外周血细胞的无血清培养基制造技术

本发明专利技术涉及一种外周血细胞的无血清培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RPMI 1640培养基；所述添加组分及其浓度如下：白细胞介素‑2，35‑50mg/L；肝素，1‑2g/L；转铁蛋白，25‑30mg/L；人重组胰岛素，20‑30mg/L；M型植物血球凝集素，10‑20mg/L；L‑谷氨酰胺，7‑10g/L；碳酸氢钠，2‑4g/L；各添加组分的浓度以所述外周血细胞的无血清培养基的总体积为基准。与现有技术相比，本发明专利技术的外周血细胞的无血清培养基能够满足外周血细胞中的白细胞快速、大量的增殖的需求，特别适合用于外周血细胞的培养，具有较好的增殖效果和细胞存活率。

Serum free medium for peripheral blood cells

Serum free medium, the invention relates to a peripheral blood cell, including basal medium and adding components, wherein the medium for RPMI based 1640 medium; the addition of components and concentrations are as follows: interleukin 2, 35 50mg/L; heparin, 1 2g/L 25; transferrin, 30mg/L; recombinant human insulin, 20 30mg/L; M phytohemagglutinin, 10 20mg/L; L glutamine, 7 sodium bicarbonate, 2 10g/L; 4g/L; the added component concentration in the peripheral blood cells in serum-free culture medium as the reference volume. Compared with the prior art, no base can meet in the peripheral blood cells of white blood cells, a large number of rapid proliferation of the invention needs cultured peripheral blood cells, especially suitable for the culture of peripheral blood cells, with better survival rate and cell proliferation effect.

