一种严重弱精子症新致病基因及其应用制造技术

一种严重弱精子症新致病基因及其应用，涉及致病基因，首次发现一种严重弱精子症新致病基因SPAG17。以严重弱精子症一个患病家系及患病个体为研究对象，对家系中的患病个体进行了外显子组测序和比较，发现患者SPAG17基因存在基因突变。利用这个突变可以对严重弱精子症进行检测。

A new disease causing gene of severe asthenospermia and its application

A novel disease causing gene of severe asthenospermia and its use, involving pathogenic genes, for the first time discovered a novel gene SPAG17 of severe asthenospermia. In this study, a pedigree with severe asthenospermia, a diseased family and a diseased individual, were sequenced and compared with an individual subgroup of the diseased individuals, and mutations in the SPAG17 gene were observed. Using this mutation, severe oligozoospermia can be detected.

【技术实现步骤摘要】
一种严重弱精子症新致病基因及其应用
本专利技术涉及致病基因，尤其是涉及一种严重弱精子症新致病基因及其应用。
技术介绍
严重弱精子症是一种较常见的导致男性不育的畸形精子症，是一种与遗传、生活方式等因素有关的疾病，其主要临床特征是精子运动能力的严重丧失。国外早期的分子方面发病机制研究发现AKAP3、AKAP4、SLC26A8、DNAH1、CATSPER2、GALNTL5等基因发生了突变(1.TakasakiN,TachibanaK,OgasawaraS,MatsuzakiH,HagiudaJ,IshikawaH,MochidaK,InoueK,OgonukiN,OguraA,NoceT,ItoC,ToshimoriKandNarimatsuH.AheterozygousmutationofGALNTL5affectsmaleinfertilitywithimpairmentofspermmotility.ProcNatlAcadSciUSA.2014；111(3):1120-1125；2.DiramiT,RodeB,JollivetM,DaSilvaN,EscalierD,GaitchN,NorezC,TufferyP,WolfJP,BecqF,RayPF,DμlioustE,GaconG,BienvenuTandToureA.MissensemutationsinSLC26A8,encodingasperm-specificactivatorofCFTR,areassociatedwithhumanasthenozoospermia.AmJHumGenet.2013；92(5):760-766.)，并导致精子尾部形态及运动异常。目前严重弱精子症的基因突变谱尚未完全发现，基因型和表现型的关系也不明确。目前单基因疾病的研究开始大量采用全外显子组测序(whole-exomesequencing)及全基因组测序(whole-genomesequencing)的方法，这两种方法被成功的应用于发现稀有单基因疾病的致病基因。全外显子组测序及全基因组测序技术已被证明为降低稀有单基因疾病候选基因甚至发现其致病基因的有力、有效手段。仅通过对几个很少的个体(包括患者及正常对照)的全外显子组或基因组进行测序来筛选与疾病相关的变异，其成功率大为提升。因此本领域对严重弱精子症的研究尚不清晰，对造成该疾病的原因更不明了，因此本领域迫切需要对严重弱精子症的致病机理进行研究，找到新致病基因及突变位点。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供通过外显子组测序的方法确定严重弱精子症的新致病基因。本专利技术的第二目的在于提供严重弱精子症的生物标记物。本专利技术的第三目的在于提供突变的SPAG17基因。本专利技术的第四目的在于提供突变的SPAG17蛋白。本专利技术的第五目的在于提供一种检测严重弱精子症的方法。本专利技术的第六目的在于提供通过PCR检测SPAG17基因或SPAG17蛋白突变中使用的引物对。本专利技术的第七目的在于提供与突变SPAG17基因互补的核酸探针。本专利技术的第八目的在于提供检测突变SPAG17基因或SPAG17蛋白的试剂盒。本专利技术的第九目的在于提供检测突变SPAG17基因的试剂盒。本专利技术的第十目的在于提供一种严重弱精子症新致病基因的应用。所述通过外显子组测序的方法确定严重弱精子症的新致病基因。所述严重弱精子症的生物标记物，即突变的SPAG17基因或SPAG17蛋白，所述生物标记物是具有选自如下的突变的SPAG17基因或SPAG17蛋白：在外显子30中错义突变(c.4343G>A；p.R1448Q)。所述突变的SPAG17基因为SEQIDNO:1的序列中具有以下突变：在外显子30中错义突变(c.4343G>A)。所述突变的SPAG17蛋白为SEQIDNO:2的序列中具有以下突变：在外显子30中错义突变(p.R1448Q)。所述一种检测严重弱精子症的方法，包括检测受试者的SPAG17基因或SPAG17蛋白中是否存在突变位点，若有突变位点，则所述受试者被鉴定为患有严重弱精子症或易患严重弱精子症，所述突变位点选自如下一种：在外显子30中错义突变(c.4343G>A；p.R1448Q)。所述SPAG17蛋白为SEQIDNO:2的序列表示。所述SPAG17基因为SEQIDNO:1的序列表示。所述检测严重弱精子症的方法包括如下至少一组引物扩增的步骤：SEQIDNO:3和SEQIDNO:4。所述检测严重弱精子症的方法中检测突变位点通过选自如下进行：测序、电泳、核酸杂交、原位杂交、PCR、逆转录酶链反应和变性高效液相色谱。所述通过PCR检测SPAG17基因或SPAG17蛋白突变中使用的引物对，所述突变是选自如下一种：在外显子30中错义突变(c.4343G>A；p.R1448Q)，其中所述引物对分别基于选自如下的位置前后设计，使得扩增该位置(编号基于SPAG17的cDNA序列)：4343。所述与突变SPAG17基因互补的核酸探针，所述突变是选自如下一种：在外显子30中错义突变(c.4343G>A；p.R1448Q)，所述探针与突变SPAG17基因的互补区包括选自如下的位置(编号基于SPAG17的cDNA序列)：4343。所述检测突变SPAG17基因或SPAG17蛋白的试剂盒，包含一组或多组引物对，其中所述突变是选自如下一种：在外显子30中错义突变(c.4343G>A；p.R1448Q)，其中所述引物对分别基于选自如下的位置前后设计，使得其扩增产物涵盖该位置(编号基于SPAG17的cDNA序列)：4343。所述检测突变SPAG17基因或SPAG17蛋白的试剂盒包含选自如下的至少一组引物：SEQIDNO:3和SEQIDNO:4。所述检测突变SPAG17基因的试剂盒，包含一个或多个核酸探针，所述突变是选自如下一种：在外显子30中错义突变(c.4343G>A；p.R1448Q)，所述探针与突变SPAG17基因上包含选自如下的位置的区域互补(编号基于SPAG17的cDNA序列)：4343。所述一种严重弱精子症新致病基因的应用。本专利技术将为严重弱精子症的发病机制研究奠定重要基础，有可能为严重弱精子症的患者治疗提供全新的理论依据。具体实施方式在本专利技术中，采用本领域通用表示法表示突变。例如，突变(c.4343G>A；p.R1448Q)中，c表示cDNA，p表示蛋白质，DNA水平的突变对应蛋白质水平的突变。野生型SPAG17基因的cDNA序列如SEQIDNO:1所示。SEQIDNO:2：野生型SPAG17蛋白的氨基酸序列。提及基因序列，本领域技术人员应当理解，实际包括互补双链的任意一条，或者两条。虽然多数情况下至给出了一条链，但实际上也公开了与之互补的另一条链。例如提及SPAG17基因的cDNA序列，实际上包括该序列以及其互补序列。例如，提及SEQIDNO:1，实际包括其互补序列。本领域技术人员还可以理解，利用一条链可以检测另一条链，反之亦然。本申请中的基因序列包括DNA形式或RNA形式，公开其中一种，意味着另一种也被公开。例如提及SPAG17基因的cDNA序列，实际也包括相应的RNA序列。实施例1确定严重弱精子症的致病基因。本专利技术收集本文档来自技高网...

