脑震宁薄层色谱鉴别方法技术

本发明专利技术公开了一种脑震宁薄层色谱鉴别方法，属于中药提取物和制剂的质量控制技术领域。本发明专利技术提供了脑震宁中陈皮的鉴别，供试品制备方法简便、快速、准确、环保，目标成分分离效果好，使点样操作易于进行，且点样量可控，保证了供试品中所含生药可量化，分离度高，取样量小，点样量可控，灵敏度高，干扰较少。本发明专利技术提供了脑震宁中牡丹皮的鉴别，使用甲醇超声提取，水饱和正丁醇萃取，中性氧化铝拌样，即可获得供试品，点样量少，节省时间，对环境污染少，操作更加快速简便。本发明专利技术提供的方法专属性强，重现性、耐用性好，可用于脑震宁提取物和制剂中相应药味的鉴别。

Identification of strychnine by thin layer chromatography

The invention discloses a method for identification of strychnine by thin layer chromatography, belonging to the technical field of the quality control of the extracts and preparations of Chinese medicine. The present invention provides concussion identification Ning in the orange peel, the sample preparation method is simple, rapid, accurate and objective component environmental protection, good separation effect, the sample is easy to operate, and the sample volume control, ensure the tested products containing crude drug in quantitative, high degree of separation, the sampling volume is small the sample volume, controllable, high sensitivity, less interference. The present invention provides differential shock Moutan Ning in the brain, the use of ultrasonic extraction of methanol, water saturated butanol, neutral alumina mixed samples, you can get the sample, sample amount, time saving, less environmental pollution, more rapid and convenient operation. The method provided by the invention has high specificity and reproducibility, good durability, can be used to identify the corresponding shock ingredients in the preparation of brain extracts and nanjing.