【技术实现步骤摘要】
外周血细胞的无血清培养基
本专利技术涉及一种外周血细胞的无血清培养基，属于细胞培养

技术介绍
细胞培养现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域，成为最重要的基础科学之一。人类外周血细胞培养广泛用于医疗检验，尤其应用在遗传学，是重要基本检验技术之一。目前普遍使用的外周血细胞的培养基采用传统的含牛血清培养基，然而牛血清高成本，且存在病毒污染风险、牛血清成分干扰实验研究，皆可能导致检验数据不准确，因此无血清培养基和无血清培养是细胞培养的一大趋势。然而，采用了无血清培养基之后，在培养基中添加哪些适合外周血细胞生长的血清替代成分，是本领域技术人员需要解决的技术问题。
技术实现思路
鉴于相关技术的上述问题和/或其他问题，本专利技术一方面提供了一种外周血细胞的无血清培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RPMI1640培养基；所述添加组分及其浓度如下：白细胞介素-2，35-50mg/L；肝素，1-2g/L；转铁蛋白，25-30mg/L；人重组胰岛素，20-30mg/L；M型植物血球凝集素，10-20mg/L；L-谷氨酰胺，7-10g/L；碳酸氢钠，2-4g/L；各添加组分的浓度以所述外周血细胞的无血清培养基的总体积为基准。优选的，以所述外周血细胞培养基的总体积为基准，所述RPMI1640培养基的干粉量为16-18g/L。优选的，以所述外周血细胞培养基的总体积为基准，所述RPMI1640培养基的干粉量为16.8g/L。优选的，所述添加组分中，所述白细胞介素-2的浓度为42mg/L，所述M型植物血球凝集素的浓度为15.5mg/L。优选的，所述添加组分中，所述肝素的浓度为1.26g/L，所述转铁蛋白的浓度为28mg/L，所述人重组胰岛素的浓度为27mg/L，所述L-谷氨酰胺的浓度为8.5g/L，所述碳酸氢钠的浓度为3.2g/L。优选的，所述添加组分还包括庆大霉素和链霉素，所述庆大霉素的浓度为2×105–3.5×105IU/L，所述链霉素的浓度为2×105-4×105IU/L。优选的，所述添加组分还包括酚红钠，所述酚红钠的浓度为6-8mg/L。优选的，所述无血清培养基的pH值为7.2～7.6。本专利技术的外周血细胞的无血清培养基，采用RPMI1640培养基作为基础培养基以及特定的添加组分的组合，尤其是添加了特定浓度范围的白细胞介素-2与M型植物血球凝集素的组合，能够满足外周血细胞中的白细胞快速、大量的增殖的需求，特别适合用于外周血细胞的培养，具有较好的增殖效果和细胞存活率。附图说明图1为应用例1的细胞分裂相检测图片；图2为对比例1的细胞分裂相检测图片。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术并不限于这些具体实施方式。在本专利技术的一个具体实施方案中，一种外周血细胞的无血清培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RPMI1640培养基；所述添加组分及其浓度如下：白细胞介素-2，35-50mg/L；肝素，1-2g/L；转铁蛋白，25-30mg/L；人重组胰岛素，20-30mg/L；M型植物血球凝集素，10-20mg/L；L-谷氨酰胺，7-10g/L；碳酸氢钠，2-4g/L；各添加组分的浓度以所述外周血细胞的无血清培养基的总体积为基准。本专利技术的专利技术人经过大量的研究试验发现，当外周血细胞的无血清培养基采用RPMI1640培养基作为基础培养基以及上述特定的添加组分的组合，尤其是添加了特定浓度范围的白细胞介素-2与M型植物血球凝集素的组合，能够满足外周血细胞中的白细胞快速、大量的增殖的需求，特别适合用于外周血细胞的培养，具有较好的增殖效果和细胞存活率。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述添加组分中，所述白细胞介素-2的浓度为42mg/L，所述M型植物血球凝集素的浓度为15.5mg/L。在本专利技术的另一个更优选的实施方案中，所述添加组分中，所述肝素的浓度为1.26g/L，所述转铁蛋白的浓度为28mg/L，所述人重组胰岛素的浓度为27mg/L，所述L-谷氨酰胺的浓度为8.5g/L，所述碳酸氢钠的浓度为3.2g/L；当这些物质都同时满足上述浓度时，外周血细胞的培养效果更佳。实施例1实施例1的外周血细胞的无血清培养基的配制过程如下：步骤1)：在无菌条件下将合成的RPMI1640干粉在电子天平上称取168g后置于消毒容器内，加9L纯化水稀释后搅拌均匀获得基础培养基。步骤2)：将添加组分：32g碳酸氢钠、85gL-谷氨酰胺、420mg白细胞介素-2、12.6g肝素、280mg转铁蛋白、270mg人重组胰岛素、155mgM型植物血球凝集素、2.5g庆大霉素(相当于2.5×105IU/L)和3g链霉素(相当于3×105IU/L)、以及70mg酚红钠盐依次加入步骤1)获得的基础培养基中，充分混匀。步骤3)：过滤灭菌，再调节pH值至7.4±0.2，最后加入纯化水将体积调节至10L；步骤4)：培养基配制完成后，过滤灭菌，分装、封口，最后冷藏(-20℃环境)备用。应用例1首先采集人外周血，然后在无菌操作工作台将0.25mL人外周血加入到装有5mL实施例1的外周血细胞无血清培养基的培养瓶(市售的Corning品牌T25型号的细胞培养瓶)中混匀，置37℃，5％CO2培养箱中培养。效果数据对比例1：采用市售的外周血细胞的无血清培养基，培养过程与应用例1相同，具体不再赘述。分别检测应用例1和对比例1的细胞增殖速率以及细胞存活率。应用例1和对比例1，均在培养1、2和3天后，分别取样培养液，进行细胞浓度的检测(每组检测三次，取平均值)，检测结果参见下表1。表1另一方面，取应用例1和对比例1(培养3天后)的细胞培养液，检测细胞分裂相，检测结果分别参见图1和图2。综上结果可以看出，本专利技术实施例的外周血细胞的无血清培养基的细胞增殖速度与存活率都高于市售的外周血细胞的无血清培养基，产生的分裂相也明显多于市售的外周血细胞的无血清培养基。应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施方式中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本专利技术的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本专利技术的保护范围，凡未脱离本专利技术技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种外周血细胞的无血清培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RPMI 1640培养基；所述添加组分及其浓度如下：白细胞介素‑2，35‑50mg/L；肝素，1‑2g/L；转铁蛋白，25‑30mg/L；人重组胰岛素，20‑30mg/L；M型植物血球凝集素，10‑20mg/L；L‑谷氨酰胺，7‑10g/L；碳酸氢钠，2‑4g/L；各添加组分的浓度以所述外周血细胞的无血清培养基的总体积为基准。

【技术特征摘要】
1.一种外周血细胞的无血清培养基，其包括基础培养基和添加组分，其中，所述基础培养基为RPMI1640培养基；所述添加组分及其浓度如下：白细胞介素-2，35-50mg/L；肝素，1-2g/L；转铁蛋白，25-30mg/L；人重组胰岛素，20-30mg/L；M型植物血球凝集素，10-20mg/L；L-谷氨酰胺，7-10g/L；碳酸氢钠，2-4g/L；各添加组分的浓度以所述外周血细胞的无血清培养基的总体积为基准。2.如权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于：以所述外周血细胞培养基的总体积为基准，所述RPMI1640培养基的干粉量为16-18g/L。3.如权利要求2所述的无血清培养基，其特征在于：以所述外周血细胞培养基的总体积为基准，所述RPMI1640培养基的干粉量为16.8g/L。4.如权利要求2所述的无血清培养基，其特征在于：所述添加组分...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜学恒，苏恩筠，张智培，薛宜青，熊延狮，
申请(专利权)人：上海逍鹏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31