【技术保护点】
通过外显子组测序的方法确定严重弱精子症的新致病基因。

【技术特征摘要】
1.通过外显子组测序的方法确定严重弱精子症的新致病基因。2.严重弱精子症的生物标记物，其特征在于即突变的SPAG17基因或SPAG17蛋白，所述生物标记物是具有选自如下的突变的SPAG17基因或SPAG17蛋白：在外显子30中错义突变(c.4343G>A；p.R1448Q)。3.突变的SPAG17基因，其特征在于为SEQIDNO:1的序列中具有以下突变：在外显子30中错义突变(c.4343G>A)；突变的SPAG17蛋白，为SEQIDNO:2的序列中具有以下突变：在外显子30中错义突变(p.R1448Q)。4.一种检测严重弱精子症的方法，其特征在于包括检测受试者的SPAG17基因或SPAG17蛋白中是否存在突变位点，若有突变位点，则所述受试者被鉴定为患有严重弱精子症或易患严重弱精子症，所述突变位点选自如下一种：在外显子30中错义突变(c.4343G>A；p.R1448Q)；所述SPAG17蛋白为SEQIDNO:2的序列表示；所述SPAG17基因为SEQIDNO:1的序列表示。5.检测严重弱精子症的方法，其特征在于包括如下至少一组引物扩增的步骤：SEQIDNO:3和SEQIDNO:4。6.检测严重弱精子症的方法，其特征在于检测突变位点通过选自如下进行：测序、电泳、核酸杂交、原位杂交、PCR、逆转录酶链反应和变性高效液相色谱。7.通过PCR检测SPAG17基因或SPAG17蛋白突变中使用的引...

【专利技术属性】
技术研发人员：沙艳伟，李萍，李琳，张玲，许晓慧，邓冰冰，何雪梅，林津，叶雅萍，高海杰，陈静，王雄，
申请(专利权)人：厦门市妇幼保健院厦门市计划生育服务中心，首都医科大学附属北京妇产医院，烟台毓璜顶医院，
类型：发明
国别省市：福建,35