【技术实现步骤摘要】
脑震宁薄层色谱鉴别方法
本专利技术涉及一种脑震宁薄层色谱鉴别方法，属于中药提取物及制剂的质量控制

技术介绍
脑震宁是依据专利号为931007410的专利公开的处方，制成的用于预防和治疗脑震荡、脑外伤后综合征、神经外科术后恢复期的提取物及中成药，可制成颗粒剂、胶囊、片剂、软胶囊等一切适宜剂型。为了控制脑震宁制剂的质量，我们对其进行了薄层鉴别研究。脑震宁颗粒是依据专利处方制成的颗粒。目前有糖颗粒收录于《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂（第十七册）》第230页（标准号：WS3-B-3312-98）。该标准中提出：其处方为：当归200g、地黄200g、牡丹皮150g、川芎150g、地龙150g、丹参375g、茯苓250g、陈皮250g、竹茹250g、炒酸枣仁250g、柏子仁250g；制法为：以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与其余丹参等七味加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.35～1.38(55℃)的清膏，加入适量的蔗糖和糊精，用乙醇制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成1000g即得；规格为：每袋装10g。其鉴别方法有2个，具体为：（1）取本品10g，研细，加甲醇30mL，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3%盐酸溶液20mL使溶解，置沸水浴上回流1小时，放冷，用苯20mL提取，弃去苯液，酸水用5g氯化钠饱和，振摇，用醋酸乙酯提取2次，每次20mL，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加无水乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸（8:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。（2）取本品10g，研细，加甲醇30mL，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水50mL，加热使溶解，放冷，用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，用2%碳酸钠溶液提取3次，每次15mL，分取碱液，用盐酸调节pH值至2～3，用苯15mL提取，弃去苯液，再用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-冰醋酸-甲醇（30:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。目前无糖颗粒，执行标准为国家食品药品监督管理局发布的：WS3-B-3312-98-1，每袋含生药量与《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂（第十七册）》第230页收录的“脑震宁颗粒（标准号：WS3-B-3312-98）相同，鉴别方法也相同。脑震宁提取物是依据专利号为931007410的专利公开的处方制成制成的精制物。脑震宁制剂是是依据专利号为931007410的专利公开的处方制成制成一切适宜剂型的制剂。经过山西振东安特生物制药有限公司的深入研究，对已有的鉴别方法进行改进并增加，即对丹参、当归、川芎、酸枣仁、陈皮五味药进行了鉴别分析，公开并授权了专利（专利号：ZL201310046420.9），然而专利中陈皮的鉴别方法步骤繁琐，对环境污染较多。目前已公开发表的其他药材、制剂中陈皮的鉴别方法中，供试品制备方法较繁琐，需要加热回流（中国专利CN200710072856.X），或者乙酸乙酯萃取（中国专利CN201410222870.3），或者水饱和正丁醇萃取（中国专利CN200910020802.8），违背了质量检测中快速检测的原则，且在采用上述以公开的其他药材或制剂的橙皮苷鉴别方法鉴别脑震宁制剂时，均未达到理想状况，或者所制备的供试品中含糖较高，无法控制点样量，或者通过展开剂展开后，干扰较多。本专利技术中所述脑震宁陈皮薄层鉴别方法中，供试品制备过程中通过加入乙醇，产生意想不到的效果，解决了上述问题，使点样量可控，且目标成分分离效果好，显色后斑点清晰。脑震宁是治疗脑震荡、脑外伤后综合征的唯一药品，具有独特性，决定了它的处方的独特性，药味及比例均有不同，现有的关于芍药苷的鉴别方法对脑震宁中牡丹皮的鉴别并无助益，脑震宁鉴别方法中尚没有丹皮的鉴别方法。根据现有的已公开的其他中药材或者制剂中芍药苷的鉴别方法，供试品制备需要加热有机溶剂回流（中国专利CN200610201379.8、CN200810117041.3），或者水饱和正丁醇与正丁醇饱和的水先后提取（中国专利CN200810046038.7）；萃取后的溶剂通过中性氧化铝柱洗脱（中国专利CN200810018308.3），步骤繁多，且不环保。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种脑震宁薄层色谱鉴别方法，该方法专属性强，重现性、耐用性好，可用于该中药提取物及制剂中的相应药味鉴别。脑震宁是由生地、当归、川芎、地龙、丹皮、丹参、茯苓、陈皮、竹茹、炒酸枣仁、柏子仁十一味中药组成。脑震宁制剂的处方为：生地7-12份当归1-12份川芎5-10份地龙5-10份丹皮5-10份丹参15-20份茯苓10-15份陈皮10-15份竹茹6-11份酸枣仁（炒）6-11份柏子仁6-11份。根据所述处方，制成含以上11味中药的脑震宁提取物或制剂。本专利技术提供了上述脑震宁薄层色谱鉴别方法，包括以下鉴别方法中的任一种或者两种：（1）脑震宁中陈皮的鉴别：取脑震宁提取物或制剂0.2~20g，加甲醇5~100mL，超声处理10～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1~10mL使溶解，加入3~30mL无水乙醇，过滤，滤液蒸干，加甲醇0.1~20mL制成供试品溶液；另取橙皮苷对照品加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；吸取供试品及对照品溶液各0.5~20μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为71~130:10~25:5~19的乙酸乙酯-甲醇-水的混合溶剂为展开剂展开至4~6cm处，取出，晾干，再以体积比为9~30:5~20:5~20:0.5~2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开至8~12cm，取出，晾干；喷以质量分数为0.1~5%三氯化铝乙醇溶液，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；（2）脑震宁中牡丹皮的鉴别：取脑震宁提取物或制剂0.2~20g，加甲醇5~100mL，超声处理10～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5～40mL溶解，用水饱和正丁醇提取1～5次，每次5～40mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加0.1～20mL甲醇溶解，加入中性氧化铝0.1～5g，摇匀，静置，取上清液，制成供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成含0.2~2mg/mL的对照品溶液；吸取供试品溶液和对照品溶液各0.5~20μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为19～59:5～20:0.5～5的氯仿-甲醇-水的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数1~10%本文档来自技高网...

【技术保护点】
脑震宁薄层色谱鉴别方法，其特征在于包括以下鉴别方法中的任一种或者两种：（1）脑震宁中陈皮的鉴别：取脑震宁提取物或制剂0.2~20g，加甲醇5~100mL，超声处理10～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1~10mL使溶解，加入3~30mL无水乙醇，过滤，滤液蒸干，加甲醇0.1~20 mL制成供试品溶液；另取橙皮苷对照品加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；吸取供试品及对照品溶液各0.5~20μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为71~130:10~25:5~19的乙酸乙酯‑甲醇‑水的混合溶剂为展开剂展开至4~6cm处，取出，晾干，再以体积比为9~30:5~20: 5~20:0.5~3的甲苯‑乙酸乙酯‑甲酸‑水的上层溶液为展开剂，展开至8~12cm，取出，晾干；喷以质量分数为0.1~5%三氯化铝乙醇溶液，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；（2）脑震宁中牡丹皮的鉴别：取脑震宁提取物或制剂0.2~20g，加甲醇5~100mL，超声处理10～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5～40mL溶解，用水饱和正丁醇提取1～5次，每次5～40mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加0.1～20mL甲醇溶解，加入中性氧化铝0.1～5g，摇匀，静置，取上清液，制成供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成含0.2~2mg/mL的对照品溶液；吸取供试品溶液和对照品溶液各0.5~20μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为19～59:5～20:0.5～5的氯仿‑甲醇‑水的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数1~10%香草醛硫酸溶液显色，60~120℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。...

