一种侧柏叶TLC快速鉴别方法技术

本发明专利技术涉及一种侧柏叶TLC快速鉴别方法，取待测样品，加水、盐酸、乙酸乙酯，水浴加热回流水解，趁热滤过，滤液分液、水洗、蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；采用薄层色谱法，紫外光灯下检视。具有高效、便捷、重现性好、色谱清晰，各斑点分离良好等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种侧柏叶TLC快速鉴别方法
本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种侧柏叶TLC快速鉴别方法。
技术介绍
侧柏叶又名柏叶、丛柏叶、扁柏、云片柏等，是医家所重视的治血良药。中医认为侧柏叶味苦，性微寒，无毒，入心、肝、大肠经。具有凉血、止血、祛内湿、散肿毒之功。可治吐血、鼻出血、尿血、血痢、崩漏、风湿痛、咳嗽、烫伤等症。根据科学研究表明，侧柏叶含大量的挥发油，油中主要成分为侧柏烯、小茴香酮等，叶中还含有钾、钠、磷、氮、钙、镁、锰和锌等多种微量元素。药理实验表明，侧柏叶煎剂能够明显的缩短出血时间及凝血时间，除此以外，还有镇咳、平喘、祛痰、镇静等作用。相关实验表明，侧柏叶对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、卡他球菌、白喉杆菌、伤寒杆菌等均有很好的抑制作用，有乌须发、止血、止咳喘的功效。目前，对中药材的理化鉴别方法，主要包括荧光法，微量升华法，显色，沉淀、泡沫反应，钙盐、钠盐等鉴别反应，薄层色谱法（TLC）等。其中，由于TLC法处理简单，成本低，可同时对多个成分进行比较，不需使用复杂仪器，应用范围最为广泛。如现行2015年版中国药典侧柏叶项下收载了法定的侧柏叶TLC鉴别方法，但由于该法中采用的索氏提取步骤，至少需6小时，加热回流步骤也需要1小时，实际操作过程中存在操作步骤繁琐，操作时间长、有机试剂用量多导致成本较高等缺点，无法满足实际应用中快速、简便的需求。因此，建立一种快速、准确，高效的侧柏叶TLC鉴别方法是很有必要的。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术中存在的上述问题，提供一种侧柏叶TLC快速鉴别方法，具有操作简单、快速、准确，高效、成本低廉、重现性好等优点，可用于对侧柏叶药材及饮片质量快速检测。本专利技术技术方案如下：一种侧柏叶TLC快速鉴别方法，步骤包括：（1）取待测样品粉末2～4g，加水20～30mL，加盐酸2～4mL，加乙酸乙酯30～50mL，水浴加热回流水解20～40min，趁热滤过，滤液置分液漏斗，分液，取乙酸乙酯层，水洗3次，每次10mL，水浴蒸干，残渣加甲醇4～6mL溶解，作为供试品溶液；（2）另取槲皮素标准品，加乙醇配制为0.05～0.15mg/mL的溶液，作为对照品溶液；（3）薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2～4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为（4:2:1）～（6:2:1）的甲苯-乙酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干，喷以1wt％的三氯化铝-乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视。优选地，步骤（1）中，各原料用量为待测样品粉末3g、水25mL、盐酸3mL、乙酸乙酯40mL、甲醇5mL。优选地，步骤（1）中，水浴加热回流水解30min。优选地，步骤（2）中，加乙醇配制为0.1mg/mL的溶液。优选地，步骤（3）中，吸取供试品溶液和对照品溶液各3μL，甲苯-乙酸乙酯-甲酸的体积比为5:2:1。优选地，步骤（3）中，所述的薄层色谱法试验为2015年版中国药典四部0502薄层色谱法。所述侧柏叶TLC快速鉴别方法，供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，则待测样品为侧柏叶。侧柏叶的止血有效成分通常认为是槲皮素和鞣质，实际上，本专利技术通过实验表明侧柏叶中没有槲皮素，只有槲皮苷，现有检测方法中，也都是将槲皮苷水解成槲皮素后进行鉴定。现有技术中，以药典收载的侧柏叶TLC鉴别方法为例，是将侧柏叶中所含叶绿素成分进行提取后，再对其所含黄酮类成分槲皮苷进行酸水解，水解成槲皮素，再用乙酸乙酯萃取，水洗，浓缩后进行鉴定。由于其样品制备过程涉及索氏提取，耗时至少6h，且以乙醚为提取液，操作具一定的危险性和不适性，黄酮类成分提取、水解共计耗时1.5h。本专利技术方法将黄酮类成分提取和水解步骤合并，直接用水、盐酸、乙酸乙酯加热回流提取样品，不需要索氏提取等步骤，只需30min，亦能将槲皮苷水解成槲皮素，加之叶绿素成分的存在，使得TLC图谱中反映的样品的信息量较药典法更为详细，效果更好，因此本专利技术方法更适合于侧柏叶的TLC鉴定。本专利技术技术方案相对于现有技术有益效果为：1、高效、便捷、重现性好：①节约时间：该法较药典法省去药典中索氏提取（至少6h）、加热回流1h的步骤，整体可将鉴定时间缩短4/5。②节省试剂：上述步骤中的有机试剂均可节省，尤其是减少了乙醚的使用，减少操作过程的不适性和危险性。③重现性好：该法相对简单、易操作，具有较强的专属性和良好的重现性。