外周血单个核细胞的分离方法技术

本发明专利技术公开了一种外周血单个核细胞的分离方法，包括以下步骤：(1)将外周血与杜氏磷酸缓冲液混匀得到稀释后的外周血；将淋巴细胞分离液装于离心管中并遮光保存；(2)倾斜装有淋巴细胞分离液的离心管，使淋巴细胞分离液的液面与水平面呈50°～70°角；将稀释后的外周血沿离心管的侧壁加入到淋巴细胞分离液中得到混合液；稀释后的外周血与淋巴细胞分离液的体积比为1～2：1；(3)装有混合液的离心管离心分离并取白膜层，即得到外周血单个核细胞层。该分离方法，操作简单，适合大量样本的分离；能够实现无菌操作，得到的外周血单个核细胞适宜临床应用；对分离的外周血单个核细胞的损伤很小，细胞得率高，分离过程中也不会受到干扰。

Method for isolation of peripheral blood mononuclear cells

The invention discloses a method for separating mononuclear cells in a peripheral blood, which comprises the following steps: (1) the peripheral blood and from phosphate buffer mixing to obtain peripheral blood diluted; the lymphocyte separation liquid installed in the centrifuge tube and shading preservation; (2) with lymph cell centrifugal inclination the liquid separation tube, so that the level of lymphocyte separation liquid and the horizontal plane 50 degrees to 70 degrees; the peripheral blood diluted along the side walls of the centrifuge tube to get lymphocyte separation liquid mixture; separation of peripheral blood lymphocytes and diluted the volume ratio of 1 ~ 2:1 (3; a mixed liquid pipe) centrifugal centrifugal separation and albuginea, the peripheral blood mononuclear cells. The operation of the separation method, simple, suitable for mass sample separation; to achieve aseptic operation, the peripheral blood mononuclear cells suitable for clinical application; on the separation of peripheral blood mononuclear cell damage cells is very small, high yield, no interference in the separation process.

【技术实现步骤摘要】
外周血单个核细胞的分离方法
本专利技术涉及细胞分离
，特别地，涉及一种外周血单个核细胞的分离方法。
技术介绍
在临床研究中，针对特定细胞的功能学和生物学特性的检查常常依赖细胞的分离技术，从外周血以及机体各种体液，例如胸水、腹水中分离单个核细胞是体外进行淋巴细胞免疫学研究和细胞学实验的重要前提。目前热门的细胞免疫治疗疗法是引领未来疾病治疗的新技术，该疗法需要采集人体自身免疫细胞，经过体外培养使其扩增，再经过基因工程改造、特殊培养等处理后，使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞、促进组织器官再生和机体康复等治疗功效，从而达到治疗疾病的目的。该疗法具有疗效良好、副作用小、个性化等独特的优势，为癌症、血液病、心血管病、糖尿病、老年痴呆症等疾病提供了良好的治疗效果，在未来治疗中必将担当重要角色。其中，外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell，简称PBMC)是参与机体免疫应答反应的一类重要免疫细胞群。PBMC主要包含淋巴细胞和单核细胞，其中淋巴细胞占比80％～90％，淋巴细胞包括T淋巴细胞和B淋巴细胞两大类，它们根据其表面标记物和功能不同又可以分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种外周血单个核细胞的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将外周血与杜氏磷酸缓冲液混匀得到稀释后的外周血；将淋巴细胞分离液装于离心管中并遮光保存；(2)倾斜装有所述淋巴细胞分离液的离心管，使所述淋巴细胞分离液的液面与水平面呈50°～70°角；将所述步骤(1)中得到的稀释后的外周血沿所述离心管的侧壁加入到所述淋巴细胞分离液中得到混合液；所述稀释后的外周血与所述淋巴细胞分离液的体积比为1～2：1；(3)将所述步骤(2)中装有混合液的所述离心管放置在水平离心机中离心分离并取白膜层，即得到所述外周血单个核细胞层。

【技术特征摘要】
1.一种外周血单个核细胞的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将外周血与杜氏磷酸缓冲液混匀得到稀释后的外周血；将淋巴细胞分离液装于离心管中并遮光保存；(2)倾斜装有所述淋巴细胞分离液的离心管，使所述淋巴细胞分离液的液面与水平面呈50°～70°角；将所述步骤(1)中得到的稀释后的外周血沿所述离心管的侧壁加入到所述淋巴细胞分离液中得到混合液；所述稀释后的外周血与所述淋巴细胞分离液的体积比为1～2：1；(3)将所述步骤(2)中装有混合液的所述离心管放置在水平离心机中离心分离并取白膜层，即得到所述外周血单个核细胞层。2.根据权利要求1所述的外周血单个核细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤(1)中外周血与杜氏磷酸缓冲液的体积比为1：1。3.根据权利要求1所述的外周血单个核细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤(2)中将稀释后的外周血加入到所述淋巴细胞分离液中时，所述淋巴细胞分离液的液面与水平面呈60°角。4.根据权利要求1所述的外周血单个核细胞的分离方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙俊，张金保，陈燕，
申请(专利权)人：妙顺上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31