蛋白激酶mTOR的S2481位点磷酸化作为肿瘤用药的标志物制造技术

本发明专利技术公开了mTOR S2481位点磷酸化作为肝细胞癌和胃癌个性化用药的标志物。本发明专利技术rapamycin在如下1)‑3)中任一种中的应用：1)制备抑制肿瘤细胞增值的产品；2)制备抑制肿瘤细胞或肿瘤组织中mTOR S2481位点磷酸化水平的产品；3)制备抑制接受器官移植的肿瘤患者复发的产品。本发明专利技术提供的mTOR S2481位点磷酸化水平的高低可以作为肝癌或胃癌病人个性化用药的潜在依据，具有较大的社会意义和经济价值。

【技术实现步骤摘要】
蛋白激酶mTOR的S2481位点磷酸化作为肿瘤用药的标志物
本专利技术涉及生物
，具体涉及蛋白激酶mTOR的S2481位点磷酸化作为肿瘤用药的标志物。
技术介绍
肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是世界范围内最为流行的恶性肿瘤之一。在欧美国家，原发性的肝癌患者较少，且多由其他类型肿瘤的转移到肝脏引发。而在东南亚地区和撒哈拉沙漠以南的地区，特别是在中国，肝癌患者则大多是原发性肝癌。肝癌发生发展的过程与多个基因的突变以及多条信号通路密切相关。针对这些分子机制，肝癌的靶向治疗逐步受到重视。Sorafenib是一类小分子抑制剂，能够抑制多种蛋白激酶的活性，包括VEGFR、PDGFR以及Raf等。在2007年的ASCO会议上，JosepM.Llovet等人公布了sorafenib在肝癌中的临床试验治疗效果。对于肝癌患者，sorafenib相比对照药，其疗效提高了44％，病人的平均存活时间延长了3个月。在2007年11月，美国FDA批准sorafenib作为晚期肝癌的一线用药。Sorafenib的出现无疑给众多肝癌患者带来了希望，但是sorafenib的抗药性使得其对于肝癌的总体治疗效果仍然难以让人满意。有研究表明除了受sorafenib抑制的Raf通路在肝癌发生发展中有重要功能之外，mTOR信号通路与肝癌的发生发展也有密切的关系。JosepM.Llovet等人发现无论是在细胞水平还是动物模型的水平，联合使用Raf通路的抑制剂sorafenib和mTOR通路的抑制剂rapamycin可以展现出更强的抗肿瘤效应。mTORC1能够活化S6K，调控蛋白质的合成过程，促进细胞从G1期向S期转变，从而促进肝癌细胞的增殖。此外，有15-41％的肝癌病人中mTOR通路是过度活化的。在肝癌的动物模型里，mTOR的抑制剂也具有抗肿瘤效应。日本国立癌症研究院的Masuda等人利用大量不同的磷酸化位点特异性抗体，对肝癌患者的标本进行了大规模筛查，发现高水平的p-RPS6S235/236可能是sorafenib治疗无效的分子标记。并且发现在sorafenib抵抗的肝癌细胞里，mTOR信号通路是活化的，mTOR的抑制剂能够显著抑制sorafenib抵抗的肝癌细胞的增殖。首都医科大学附属佑安医院卢实春等人发现雷帕霉素(sirolimus，西罗莫司)能够降低早中期肝癌病人肝移植术后的远期肿瘤复发率，并提高其术后生存率。这些研究成果提示sorafenib和sirolimus都对肝癌患者有一定疗效，但是在什么情况下使用哪一种药物的个性化用药依据目前未知。胃癌在我国各种恶性肿瘤中居首位，胃癌发病有明显的地域性差别，在我国的西北与东部沿海地区胃癌发病率比南方地区明显为高。病因主要有地域环境及饮食生活因素、幽门螺杆菌感染、癌前病变以及遗传和基因等几个因素。蛋白激酶mTOR除了在肝癌组织中高表达以外，有证据表明mTOR在胃癌组织中也有异常表达。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供mTOR信号通路抑制剂的用途。本专利技术提供的mTOR信号通路抑制剂在如下1)-3)中至少一种中的应用：1)制备抑制肿瘤细胞或肿瘤组织中mTORS2481位点磷酸化水平的产品；2)制备抑制肿瘤细胞增值的产品；3)制备抑制器官移植后肿瘤患者复发的产品。上述应用中，所述肿瘤细胞或肿瘤组织为mTORS2481位点磷酸化水平高的肿瘤细胞或肿瘤组织。所述肿瘤细胞为肝癌细胞或胃癌细胞；所述肿瘤组织为肝癌组织或胃癌组织。所述肿瘤细胞或肿瘤组织为mTORS2481位点磷酸化水平高的肿瘤细胞或肿瘤组织；mTORS2481位点磷酸化水平高的肿瘤细胞为HCCLM6细胞；mTORS2481位点磷酸化水平高的肿瘤组织为中期或晚期病人的肿瘤组织。mTORS2481位点磷酸化水平高的肿瘤细胞或肿瘤组织为满足如下的样品：样品的质谱数据通过生物信息学的计算方法，符合如下1)-3)全部：1)、肿瘤细胞或肿瘤组织中mTOR底物位点占磷酸化网络位点的比值，这个值>14％2)、肿瘤细胞或肿瘤组织中mTOR底物位点数目与癌旁中比值，这个值>1.23)、做卡方检验的p值<0.05。