一种防治鸡传染性支气管炎的中药制剂的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种防治鸡传染性支气管炎的中药制剂的检测方法，其由以下原料药制备而成的：黄芩、连翘、栀子、金银花、广藿香、柴胡、浙贝母的中药制剂的质量检测方法，包括鉴别和含量测定项目。本发明专利技术建立的七味药的薄层色谱鉴别方法，斑点清晰，重现性好，阴性无干扰，可作为本中药组合物的质量控制方法；建立的黄芩苷的含量测定方法，精密度高，测量结果准确，可有效的控制产品的质量，从而确保其临床疗效。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种防治鸡传染性支气管炎的中药的中药制剂的检测方法，属于药物检测的

技术介绍
鸡传染性支气管炎(IB)是靠传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性的高度接触性呼吸道传染病，因传染性支气管炎早期仅见鸡感染，所以叫鸡传染性支气管炎。目前对于鸡传染性支气管炎尚无有效的治疗方法，主要采用预防免疫手段来保护鸡群，但由于该病毒血清类型较多，临床疫苗免疫时有失败，且病毒常会产生新的变异株，造成疫苗免疫失败风险高，对IB预防效果差，加之抗生素容易产生耐药性，易残留等。对于临床发病鸡群目前主要采用对症治疗，传统中药主要是粉散剂，制剂工艺简单，产品可控性较差，临床使用效果时好时坏。本专利技术涉及的一种防治鸡传染性支气管炎的中药组合物，功能疏散风热、利咽消肿、清肺止咳，主要用于IB的治疗。该药的开发，大大弥补了国内治疗IB市场的不足。该中药组合物由以下原料药制备而成的：黄芩、连翘、栀子、金银花、广藿香、柴胡、浙贝母；按照制药领域常规方法制成片剂、胶囊剂、颗粒剂等口服剂型。中药复方制剂，成分复杂，质量受药材来源、加工、贮藏等影响，易造成批间差异大等，对兽药养殖带来一定的影响。由于中药材因产地或收获季节的不同，其有效成分的含量存在较大差异，为更好的控制本药物的质量，稳定药物的疗效，对该中药组合物的质量指标和质量检测方法进行研究。薄层色谱法操作简单，专属性强，近年来被作为药品定性分析的常用方法，应用十分广泛。高效液相色谱法因其精密度高、专属性强，重复性、回收率良好，近年来被作为非挥发性成分定量分析的常用方法。故本研究拟采用薄层色谱法对各药味进行定性鉴别，采用HPLC法测定方中君药黄芩中黄芩苷的含量。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能定量控制制剂的产品质量，又操作简便的防治鸡传染性支气管炎的中药制剂的检测方法为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案如下：一种防治鸡传染性支气管炎的中药制剂的检测方法，该中药制剂由以下重量份数的原料药制备而成的：10-20份黄芩、10-20份连翘、10-20份栀子、10-20份广藿香、5-15份金银花、5-15份浙贝母、1-10份柴胡，其特征在于，所述检测方法包括薄层色谱鉴别和含量测定项目，其中，鉴别是对制剂中黄芩和金银花，连翘，栀子，广藿香，柴胡，浙贝母的薄层色谱鉴别，具体为：1)黄芩、金银花薄层色谱鉴别取含黄芩生药材量0.3g或含金银花生药材量0.2g的样品，加甲醇溶解并稀释至10mL，摇匀，过滤，滤液作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品适量，加70％乙醇制成浓度为1.0mg/mL的黄芩苷对照品溶液；取绿原酸对照品适量，加乙醇制成浓度为0.1mg/mL绿原酸对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述黄芩苷对照品溶液4μl、绿原酸对照品溶液1μl、供试品溶液2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。2)连翘薄层色谱鉴别当连翘为提取入药时，取相当于含连翘生药材量1.5g的样品固体，加样品量2倍量热水使溶解，离心，取上清液，加水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇萃取液，再用氨试液洗2次，20mL/次，用水洗2次，20mL/次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，用中性氧化铝(100～200目，3g)拌匀，加40％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；当连翘为提取入药时，取相当于含连翘生药材量1.5g的样品液体，加水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇萃取液，再用氨试液洗2次，20mL/次，用水洗2次，20mL/次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，用中性氧化铝(100～200目，3g)拌匀，加40％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；当连翘为原粉入药时，取相当于含连翘生药材量1.5g的样品固体，加样品量5倍量热水煎煮30分钟，过滤，滤液浓缩至15mL，加水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇萃取液，再用氨试液洗2次，20mL/次，用水洗2次，20mL/次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，用中性氧化铝(100～200目，3g)拌匀，加40％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1.5g，用150mL水煎煮30分钟，过滤液浓缩至15mL，用水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯-甲酸-水(4∶5∶6∶0.6∶0