病毒介导的基因沉默的VIGS载体制造技术

本发明专利技术公开了FoMV介导的VIGS载体的构建及其在单子叶植物基因沉默中的应用。本发明专利技术的FoMV介导的VIGS载体为狗尾草花叶病毒(Foxtail Mosaic Virus,FoMV)介导外源片段沉默植物目的基因的载体。本发明专利技术的FoMV介导的VIGS载体克服了重要经济作物遗传转化周期长、步骤繁琐等困难，不仅为单子叶植物的基因功能研究提供强有力的工具，也为大规模地研究单子叶植物功能基因组学提供高效的技术手段，具有重要的科学意义和重大应用价值。

VIGS vector mediated by virus mediated gene silencing

The present invention discloses the construction of FoMV mediated VIGS vector and its application in the gene silencing of single leaf plants. VIGS vector FoMV mediated by the invention for foxtail mosaic virus (Foxtail Mosaic Virus, FoMV) - mediated gene silencing in plant gene. VIGS vector FoMV mediated by the invention overcomes the important economic crop genetic transformation cycle is long and tedious steps, not only provides a powerful tool for gene function research of monocotyledonous plants, for a large-scale study of plant functional genomics provide monocotyledonous efficient technological means, has important scientific significance and application value.

【技术实现步骤摘要】
病毒介导的基因沉默的VIGS载体
本专利技术属于生物
，具体涉及病毒介导的基因沉默的VIGS载体，特别涉及FoMV介导的基因沉默的VIGS载体。
技术介绍
病毒诱导的基因沉默(Virus-inducedGeneSilencing,VIGS)是利用植物对RNA病毒防御机制发展的技术。重组的植物病毒携带被侵染植物的基因序列并侵染植物，病毒侵染将诱发植物内源基因转录后水平的基因沉默(Post-transcriptionalgenesilencing，PTGS)，使植物内源基因的RNA被特异降解，从而诱导植物内源基因沉默，引起表型变化，进而根据表型变异研究目标基因的功能。VIGS技术不需要植物的遗传转化或获取突变体，能简单、快速、瞬时、高效、特异地下调特定基因的表达，VIGS已成为植物基因功能研究领域的强大技术工具。VIGS技术是既是反向遗传学方法又是正向遗传学方法对相关功能基因进行研究。随着VIGS技术发展的不断成熟和研究的不断深入，该技术已经广泛的应用在植物抗性、生长发育以及代谢调控等相关功能基因的研究鉴定，在植物性状改良和植物保护等方面具有良好的发展及应用前景。VIGS在基因功能本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种病毒诱导的基因沉默载体，包括可转移的核苷酸序列和允许所述可转移的核苷酸序列转入植物基因组中的边界序列；所述可转移的核苷酸序列包括启动子、重组FoMV的cDNA序列和终止子；所述重组FoMV的cDNA序列包含至少两个FoMV外壳蛋白CP亚基因组启动子，分别将其命名为第一个CP亚基因组启动子和第二个CP亚基因组启动子；所述第一个CP亚基因组启动子用于启动外源核苷酸序列的转录；所述第二个CP亚基因组启动子用于启动FoMV外壳蛋白CP基因编码序列的转录。

【技术特征摘要】
2016.05.03 CN PCT/CN2016/0808661.一种病毒诱导的基因沉默载体，包括可转移的核苷酸序列和允许所述可转移的核苷酸序列转入植物基因组中的边界序列；所述可转移的核苷酸序列包括启动子、重组FoMV的cDNA序列和终止子；所述重组FoMV的cDNA序列包含至少两个FoMV外壳蛋白CP亚基因组启动子，分别将其命名为第一个CP亚基因组启动子和第二个CP亚基因组启动子；所述第一个CP亚基因组启动子用于启动外源核苷酸序列的转录；所述第二个CP亚基因组启动子用于启动FoMV外壳蛋白CP基因编码序列的转录。2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于：所述载体含有FoMVRNA依赖的RNA聚合酶的基因编码序列；或，所述载体含有FoMV三基因盒的基因编码序列；或，所述第一个CP亚基因组启动子位于所述FoMV三基因盒的基因编码序列的3’端；或，所述第二个CP亚基因组启动子位于所述FoMV外壳蛋白CP的基因编码序列的5’端；或，所述第一个CP亚基因组启动子包含FoMVCP亚基因组启动子的全部或部分序列；或，所述第一个CP亚基因组启动子和所述第二个CP亚基因组启动子包含相同的序列；或，所述第一个亚基因组启动子含有序列1第5202-5371位所示的核苷酸序列；或，所述外源核苷酸序列位于所述第二个CP亚基因组启动子的5’端。3.根据权利要求1或2所述的载体，其特征在于：所述启动子为花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子或含有双增强子的CaMV35S启动子；或，所述终止子可以为Nos终止子；或，所述载体还包括poly-A序列，其位于所述Nos终止子的5’端；或，所述边界序列来源于根癌农杆菌Agrobacteriumtumefaciens；或，所述外源核苷酸序列通过多克隆位点插入所述载体；或，所述多克隆位点位于所述第一个CP亚基因组启动子和所述第二个CP亚基因组启动子之间。4.根据权利要求1-3中任一所述的载体，其特征在于：所述载体为FoMV-sg，其为将序列10所示的DNA分子插入pYL44载体的StuI和XbaI酶切位点间，且保持pYL44载体的其他序列不变得到的载体。5.根据权利要求1-3中任一所述的载体，其特征在于：所述外源核苷酸序列是对应于植物靶基因或靶基因家族的保守序列的一段序列；或，所述外源核苷酸序列是与靶基因反向互补的序列；或，所述外源核苷酸序列的大小为100-300bp；或，所述外源核苷酸序列是靶基因的反向重复序列，所述反向重复序列转录后形成发卡结构；或，所述反向重复序列由靶基因的正向序列和靶...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘玉乐，刘娜，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京,11