【技术特征摘要】
1.脑震宁薄层色谱鉴别方法，其特征在于包括以下鉴别方法中的任一种或者两种：（1）脑震宁中陈皮的鉴别：取脑震宁提取物或制剂0.2~20g，加甲醇5~100mL，超声处理10～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1~10mL使溶解，加入3~30mL无水乙醇，过滤，滤液蒸干，加甲醇0.1~20mL制成供试品溶液；另取橙皮苷对照品加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；吸取供试品及对照品溶液各0.5~20μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为71~130:10~25:5~19的乙酸乙酯-甲醇-水的混合溶剂为展开剂展开至4~6cm处，取出，晾干，再以体积比为9~30:5~20:5~20:0.5~3的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开至8~12cm，取出，晾干；喷以质量分数为0.1~5%三氯化铝乙醇溶液，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；（2）脑震宁中牡丹皮的鉴别：取脑震宁提取物或制剂0.2~20g，加甲醇5~100mL，超声处理10～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5～40mL溶解，用水饱和正丁醇提取1～5次，每次5～40mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加0.1～20mL甲醇溶解，加入中性氧化铝0.1～5g，摇匀，静置，取上清液，制成供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成含0.2~2mg/mL的对照品溶液；吸取供试品溶液和对照品溶液各0.5~20μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为19～59:5～20:0.5～5的氯仿-甲醇-水的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数1~10%香草醛硫酸溶液显色，60~120℃加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2.根据权利要求1所述的脑震宁薄层色谱鉴别方法，其特征在于：所述香草醛硫酸溶液配制方法为：取香草醛，加到体积分数为10%的硫酸乙醇溶液中，制成含香草醛质量分数为1~10%的香草醛硫酸溶液。3.根据权利要求1所述的脑震宁薄层色谱鉴别方法，其特征在于：所述脑震宁是由生地、当归、川芎、地龙、丹皮、丹参、茯苓、陈皮、竹茹、炒酸枣仁、柏子仁十一味中药组成。4.根据权利要求3所述的脑震宁薄层色谱鉴别方法，其特征在于：所述十一味中药成分的重量配比为：生地7-12份当归1-12份川芎5-10份地龙5-10份丹皮5-10份丹参15-20份茯苓10-15份陈皮10-15份竹茹6-11份炒酸枣仁6-11份柏子仁6-11份。5.根据权利要求1所述的脑震宁薄层色谱鉴别方法，其特征在于：所述脑震宁包括提取物或片剂、胶囊、颗粒、软胶囊、分散片、口服液制剂中的一种。6.根据权利要求1~5任一项所述的脑震宁薄层色谱鉴别方法，其特征在于：包括以下鉴别方法中的任一种或者两种：（1）脑震宁中陈皮的鉴别：取脑震宁提取物或制剂0.4~10g，加甲醇10~60mL，超声处理15～50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1~5mL使溶解，加入3~15mL无水乙醇，过滤，滤液蒸干，加0.2~10mL甲醇制成供试品溶液；另取橙皮苷对照品加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；吸取供试品及对照品溶液各1~10μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为80~120:12~22:7~17的乙酸乙酯-甲醇-水的混合溶剂为展开剂展开至4~6cm处，取出，晾干，再以体积比为12~28:8~18:8~18:0.6~2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开至8.5~11.5cm，取出，晾干；喷以质量分数0.5~4.5%三氯化铝乙醇溶液，晾干，置紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；（2）脑震宁中牡丹皮的鉴别：取脑震宁提取物或制剂0.4~10g，加甲醇10~60mL，超声处理15～50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水8～30mL溶解，用水饱和正丁醇提取1～4次，每次10～30mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加0.2~10mL甲醇溶解，加入中性氧化铝0.2～3g，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李昆，刘海霞，朱平，秦正国，范玛莉，秦文杰，杨晓宁，赵丽敏，
申请(专利权)人：山西振东安特生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：山西,14