用于基因甲基化检测的引物和探针、采样方法、试剂盒技术

本发明专利技术提供一种用于基因甲基化检测的引物和探针、采样方法、试剂盒，同时检测甲基化基因的正链和反链。其中，引物包括特异性甲基化正链引物和特异性甲基化反链引物；特异性甲基化正链引物包括正链正向引物和正链反向引物，特异性甲基化反链引物包括反链正向引物和反链反向引物；探针包括特异性甲基化正链探针和特异性甲基化反链探针；此外，还设有正链非甲基化封闭引物和反链非甲基化封闭引物。本发明专利技术具有特异性强、灵敏度高、受污染小、操作简单快速、安全性等优点，检测结果具有较好的准确性和重复性、能有效提高基因甲基化检测情况，适用于临床。

Primers and probes for gene methylation detection, sampling methods, and kits

The invention provides a primer and a probe for gene methylation detection, a sampling method, a kit, and simultaneously detects the positive and negative chains of methylated genes. The primers include methylation specific primers and positive strand specific methylation chain primers; methylation specific primers including positive chain chain chain is a forward primer and reverse primer, methylation specific primers including trans trans trans forward primer and reverse primer probe; including methylation specific positive strand probe and methylation specific anti chain probe; in addition, it also has a chain of non methylated primers and closed chain unmethylated closed primer. The invention has strong specificity, high sensitivity, little pollution, simple and quick operation, safety and other advantages, the detection results with good accuracy and repeatability, can effectively improve the detection of gene methylation, suitable for clinical.

【技术实现步骤摘要】
用于基因甲基化检测的引物和探针、采样方法、试剂盒
本专利技术属于基因检测领域，更具体地，是一种用于基因甲基化检测的引物和探针、采样方法、试剂盒。
技术介绍
DNA甲基化水平和模式的改变是肿瘤发生的一个重要因素。基因启动子高甲基化以后基因表达就会减弱甚至关闭，相当于基因的开关。恶性肿瘤中基因的开关多由DNA甲基化调控，几乎所有肿瘤中都会伴随DNA甲基化的异常改变，且常常高甲基化与低甲基化并存。如肿瘤细胞中抑癌基因启动子通常为高甲基化，导致抑癌基因表达受抑制丧失抑癌功能，从而促进癌症的发生。低甲基化通常是整个基因组低甲基化或原癌基因启动子低甲基化，前者导致染色体结构稳定性降低，促进癌变发生，后者则会激活原癌基因，诱导细胞癌变。SEPT9基因的V2转录本启动子甲基化已被证实与CRC(结直肠癌)的发生密切相关，甲基化导致基因转录受到抑制，从而影响基因的正常表达，并使其抑癌功能丧失，影响囊泡运输、丝状结构形成、细胞分裂和凋亡等功能。大量临床研究证实，不同于正常结直肠组织，CRC组织中可检出明显异常的SEPT9基因甲基化，SEPT9基因甲基化是CRC早期发生、发展过程中的特异性分子标记物。SEP本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于基因甲基化检测的引物和探针，其特征在于，引物包括特异性甲基化正链引物和特异性甲基化反链引物；特异性甲基化正链引物包括正链正向引物，一条选自A组和正链反向引物，一条选自B组，特异性甲基化反链引物包括反链正向引物，一条选自C组和反链反向引物，一条选自D组；探针包括特异性甲基化正链探针，一条选自E组和特异性甲基化反链探针，一条选自F组；具体为：A组:正链正向引物：GATTCGTTGTTTATTAGTTATTATGTTTCATTCAGCTGAGCCAGGGGAAGGTGGGTGTTGGGTTB组:正链反向引物：AAATAATCCCATCCAACTAGGGCAGCGGCGAGGAACCCGTCCCG...

【技术特征摘要】
1.用于基因甲基化检测的引物和探针，其特征在于，引物包括特异性甲基化正链引物和特异性甲基化反链引物；特异性甲基化正链引物包括正链正向引物，一条选自A组和正链反向引物，一条选自B组，特异性甲基化反链引物包括反链正向引物，一条选自C组和反链反向引物，一条选自D组；探针包括特异性甲基化正链探针，一条选自E组和特异性甲基化反链探针，一条选自F组；具体为：A组:正链正向引物：GATTCGTTGTTTATTAGTTATTATGTTTCATTCAGCTGAGCCAGGGGAAGGTGGGTGTTGGGTTB组:正链反向引物：AAATAATCCCATCCAACTAGGGCAGCGGCGAGGAACCCGTCCCGCGCCAAAE组:特异性甲基化正链探针：TTAACCGCGAAATCCGACTCCGGCGGCTAGCTCTGCACTCGCGGACGTGTTGGAGAC组:反链正向引物：TAGTAATTTATTTTGTTAGTTTAGTTATTTAGTTGCGCGTTGATCAGAGTTAGTCGTCGGAGGAGD组:反链反向引物：CATCATATCCCACCAACCTCCTCCGACGACTAACTCTATACGAATACGAAAACCTAATCF组:特异性甲基化反链探针：AATTCGCGTATACCGTCATGTAGCGGGTCGCGCGGAGGGTTTTTTTCGCGCGTTGCGTTTTC。2.根据权利要求1所述的用于基因甲基化检测的引物和探针，其特征在于，设有正链非甲基化封闭引物，一条选自G组和反链非甲基化封闭引物，一条选自H组；具体为：G组:正链非甲基化封闭引物：GTTATTATGTTGGATTTTGTGGTTAATGTGTAGGAGTTAGGGGGTTTAGGGGTTTTTTTGGTGGTTGGTTGTTGCGGTCGCGGACGTGTTGGAGAGGATTTH组:反链非甲基化封闭引物：CATCATATCAAACCCCACAATCAACACACAACGTTGATTGTGGGGTTTGATATGAT...

【专利技术属性】
技术研发人员：喻德华，梁秋菊，
申请(专利权)人：深圳市优圣康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44