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；3)栀子薄层色谱鉴别取步骤2)中连翘薄层色谱鉴别下供试品溶液；另取栀子苷对照品适量，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；4)广藿香薄层色谱鉴别当广藿香为原粉入药时，取相当于含广藿香生药材1g的样品固体，加样品量2倍量的正己烷，超声提取15分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液；当广藿香为提取后入药时，取相当于含广藿香生药材4.5g的样品液体，加正己烷萃取两次，每次加样品量的2倍量，合并正己烷液，挥至1mL，作为供试品溶液；当广藿香为提取后入药时，取相当于含广藿香生药材4.5g的样品固体，加正己烷50mL，超声提取15分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液；另取广藿香对照药材1g，加正己烷30mL，超声提取15分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液、供试品溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-丙酮(9∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；5)柴胡薄层色谱鉴别取步骤2)中连翘薄层色谱鉴别下供试品溶液；取柴胡对照药材0.5g，加水30mL回流1.5小时，过滤，滤液按供试品溶液制备方法制备，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液、供试品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)零下20℃以下放置1小时的下层溶液为展开剂，在10℃以下展开，取出，晾干，喷以10％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。置日光下和紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；6)浙贝母薄层鉴别当样品为固体时，取相当于含浙贝母生药材1g的样品粉末，加样品重量1倍的浓氨试液，混匀，放置0.5小时，加样品量2～10倍量三氯甲烷，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种防治鸡传染性支气管炎的中药制剂的检测方法，该中药制剂由以下重量份数的原料药制备而成的：100‑200份黄芩、100‑200份连翘、100‑200份栀子、100‑200份广藿香、50‑150份金银花、50‑150份浙贝母、10‑100份柴胡，其特征在于，所述检测方法包括薄层色谱鉴别和含量测定项目，其中，鉴别是对制剂中黄芩和金银花，连翘，栀子，广藿香，柴胡，浙贝母的薄层色谱鉴别，具体为：1)黄芩、金银花薄层色谱鉴别取含黄芩生药材量0.3g或含金银花生药材量0.2g的样品，加甲醇溶解并稀释至10mL，摇匀，过滤，滤液作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品适量，加70％乙醇制成浓度为1.0mg/mL的黄芩苷对照品溶液；取绿原酸对照品适量，加乙醇制成浓度为0.1mg/mL绿原酸对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述黄芩苷对照品溶液4μl、绿原酸对照品溶液1μl、供试品溶液2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。2)连翘薄层色谱鉴别当连翘为提取入药时，取相当于含连翘生药材量1.5g的样品固体，加样品量2倍量热水使溶解，离心，取上清液，加水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇萃取液，再用氨试液洗2次，20mL/次，用水洗2次，20mL/次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，用中性氧化铝(100～200目，3g)拌匀，加40％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；当连翘为提取入药时，取相当于含连翘生药材量1.5g的样品液体，加水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇萃取液，再用氨试液洗2次，20mL/次，用水洗2次，20mL/次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，用中性氧化铝(100～200目，3g)拌匀，加40％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；当连翘为原粉入药时，取相当于含连翘生药材量1.5g的样品固体，加样品量5倍量热水煎煮30分钟，过滤，滤液浓缩至15mL，加水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇萃取液，再用氨试液洗2次，20mL/次，用水洗2次，20mL/次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，用中性氧化铝(100～200目，3g)拌匀，加40％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1.5g，用150mL水煎煮30分钟，过滤液浓缩至15mL，用水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯‑丙酮‑乙酸乙酯‑甲酸‑水(4∶5∶6∶0.6∶0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；3)栀子薄