反之，不符合1)-3)全部，则不为mTORS2481位点磷酸化水平高。上述应用中，所述产品为药物。所述mTOR信号通路抑制剂为rapamycin；本专利技术的另一个目的是提供检测mTORS2481位点磷酸化水平的物质的用途。本专利技术提供的检测mTORS2481位点磷酸化水平的物质在制备辅助检测待测组织是否为肿瘤组织的产品中的应用。上述应用中，所述检测mTORS2481位点磷酸化水平的物质为免疫组织化学检测试剂或WesternBlot检测试剂；所述免疫组织化学检测试剂或WesternBlot检测试剂均包括mTORS2481磷酸化抗体；所述检测mTORS2481位点磷酸化水平的物质还包括抗IgG抗体；具体为RabbitIgGHorseradishPeroxidase-conjugatedAntibody或mouseIgGHorseradishPeroxidase-conjugatedAntibody。检测待测肿瘤细胞或待测肿瘤患者中mTORS2481位点磷酸化水平物质在制备用于筛选和/或确定rapamycin抑制该肿瘤用量的产品中的应用也是本专利技术保护的范围。检测待测肿瘤细胞或待测肿瘤患者中mTORS2481位点磷酸化水平物质在制备指导肿瘤患者用药的产品中的应用也是本专利技术保护的范围。上述指导肿瘤患者用药的应用中，肿瘤患者中mTORS2481位点磷酸化水平越高的患者，给予rapamycin或者给予更高量的rapamycin。mTORS2481位点作为靶点在筛选、开发和/或设计预防和/或治疗肿瘤产品中的应用也是本专利技术保护的范围。上述应用中，所述肿瘤为肝癌或胃癌。上述mTORS2481位点为mTOR氨基酸序列第2481位；上述mTOR氨基酸序列为序列1。本专利技术的实验证明，rapamycin抑制肿瘤细胞或肿瘤组织中mTORS2481位点磷酸化水平，尤其对mTORS2481位点磷酸化水平高的肿瘤或肿瘤细胞抑制率高，且rapamycin抑制肝移植术后接受Rapamycin药物治疗肝癌患者复发，其术后致死率和复发率与mTORS2481位点磷酸化水平呈现一定的负相关性。因此，mTORS2481位点磷酸化水平的高低可以作为肝癌或胃癌病人个性化用药的潜在依据，具有较大的社会意义和经济价值。附图说明图1为磷酸化蛋白质组数据显示相比正常肝脏组织在HCCLM6细胞中活性显著升高的激酶。图2为免疫组化检测肝癌和癌旁组织芯片中mTOR的表达染色图。图3为免疫组化检测肝癌和癌旁组织芯片中mTOR的表达柱状图。图4为免疫组化检测肝癌和癌旁组织芯片中mTORS2481位点磷酸化的表达染色图。图5为免疫组化检测肝癌和癌旁组织芯片中mTORS2481位点磷酸化的表达柱状图。图6为westernblot检测HepG2和HCCLM6细胞mTOR及S2481位点磷酸化的表达。图7为MTT法检测HepG2和HCCLM6细胞对于rapamycin的敏感程度。图8为westernblot检测HepG2和HCCLM6细胞对于rapamycin的敏本文档来自技高网...

【技术保护点】
mTOR信号通路抑制剂在如下1)‑3)中至少一种中的应用：1)制备抑制肿瘤细胞或肿瘤组织中mTOR S2481位点磷酸化水平的产品；2)制备抑制肿瘤细胞增值的产品；3)制备抑制器官移植后肿瘤患者复发的产品。

【技术特征摘要】
1.mTOR信号通路抑制剂在如下1)-3)中至少一种中的应用：1)制备抑制肿瘤细胞或肿瘤组织中mTORS2481位点磷酸化水平的产品；2)制备抑制肿瘤细胞增值的产品；3)制备抑制器官移植后肿瘤患者复发的产品。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述肿瘤细胞或肿瘤组织为mTORS2481位点磷酸化水平高的肿瘤细胞或肿瘤组织。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述肿瘤细胞为肝癌细胞或胃癌细胞；所述肿瘤组织为肝癌组织或胃癌组织。4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：所述mTOR信号通路抑制剂为rapamycin；所述产品为药物。5.检测mTORS2481位点磷酸化水平的物...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐平，薛宇，徐锋，刘泽先，衣泰龙，翟琳辉，徐忠伟，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11