整合转基因的位点定向CRISPR/重组酶组合物和方法技术

本申请公开了靶向的嵌合多肽、其组合物、表达载体及其使用方法，用于产生转基因细胞、组织、植物和动物。本发明专利技术的组合物、载体和方法也可用于基因治疗和细胞治疗技术。所述嵌合多肽包括CRISPR‑Cas结构域和重组酶结构域。

Site directed CRISPR/ recombinant enzyme compositions and methods for integrating transgenes

The present invention discloses targeting chimeric polypeptides, compositions thereof, expression vectors, and methods of use for producing transgenic cells, tissues, plants, and animals. The compositions, vectors, and methods of the invention can also be used in gene therapy and cell therapy techniques. The chimeric polypeptide including CRISPR Cas domain and recombinase domain.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】整合转基因的位点定向CRISPR/重组酶组合物和方法相关申请的交叉引用本申请要求2014年12月5日提交的美国临时专利申请62/088,440的优先权，其公开内容在此参考并入。专利
本专利技术通常涉及用于将转基因整合到细胞基因组中的组合物和方法。
技术介绍
来源于成簇的、规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)-Cas系统的RNA导向的Cas9核酸酶提供了用于编辑多种生物体的基因组的通用工具。然而，目前基于CRISPR-Cas系统的技术具有有限的插入大片段DNA的能力，并且无法在非分裂细胞(如神经元)或具有DNA同源重组缺陷的细胞中进行基于同源性的编辑，例如靶向转基因插入。因此，仍然需要新的基因组工程技术，所述技术可负担得起，易于建立并且能够在非分裂细胞或具有DNA同源重组缺陷的细胞中编辑基因组。专利技术简述本申请公开了靶向的嵌合多肽，包括其组合物、表达载体及其使用方法，用于产生转基因细胞、组织、植物和动物。本专利技术的组合物、载体和方法也可用于基因治疗和细胞治疗技术。一方面，本公开涉及嵌合多肽。该多肽包括：1)CRISPR-Cas结构域和2)重组酶结构域。在各种实施方式中，CRIS本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽，其包含：(i)能够结合向导RNA的CRISPR‑Cas结构域，其中所述向导RNA能够与靶DNA序列杂交；和(ii)包含位点特异性重组酶、其突变体或其片段的重组酶结构域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.05 US 62/088,4401.一种多肽，其包含：(i)能够结合向导RNA的CRISPR-Cas结构域，其中所述向导RNA能够与靶DNA序列杂交；和(ii)包含位点特异性重组酶、其突变体或其片段的重组酶结构域。2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述CRISPR-Cas结构域包含II型Cas9蛋白或其片段。3.根据权利要求1所述的多肽，其中所述CRISPR-Cas结构域不具有内切核酸酶活性。4.根据权利要求1所述的多肽，其中所述CRISPR-Cas结构域是失去DNA切割活性的Cas9(dCas9)。5.根据权利要求1所述的多肽，其中所述CRISPR-Cas结构域包含SEQID1的氨基酸序列。6.根据权利要求1所述的多肽，其中所述位点特异性重组酶是酪氨酸重组酶。7.根据权利要求6所述的多肽，其中所述酪氨酸重组酶选自环化重组酶、翻转重组酶和λ整合酶。8.根据权利要求1所述的多肽，其中所述位点特异性重组酶是丝氨酸重组酶。9.根据权利要求8所述的多肽，其中所述丝氨酸重组酶选自γ-δ解离酶、Tn3解离酶、Sin解离酶、Gin转化酶、Hin转化酶、Tn5044解离酶、IS607转座酶和整合酶。10.根据权利要求9所述的多肽，其中所述整合酶选自Bxb1、wBeta、BL3phiR4、A118、TG1、MR11、phi370、SPBc、TP901-1、phiRV、FC1、K38、phiBT1和phiC31。11.根据权利要求1所述的多肽，其中重组酶结构域是重组酶或其突变体的催化...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·雁如·蔡，
申请(专利权)人：应用干细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US