2、色谱清晰，各斑点分离良好：色谱图斑点清晰，信息量大，供试品色谱中各斑点分离好，重现性好。用该方法鉴别侧柏叶，快速、准确，高效。附图说明图1为实施例1侧柏叶TLC鉴别图谱，图中1-4,6-9均为侧柏叶，5-槲皮素对照品；图2为实施例2侧柏叶TLC鉴别图谱，图中1-4,6-9均为侧柏叶，5-槲皮素对照品；图3为实施例3侧柏叶TLC鉴别图谱，图中1-4,6-9均为侧柏叶，5-槲皮素对照品；图4为对比例1侧柏叶TLC鉴别图谱，图中1-5,7-10均为侧柏叶，6-槲皮素对照品；图5为对比例2侧柏叶TLC鉴别图谱，图中1-4,6-9均为侧柏叶，5-槲皮素对照品；图6为对比例3侧柏叶TLC鉴别图谱，图中1-4,6-9均为侧柏叶，5-槲皮素对照品。具体实施方式下面通过具体实施例来进一步说明本专利技术方案及有益效果。实施例1一种侧柏叶TLC快速鉴别方法，步骤包括：（1）取待测样品粉末3g，加水25mL，加盐酸3mL，加乙酸乙酯40mL，水浴加热回流水解30min，趁热滤过，滤液置分液漏斗，分液，取乙酸乙酯层，水洗3次，每次10mL，水浴蒸干，残渣加甲醇5mL溶解，作为供试品溶液；（2）另取槲皮素标准品，加乙醇配制为0.1mg/mL的溶液，作为对照品溶液；（3）照2015年版中国药典四部0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5:2:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干，喷以1wt％的三氯化铝-乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，TLC薄层图谱见图1，待测样品为侧柏叶。由图1可见，8批侧柏叶中均检出槲皮素，且斑点清晰，分离度良好。实施例2一种侧柏叶TLC快速鉴别方法，步骤包括：（1）取待测样品粉末2g，加水20mL，加盐酸2mL，加乙酸乙酯30mL，水浴加热回流水解20min，趁热滤过，滤液置分液漏斗，分液，取乙酸乙酯层，水洗3次，每次10mL，水浴蒸干，残渣加甲醇4mL溶解，作为供试品溶液；（2）另取槲皮素标准品，加乙醇配制为0.05mg/mL的溶液，作为对照品溶液；（3）照2015年版中国药典四部0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:2:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干，喷以1wt％的三氯化铝-乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，TLC薄层图谱见图1，待测样品为侧柏叶。由图2可见，8批侧柏叶中均检出槲皮素，且斑点清晰，分离度良好。实施例3一种侧柏叶TLC快速鉴别方法，步骤包括：（1）取待测样品粉末4g，加水30mL，加盐酸4mL，加本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种侧柏叶TLC快速鉴别方法，其特征在于，步骤包括：（1）取待测样品粉末2～4 g，加水20～30mL，加盐酸2～4mL，加乙酸乙酯30～50mL，水浴加热回流水解20～40min，趁热滤过，滤液置分液漏斗，分液，取乙酸乙酯层，水洗3次，每次10mL，水浴蒸干，残渣加甲醇4～6mL溶解，作为供试品溶液；（2）另取槲皮素标准品，加乙醇配制为0.05～0.15mg/mL（优选 0.1mg/mL）的溶液，作为对照品溶液；（3）薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2～4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为（4:2:1）～（6:2:1）的甲苯‑乙酸乙酯‑甲酸的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干，喷以1wt％的三氯化铝‑乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视。

【技术特征摘要】
1.一种侧柏叶TLC快速鉴别方法，其特征在于，步骤包括：（1）取待测样品粉末2～4g，加水20～30mL，加盐酸2～4mL，加乙酸乙酯30～50mL，水浴加热回流水解20～40min，趁热滤过，滤液置分液漏斗，分液，取乙酸乙酯层，水洗3次，每次10mL，水浴蒸干，残渣加甲醇4～6mL溶解，作为供试品溶液；（2）另取槲皮素标准品，加乙醇配制为0.05～0.15mg/mL（优选0.1mg/mL）的溶液，作为对照品溶液；（3）薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2～4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为（4:2:1）～（6:2:1）的甲苯-乙酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂展开，取出，晾干，喷以1wt％的三氯化铝-乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视。2.根据权利要求1所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：石典花，孙立立，张军，戴衍朋，
申请(专利权)人：山东省中医药研究院，
类型：发明
国别省市：山东,37