层色谱鉴别取步骤2)中连翘薄层色谱鉴别下供试品溶液；另取栀子苷对照品适量，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯‑丙酮‑甲酸‑水(5∶5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；4)广藿香薄层色谱鉴别当广藿香为原粉入药时，取相当于含广藿香生药材1g的样品固体，加样品量2倍量的正己烷，超声提取15分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液；当广藿香为提取后入药时，取相当于含广藿香生药材4.5g的样品液体，加正己烷萃取两次，每次加样品量的2倍量，合并正己烷液，挥至1mL，作为供试品溶液；当广藿香为提取后入药时，取相当于含广藿香生药材4.5g的样品固体，加正己烷50mL，超声提取15分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液；另取广藿香对照药材1g，加正己烷30mL，超声提取15分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液、供试品溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)‑丙酮(9∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；5)柴胡薄层色谱鉴别取步骤2)中连翘薄层色谱鉴别下供试品溶液；取柴胡对照药材0.5g，加水30mL回流1.5小时，过滤，滤液按供试品溶液制备方法制备，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液、供试品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷‑甲醇‑水(13∶7∶2...

【技术特征摘要】
1.一种防治鸡传染性支气管炎的中药制剂的检测方法，该中药制剂由以下重量份数的原料药制备而成的：100-200份黄芩、100-200份连翘、100-200份栀子、100-200份广藿香、50-150份金银花、50-150份浙贝母、10-100份柴胡，其特征在于，所述检测方法包括薄层色谱鉴别和含量测定项目，其中，鉴别是对制剂中黄芩和金银花，连翘，栀子，广藿香，柴胡，浙贝母的薄层色谱鉴别，具体为：1)黄芩、金银花薄层色谱鉴别取含黄芩生药材量0.3g或含金银花生药材量0.2g的样品，加甲醇溶解并稀释至10mL，摇匀，过滤，滤液作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品适量，加70％乙醇制成浓度为1.0mg/mL的黄芩苷对照品溶液；取绿原酸对照品适量，加乙醇制成浓度为0.1mg/mL绿原酸对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述黄芩苷对照品溶液4μl、绿原酸对照品溶液1μl、供试品溶液2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。2)连翘薄层色谱鉴别当连翘为提取入药时，取相当于含连翘生药材量1.5g的样品固体，加样品量2倍量热水使溶解，离心，取上清液，加水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇萃取液，再用氨试液洗2次，20mL/次，用水洗2次，20mL/次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，用中性氧化铝(100～200目，3g)拌匀，加40％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；当连翘为提取入药时，取相当于含连翘生药材量1.5g的样品液体，加水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇萃取液，再用氨试液洗2次，20mL/次，用水洗2次，20mL/次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，用中性氧化铝(100～200目，3g)拌匀，加40％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；当连翘为原粉入药时，取相当于含连翘生药材量1.5g的样品固体，加样品量5倍量热水煎煮30分钟，过滤，滤液浓缩至15mL，加水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇萃取液，再用氨试液洗2次，20mL/次，用水洗2次，20mL/次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，用中性氧化铝(100～200目，3g)拌匀，加40％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1.5g，用150mL水煎煮30分钟，过滤液浓缩至15mL，用水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯-甲酸-水(4∶5∶6∶0.6∶0.6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；3)栀子薄层色谱鉴别取步骤2)中连翘薄层色谱鉴别下供试品溶液；另取栀子苷对照品适量，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；4)广藿香薄层色谱鉴别当广藿香为原粉入药时，取相...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛卫宁，尹朋，梁冰，
申请(专利权)人：中悦民安北京科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11